目的 探讨联合检测外周血CD59,血富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体 5(leucine-repeat-rich G-protein coupled receptor 5,LGR5)和细胞角蛋白 7(cytokeratin 7,CK7)对宫颈癌前病变进展风险的预测价值.方法 回顾性分析2019年1月～2022年1月西安市第三医院收治的342例宫颈癌前病变患者的临床资料,根据病情进展情况分为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)Ⅰ组(n=89),CINⅡ组(n=128),CIN Ⅲ组(n=65)和宫颈癌组(n=60).统计四组一般资料,CD59,LGR5 和CK7,Logistic回归方程分析癌前病变进展至宫颈癌影响因素,绘制决策分析(decision curve analysis,DCA)曲线分析CD59,LGR5和CK7联合临床获益度,绘制临床影响曲线(clinical impact curve,CIC)分析在各个阈概率下,CD59,LGR5 和CK7 联合预测价值与实际情况符合度.结果 宫颈癌组、CIN Ⅲ组、CINⅡ组和CINⅠ组患者HPV感染率(50.00%,7.70%,1.56%,0.00%)及外周血CD59蛋白(55.35%±6.38%,46.17%±5.12%,42.24%±4.13%,38.35%±4.02%),LGR5基因(0.91±0.25,0.38±0.08,0.25±0.06,0.15±0.04),CK7 基因(10.12±3.04,7.96±1.55,7.12±1.48,6.50±1.36)表达水平比较,宫颈癌组＞CIN Ⅲ组＞CINⅡ组＞CINⅠ组,差异具有统计学意义(χ2=118.290,F=165.265,567.350,51.982,均P＜0.05);Logistic回归显示,CD59(OR:3.483,95%CI:1.614～7.518),LGR5(OR:5.241,95%CI:2.689～10.214),CK7(OR:4.078,95%CI:1.461～11.742)水平是癌前病变患者进展至宫颈癌的高危因素(P＜0.05);DCA曲线显示,在 0.1～0.45 范围内,LGR5,CK7 和CD59 联合应用具有更高临床获益度;CIC曲线显示,横轴从 0.4 后,LGR5,CK7 和CD59 联合预测价值与实际情况具有较高的符合率.结论 LGR5,CK7 和CD59 是影响癌前病变进展至宫颈癌高危因素,三者联合或可成为预测患者临床获益有效方案,有利于减少宫颈癌发生,增加患者净获益.

目的 探讨白头翁汤对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏液屏障的保护作用以及对Notch通路的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪(50mg/kg)组和白头翁汤低、高剂量(7.4、14.8 g/kg)组,对照组小鼠自由饮用纯净水,其余各组连续8 d自由饮用2.5％DSS溶液诱导UC模型,造模同时各给药组ig相应药物.每日记录小鼠体质量、粪便稠度以及血便情况;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;采用AB-PAS染色观察结肠组织黏蛋白2(mucin2,MUC2)的分泌情况;ELISA法检测结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及促炎因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子IL-10的含量;免疫组化法检测结肠组织Ki67的表达情况;免疫荧光法测定结肠组织富含亮氨酸重复序列的 G 蛋白偶联受体 5(leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5,Lgr5+)肠道干细胞(intestinal stem cells,ISCs)阳性细胞数;Western blotting 测定结肠组织 Notch-1、Atoh1、Hes1 和 MUC2 蛋白表达.结果 与模型组比较,白头翁汤能够缓解DSS诱导的UC小鼠体质量降低和疾病活动指数(disease activity index,DAI)升高(P＜0.05、0.01、0.001),缓解结肠组织的缩短、水肿以及病理学损伤(P＜0.01、0.001),减少炎性细胞浸润、隐窝的破坏与杯状细胞的丢失,降低结肠组织MPO活性和IL-1β、TNF-α水平(P＜0.05、0.01),升高IL-10水平(P＜0.05),增加结肠组织Ki67阳性细胞数(P＜0.01),促进MUC2的分泌和Lgr5+ISCs的阳性细胞数,并下调Notch和Hes-1蛋白表达水平(P＜0.05、0.001),上调Atoh1和MUC2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 白头翁汤能够降低UC小鼠结肠组织促炎细胞因子水平,增加Lgr5+ISCs的增殖和分化,保护隐窝和杯状细胞结构,促进MUC-2分泌,其作用可能与调控Notch-1/Atoh1/Hes1通路密切相关.

目的 探讨高氧治疗对不同日龄新生大鼠肠道干细胞(ISCs)的B-淋巴瘤莫洛尼氏鼠白血病病毒插入区-1(Bmi1)和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)表达的影响.方法 将新生大鼠随机分为对照组和高氧组(85％O2),在不同日龄(3、7、10和14 d)将其处死,收集肠道标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫组织化学法和蛋白免疫印迹(Western blot)检测ISCs的Bmi1和Lgr5的表达.结果 与对照组相比,高氧组Bmi1和Lgr5的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05).结论 在高氧环境中新生大鼠ISCs的Bmi1和Lgr5表达水平下降,可能是高氧损伤肠道的根源.

角膜内皮细胞(CECs)对于维持角膜透明至关重要.成年人的CECs在体内不可进行有丝分裂,损伤后不可再生.体外培养的人CECs可进行有丝分裂,但是体外培养的人CECs传代后形态易趋向于成纤维细胞改变且标志性蛋白表达减少,发生角膜内皮细胞间质转化(EndMT),成为体外培养CECs发展角膜再生医学的阻碍.同时,体内EndMT也参与到多种角膜病理改变,造成视力下降,甚至致盲,但是其发生机制尚未完全阐明.目前研究发现,CECs EndMT的机制可能涉及转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、成纤维细胞生长因子(FGF)家族细胞因子、Notch信号通路.因此,相应的抑制角膜EndMT的方法有抑制TGF-β信号通路、使用PI3K抑制剂、应用小干扰RNA(siRNA)干扰p120、使用富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGR5)及其配体、使用Notch信号传导抑制剂、敲低connexin43、使用基质金属蛋白酶抑制剂以及使用抗坏血酸-2-磷酸(Asc-2P).本文就角膜EndMT的发生机制、间质转化抑制或逆转方法的研究进行综述.

目的 分析口腔鳞状细胞癌组织中血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)、富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(LGR5)的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法对2016年3月至2018年3月唐山市协和医院收治的87例口腔鳞状细胞癌患者癌组织及癌旁组织中VASH-1、LGR5的表达情况进行检测,分析VASH-1、LGR5表达与口腔鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系,并分析口腔鳞状细胞癌组织中VASH-1、LGR5表达的相关性.结果 口腔鳞状细胞癌组织中VASH-1阳性率、LGR5阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05).病理分级为Ⅰ级、肿瘤直径小于等于2 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌患者VASH-1阳性率、LGR5阳性率均显著低于病理分级为Ⅱ～Ⅲ级、肿瘤直径大于2 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移患者(P<0.05).经Spearman相关性分析显示:口腔鳞状细胞癌组织中VASH-1表达和LGR5表达呈正相关(Rs=0.723,P=0.000).结论 口腔鳞状细胞癌组织中VASH-1、LGR5呈明显高表达,其水平与肿瘤直径、病理分级、淋巴结转移存在密切相关性,且VASH-1表达和LGR5表达呈正相关.

目的 探讨炎症环境下磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)通路对SW620Lgr5+结肠癌干细胞(CSC)增殖的影响.方法 以人结肠癌SW620、SW480、HT29、HCT116细胞为材料,Western blot法检测四株细胞中干细胞标志物富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)的表达水平;选用Lgr5表达量最高的SW620细胞,采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分析Lgr5+细胞的比例;无血清悬浮培养得到结肠癌球细胞,FACS分选获得结肠癌Lgr5+ CSC,集落形成实验、5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药实验鉴定分选得到的结肠癌Lgr5+CSC生物学特征的变化;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理Lgr5+ CSC建立炎症模型,CCK-8法筛选TNF-α的最适作用浓度及最佳作用时间;采用PI3K/AKT通路抑制剂MK2206处理Lgr5+ CSC,分为空白对照组、MK2206组、TNF-α组、MK2206联合TNF-α组;集落形成实验检测细胞增殖情况,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT (p-AKT)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白水平.结果 SW620细胞中Lgr5的蛋白表达量显著高于其他细胞系;FACS分析得到SW620细胞中Lgr5+细胞比例为6.9％,无血清培养基悬浮培养后,分选得到SW620Lgr5+ CSC的比例为34.5％;与SW620细胞相比,SW620Lgr5+ CSC的增殖能力与耐药性显著提高;1 ng/mL TNF-α.作用24h时,SW620Lgr5+ CSC具有最高的细胞活力;与对照组相比,TNF-α显著增加SW620Lg5+ CSC的集落形成能力,但MK2206显著性降低SW620Lgr5+ CSC的集落形成能力,增加SW620Lgr5+ CSC的凋亡率;同时MK2206显著降低TNF-α诱导的SW620Lgr5+ CSC的集落形成能力,增加其凋亡比例.TNF-oα处理增加SW620LgT5+ CSC中AKT和GSK-3β的磷酸化水平,但MK2206可抑制TNF-α诱导的AKT和GSK-3β的磷酸化水平.结论 TNF-α通过激活PI3K/AKT信号通路促进SW620Lgr5+ CSC增殖.

R-spondins是包含凝血酶敏感蛋白1型重复序列[thrombospondin type 1 repeat(TSR-1)-containing proteins]的结构域家族,由四种分泌糖蛋白R-spondin 1-4组成.R-spondins通过富含亮氨酸的G蛋白偶联受体4/5/6(leucine-rish repeat-containing G-protein coupled receptor 4/5/6,LGR4/5/6)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3[(zinc and ring finger 3)/RNF43(ring finger protein 43)]、硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)、包含GTPase激活蛋白1(IQ motif containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)来增强WNT/β-catenin信号通路,进而在人类胚胎发育、组织和器官稳定、干细胞自我更新等方面发挥作用.近年来研究发现R-spondins参与胚胎骨发育、成体骨形成和骨关节疾病的发生发展,对R-spondins的研究可能成为骨代谢疾病新的治疗方向.本文将对R-spondins增强WNT/β-catenin信号通路的相关机制及其对胚胎骨发育、成体骨形成、骨质疏松和骨关节炎相关疾病的影响做一综述.

目的 从局部创面毛囊干细胞激活的角度,探讨胫骨横向骨搬移技术促进重度糖尿病足溃疡创面再生、愈合修复的机制.方法 选取2014年6月至2018年1月在广西医科大学第一附属医院骨关节外科行胫骨横向骨搬移的126例重度糖尿病足患者,其中男94例,女32例,年龄39～86岁,中位数年龄61岁.Wagner分级构成:3级67例,4级57例,5级2例;TEXAS分级构成:2B级50例,2C级6例,2D级9例,3B级17例,3C级1例,3D级43例.针对患者进行创面愈合情况临床观察,并在治疗前后取创面边缘组织,进行HE染色观察创面组织学变化,还采用免疫组织化学染色观察富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled re-ceptor 5,LGR5)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)蛋白表达与分布情况.结果 126例重度糖尿病足患者平均愈合时间为(143.5±86.4)d,愈合过程基本呈现炎性期、增殖修复期等阶段特点,即搬移后早期出现创面边缘收缩,表面覆盖较多黄色纤维素样炎性渗出物;换药后逐渐出现鲜红肉芽组织,且边缘上皮组织向中心部位移行增生而基本覆盖创面,仅存线性或条状瘢痕.术后取移行修复创面边缘皮肤组织检测,发现有完整分层结构的表皮,可见大量微血管、胶原纤维和腺体结构,与术前对比,坏死组织减少,真皮有炎细胞浸润减少.治疗后LGR5与和CK19阳性细胞面积比分别为(6.781±1.889)％与(9.095±2.926)％,均显著高于术前创面组织中LGR5和CK19阳性面积比的(1.398±0.620)％与(1.834±0.772)％(P＜0.05).结论 胫骨横向骨搬移技术能促进糖尿病足溃疡创面再生愈合,其机制可能是通过LGR5和CK19等阳性细胞的活化,调控皮肤干细胞,参与创面过程.

目的 研究富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体(LGR) 5/6在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义.方法 选取39例经诱导化疗后第33天骨髓达完全缓解的ALL患儿,诱导化疗前作为初发组,经诱导化疗第33天骨髓达完全缓解时作为缓解组,根据危险度分层再分为低危(n=16)、中危(n=9)和高危组(n=14).30例免疫性血小板减少症的患儿为对照组.留取初发组、缓解组及对照组骨髓血3 ml,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6 mRNA的相对表达,采用Western blot法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6蛋白的相对表达.结果 初发组LGR5 mRNA (0.850 ±0.279)及蛋白(0.083±0.027)的相对表达均低于缓解组(mRNA:1.418 ±0.324,蛋白:0.130±0.033)与对照组(mRNA:1.541±0.409,蛋白:0.138 ±0.041)(PmRNA=0.000,P蛋白=0.000),初发组LGR6 mRNA(2.444±1.160)及蛋白(0.298 ±0.088)的相对表达均高于缓解组(mRNA:0.886±0.390,蛋白:0.111±0.039)与对照组(mRNA:0.928±0.373,蛋白:0.094±0.037)(PmRNA=0.000,P蛋白=0.000).在初发组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.004±0.284)及蛋白(0.097 ±0.030)的相对表达均高于中危(mRNA:0.728±0.239,蛋白:0.071 ±0.022)和高危患儿(mRNA:0.752±0.222,蛋白:0.074 ±0.020) (PmRNA=0.012,P蛋白=0.016),低危患儿LGR6 mRNA(1.822±0.979)及蛋白(0.245±0.077)的相对表达均低于中危(mRNA:2.954±1.039,蛋白:0.338±0.081)和高危患儿(mRNA:2.827 ±1.165,蛋白:0.333±0.075)(PmRNA=0.016,P蛋白=0.004).在缓解组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.597±0.329)及蛋白(0.150 ±0.035)的相对表达均高于中危(mRNA:1.277 ±0.288,蛋白:0.117 ±0.029)和高危患儿(mRNA:1.305±0.253,蛋白:0.116±0.023) (PmRNA=0.012,P蛋白=0.006),低危患儿LGR6 mRNA (0.662±0.334)及蛋白(0.089±0.034)的相对表达均低于中危(mRNA:1.066±0.273,蛋白:0.130±0.033)和高危患儿(mRNA:1.027±0.405,蛋白:0.126 ±0.038)(PmRNA =0.007,P蛋白=0.007).结论 LGR5和LGR6的表达与儿童ALL的发生和危险度有关,其具体作用机制有待进一步研究.

目的 探究宫颈癌患者外周血富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性.方法 选取2019年4月至2020年4月宜宾市第一人民医院诊治的148例宫颈癌患者作为研究对象,分为早期组(Ⅰ期,n=35)、中期组(Ⅱ～Ⅲ期,n=75)和晚期组(Ⅳ期,n=38).另选择同期进行宫颈检查的50例宫颈息肉患者作为对照组.比较四组LGR5蛋白及侵袭基因、增殖基因水平,采用Pearson相关性分析患者外周血LGR5水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性.结果 早期组、中期组、晚期组的LGR5水平均显著高于对照组,且晚期组LGR5水平显著高于早期组、中期组,中期组LGR5水平显著高于早期组,差异具有统计学意义(P<0.05);早期组、中期组、晚期组的肿瘤组织增殖基因CD59、SRPX2、TBX2、NDRG3 mRNA表达量以及侵袭基因hnRNPH、caspase-8、PRPS2、Rab11 mRNA表达量均显著高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);晚期组肿瘤组织增殖基因、侵袭基因表达量均显著高于早期组、中期组,中期组肿瘤组织增殖基因、侵袭基因表达量显著高于早期组,差异具有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析发现,外周血LGR5水平与宫颈癌患者肿瘤组织增殖基因CD59、SRPX2、TBX2、NDRG3 mRNA水平以及侵袭基因hnRNPH、caspase-8、PRPS2、Rab11 mRNA均呈正相关(P<0.05).结论 外周血中LGR5表达越高,宫颈癌分期越高,且肿瘤细胞增殖、侵袭等恶性行为越活跃,检测LGR5有助于宫颈癌患者的诊断及预后评估.