目的 基于辣木Moringa oleifera叶的特征图谱并结合网络药理学,筛选辣木叶的质量标志物(quality markers,Q-Marker),建立其定量分析方法,为辣木叶的质量评价提供科学依据.方法 采用HPLC法建立辣木叶的特征图谱,条件如下:Phenomenex Luna C18(2)100A色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.5％甲酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长254nm,体积流量0.8mL/min,柱温35 ℃,进样量5μL.应用化学计量学方法筛选不同产地的辣木叶差异标志物,基于网络药理学获取辣木叶特征成分的关键靶点及关键通路,绘制出"特征成分-关键靶点-关键通路"网络,以预测辣木叶的调血脂Q-Marker.再以15批辣木叶药材为研究对象,对质量标志物进行含量测定.以五原则为核心确定出最终的Q-Marker.结果 建立了 15批辣木叶药材的特征图谱,结合高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS/MS)确认了 8 个共有峰,通过对照品指认出其中 6 个色谱峰,分别为新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、维采宁2、异槲皮素、紫云英苷;经化学计量学分析,初步确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为不同产地的差异性标志物.经网络药理学确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为活性成分,可作用于白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)等5个核心靶点,影响3条关键通路[细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)的肠道免疫网络、磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶 B(phosphoinositide3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路]发挥调血脂作用.结合"五原则"初步预测新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为辣木叶调血脂的潜在的Q-Marker,质量分数分别为5.81、1.91、2.23、6.59、0.94mg/g.结论 建立的质量评价方法准确可靠,在此基础上结合网络药理学所筛选出的质量标志物可为辣木叶的质量控制提供参考,为阐明其药效物质基础的作用机制奠定基础.

目的 探究辣木叶通过核因子(NF)-κB 信号通路介导血管性痴呆(VD)小鼠海马区哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、细胞分裂周期蛋白(Cdc)42 表达调控氧化应激状态对学习记忆功能的影响及海马神经元的保护机制.方法 通过Himori法制备VD小鼠模型,120 只VD模型小鼠随机分为VD组,辣木叶低、中、高剂量(100、200、400 mg/kg)组,每组30 只.30 只健康BALB/c小鼠作为对照组.水迷宫实验分析学习记忆功能.比较各组海马体损伤、氧化应激指标、NF-κB 信号通路及mTOR、Cdc42 水平.结果 VD组目标象限停留时间、穿越平台次数、超氧化物歧化酶(SOD)水平、mTOR、Cdc42 mRNA和蛋白水平显著低于对照组,而海马组织损伤及海马组织中丙二醛(MDA)、核因子-κB上游激酶(IKK)、NF-κB mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P＜0.05).辣木叶提取液干预后,目标象限停留时间、穿越平台次数、SOD水平、mTOR、Cdc42 mRNA和蛋白水平显著升高(P＜0.05),其中辣木叶高剂量＞辣木叶中剂量＞辣木叶低剂量组(P＜0.05);海马组织损伤及海马组织中MDA、IKK、NF-κB mRNA和蛋白水平显著降低(P＜0.05),其中辣木叶高剂量＜辣木叶中剂量＜辣木叶低剂量组(P＜0.05).结论 辣木叶可能通过调控VD小鼠氧化应激状态,抑制NF-κB通路,引起海马中mTOR、Cdc42 表达增加,进而减少细胞凋亡数,保护受损神经元细胞,从而改善学习记忆功能.

探讨辣木叶多糖(Moringa oleifera leaf polysaccharide,MOLP)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)防治作用及其作用机制.50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(Con组)、模型对照组(DSS 组)、MOLP-L(25 mg/kg)、MOLF-M(50 mg/kg)、MOLF-H(100 mg/kg)组,通过饮用 4％DSS 诱导小鼠 UC 模型.试验期间每日记录各组小鼠体重情况和疾病活动指数(DAI)变化;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、HMGB1和结肠组织MPO含量;HE染色观察结肠组织病理学变化;实时荧光定量PCR法检测结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10、HMGB1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测结肠组织中TLR4、MyD88、P65、p-P65、IκBα和p-IκBα的表达;16S rRNA高通量测序探究小鼠肠道菌群的变化.结果显示,与Con组相比,DSS组小鼠一般状况下降,体重减轻,结肠长度缩短,DAI和病理切片损伤评分均显著增加(P＜0.001);TNF-α、IL-1β、HMGB1含量和MPO活性显著升高(P＜0.001),结肠组织中TLR4、MyD88、p-P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著上调(P＜0.001).与DSS组相比,不同剂量MOLP处理组明显改善上述病变和炎性指标,显著提升了 IL-10的表达,作用结果具有剂量依赖性;并且MOLP可以改善UC小鼠肠道菌群多样性,恢复菌群平衡.研究结果提示MOLP可以通过抑制炎症反应,调节小鼠肠道菌群多样性、组成和相对丰度进而发挥防治UC的作用.

目的 研究辣木叶提取物对间歇性低氧暴露小鼠心肌和骨骼肌组织形态学、能量代谢相关蛋白表达的影响.方法 采用低压氧舱建立间歇性低氧模型.将雄性昆明小鼠随机分为对照组、低氧组、辣木叶提取物组.辣木叶提取物组给予 3160 mg/(kg·bw)辣木叶提取物灌胃,另外两组灌胃蒸馏水.间歇性低氧处理 28d后,取心肌和骨骼肌组织.制作切片,进行透射电镜观察;制作冷冻切片后,JC-1 试剂盒染色,以荧光显微镜观察线粒体膜电位;采用差速离心法提取线粒体;ELISA 法测定 CS、ICD、α-KGDHC 和线粒体复合物 I-V 的蛋白水平.结果 透射电镜观察结果显示,低氧组心肌纤维部分肌丝溶解断裂,线粒体嵴较对照组稍显稀疏,部分肿胀;骨骼肌部分肌丝溶解断裂,部分线粒体嵴溶解出现空泡,局部线粒体肿胀现象明显.辣木叶提取物可以将心肌和骨骼肌肌丝、线粒体超微结构恢复至正常对照水平.荧光显微镜检测结果显示,低氧组小鼠心肌线粒体膜电位显著降低(P<0.05);与低氧对照组相比,辣木提取物组小鼠心肌线粒体膜电位显著升高(P<0.05).与对照组比较,低氧显著降低心肌组织 ICD 蛋白水平、骨骼肌组织CS和α-KGDHC蛋白水平(P<0.05).与低氧组比较,辣木叶提取物显著提高心肌组织CS、ICD和α-KGDHC的蛋白水平(P<0.05).与对照组比较,低氧显著降低心肌线粒体复合物 I、骨骼肌线粒体复合物 I 和 IV 蛋白水平(P<0.05);与低氧组比较,辣木叶提取物显著提高心肌线粒体复合物 I和 II、骨骼肌线粒体复合物 I 和 IV的蛋白水平(P<0.05).结论 辣木叶提取物能够改善间歇性低氧暴露小鼠心肌和骨骼肌超微结构和线粒体膜电位,提高能量代谢相关蛋白的表达水平.[营养学报,2023,45(5):480-486]

辣木叶在印度阿育吠陀医学中具有"Virechana"(purgative,泻下)功效,该研究以泻下中药大黄为参照,通过比较辣木叶与其在通便药效与机制方面的差异,为辣木叶在中医药中的进一步应用奠定基础.基于网络药理学和分子对接方法,寻找大黄、辣木叶发挥通便药理作用的物质基础、共有靶点和信号通路;建立低纤维饲料诱导的小鼠便秘模型,检测粪便参数、小肠推进率,使用HE染色观察结肠形态变化;RT-qPCR和免疫组化法分别检测相关基因和靶点蛋白的相对表达量.结果发现,将大黄和辣木叶靶点映射到便秘疾病的生物过程网络中,两者的靶点距离相近,表明其可能通过相似的生物过程发挥治疗便秘的作用;分子对接结果显示番泻苷元C、异槲皮苷等可作用于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶 3(MAPK3)等靶点进而影响MAPK信号传导、钙信号传导等通路发挥促排便作用.动物实验表明辣木叶、大黄均可增加便秘小鼠粪便的粒数、含水率等,改善小肠运动功能及结肠黏膜层厚度和肌层厚度,上调便秘小鼠结肠AKT1、MAPK3 基因表达量,降低AQP3 蛋白表达量.表明辣木叶与大黄在治疗便秘的药效和作用机制方面存在一定的相似性,以大黄作为参照药,可更好地理解辣木叶"Virechana"(purgative,泻下)功效在中医药中的特点.

目的 建立辣木叶通便复方中异槲皮苷、紫云英苷的含量测定方法.方法 采用HPLC法,Cosmosil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为40℃,流动相为B乙腈-A 0.1％磷酸水,检测波长为350 nm,流速为1.3 ml/min.结果 辣木叶通便复方中异槲皮苷和紫云英苷在30 min中分离效果较好,异槲皮苷在0.24～4.73μg,紫云英苷在0.11～2.19μg范围内线性关系良好(r>0.9990,n=8)且异槲皮苷和紫云英苷的平均回收率分别为99.09％(RSD为0.60％)和99.08％(RSD为1.37％).结论 所建立的辣木叶通便复方高效液相色谱法分析方法,可靠、快捷、准确,具有较好的可重复性和稳定性,可为辣木叶通便复方的含量测定提供参考.

该文对辣木Moringa oleifera干燥叶的正丁醇萃取部位进行化学成分分离,采用大孔树脂HP-20,凝胶Sephadex LH-20和ODS等色谱技术分离纯化,利用波谱数据(1H,13C-NMR,MS)进行结构鉴定,共分离鉴定17个化合物,分别为咔啉类2个tangutorid E(1),tangutorid F(2);酚苷类3个niazirin(3),benzaldehyde 4-O-α-L-rhamnopyranoside(4),4-O-β-D-glucopyr-anosidebenzoic acid(5);绿原酸及衍生物4个4-caffeoylquinic acid (6),methyl 4-caffeoylquinate (7),caffeoylquinic acid (8),methyl caffeoylquinate (9);核苷类2个uridine(10),adenosine(11);黄酮类1个quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside (12);其他小分子类5个phthalimidineacetic acid(13),3-pyridinecarboxamide(14),3,4-dihydroxy-benzoic acid(15),5-hydroxymethyl-2-furancarboxylic acid(16),5-hydroxymethyl-2-furaldehyde(17).其中化合物1～2,7,9～10,16～17为首次从该植物中分离得到.

目的:研究辣木叶及辣木籽对大鼠肝脏CYP450亚型酶中mRNA及蛋白表达量的影响.方法:将SD大鼠随机分为空白组(0.5％羧甲基纤维素钠混悬溶液)、辣木叶高、中、低剂量组(分别为0.813 8,0.406 9,0.203 5 g·kg-1);辣木籽高、中、低剂量组(分别为1.067 4,0.533 7,0.266 9 g·kg-1).灌胃给药,给药容量为10 mL·kg-1,2次/天,连续给药14 d,取大鼠肝脏,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western-blot)法检测大鼠肝脏中CYP2E1、CYP3A1及CYP1 A2的mRNA及蛋白相对表达量.结果:辣木叶高剂量组对CYP2E1的mRNA表达有明显抑制作用(P＜0.05);在(0.813 8±0.203 5)g·kg-1剂量范围内,辣木叶对CYP1A2 mRNA表达的抑制作用随给药剂量增加而增加(P＜0.05).本实验剂量范围内的辣木籽对3个酶的mRNA表达都有明显的抑制作用(P＜0.05),其抑制效率CYP2E1＞CYP3A1＞CYP1A2.高剂量组辣木叶及辣木籽对CYP2E1蛋白表达都有明显抑制作用(P＜0.01);中、低剂量组的辣木籽对CYP3A1及CYP1A2蛋白表达都有不同程度的抑制作用(P＜0.05;P＜0.05);中剂量辣木叶对CYP1A2蛋白表达抑制作用显著(P＜0.01).结论:辣木叶及辣木籽对大鼠肝脏中3个亚型酶的mRNA及蛋白表达都有不同程度的抑制作用.

目的:研究旨在优选辣木叶改善睡眠复方提取工艺.方法:运用中心复合-响应面二次模型,以提取物干膏得率、异槲皮苷、紫云英苷、丹酚酸B的含量以及总评归一值(OD)为评价指标,考察辣木叶改善睡眠复方水提取过程中提取时间、提取次数、用水量对提取工艺的影响.结果:最终确定辣木叶改善睡眠复方最佳提取工艺为12倍用量水提取3次,每次1h.结论:采用中心复合-响应面二次模型优化辣木叶改善睡眠复方的提取工艺是合理、可行的.

目的:提取纯化出辣木叶多糖,初步研究其体外抗炎活性.方法:采用水提醇沉法提取粗多糖,利用Sevag法除去粗多糖中的蛋白,进一步采用DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析法、透析法分离纯化得到辣木叶多糖组分MLP100-3;利用傅里叶红外光谱法、核磁共振光谱法和气相色谱-质谱法对MLP100-3的初级结构及单糖组成进行鉴定与分析.应用Griess试剂法和ELISA酶联免疫吸附测定法分别测定MLP100-3对细胞上清中NO和炎症细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌量的影响,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MLP100-3对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和TNF-α基因表达水平的影响.结果:辣木叶多糖MLP100-3对炎症细胞NO和TNF-α的产生均有显著的抑制作用,且MLP100-3对炎症细胞产生的iNOS mRNA、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和TNF-αmRNA也均有不同程度的抑制作用.结论:MLP100-3具有显著的抗炎活性,推测其可能通过抑制iNOS mRNA和TNF-αmRNA的表达从而抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号传导通路激活,影响促炎细胞因子与炎性介质的释放,从而发挥抗炎作用.