目的:总结D-双功能蛋白缺乏症（D-bifunctional protein deficiency，DBPD）的临床特点及遗传学病因。方法:回顾性收集2020年8月和2020年11月温州医科大学附属第二医院新生儿科收治的2例DBPD新生儿的临床资料，分析其临床表现、辅助检查及遗传学结果。并以“D-双功能蛋白缺乏症”“ HSD17B4变异”作为检索词，检索中国知网、万方及维普数据库以“ HSD17B4”“D-bifunctional protein deficiency”为检索词检索、在线人类孟德尔遗传数据库、PubMed自建库至2022年11月的文献，收集2岁内发病的基因检测诊断的DBPD患儿的病例资料。总结DBPD患儿的临床特点及遗传学病因。采用描述性统计分析。 结果:本院2例患儿均存在呼吸费力、肌张力低下、难治性癫痫、反应差、原始反射未引出及颅面部畸形。患儿1全外显子组测序发现 HSD17B4基因杂合剪接变异c.972+1G>T和错义变异c.727T>A（p.W243R），分别遗传自父亲和母亲；患儿2全外显子组测序发现 HSD17B4基因纯合剪接变异c.1333+4A>G。均为致病性变异。检索文献纳入英文文献12篇，中文文献1篇，包括16个家系（19例患儿），加之本院2例共21例患儿（男8例、女13例），其中2个家系4例患儿父母为近亲结婚；21例患儿均有肌张力低下；20例伴癫痫发作，其中生后1～5 d 出现癫痫发作17例；12例伴有高额头、长人中、眼距宽和高腭弓等颅面部畸形。 HSD17B4基因复合杂合变异13例，纯合变异8例；共检测到26种 HSD17B4基因变异，其中错义变异16种、剪接变异7种、无义变异2种、移码变异1种。 结论:新生儿出现肌张力低下、难治性癫痫，伴有外观畸形时，应考虑到DBPD，并完善基因检测。

[目的]Mfe2 为过氧化物酶体多功能酶类型2 (peroxisomal multifunctional enzyme type 2) 基因,在脂肪酸的β 氧化中起到了极其重要的作用.本研究旨在获得和鉴定松墨天牛Monochamus alternatus 的Mfe2 基因,原核表达其编码蛋白,并分析其在该虫不同虫态和成虫不同组织中的表达模式.[方法]采用在载体与目的片段之间设计具有重叠区引物的快速克隆方法克隆松墨天牛 Mfe2 基因,并对克隆所得序列进行生物信息学分析; IPTG 诱导原核表达,并以Western blot 结果验证Mfe2 基因表达的融合蛋白的成功表达; 使用RT-qPCR 技术分析这一基因在天牛不同虫态和成虫不同组织中的表达谱.[结果]克隆到松墨天牛Mfe2 基因,并命名为MaMfe2(GenBank 登录号: MF944109),其ORF 序列全长为2 148 bp,编码716 个氨基酸,预测分子量大小为77. 56 kD.生物信息分析显示,MaMfe2 具有AICARFT _ IMPCHas 保守结构域序列,与光肩星天牛Anoplophora glabripennis 过氧化物酶体多功能酶2 氨基酸序列一致性最高(为91％).Western blot 检测显示大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3) 中MaMfe2 表达的蛋白与抗体有特异性结合.发育表达谱结果表明,MaMfe2 在松墨天牛蛹期表达量最高,在卵和幼虫期表达量较低; 组织表达谱结果表明,在成虫不同组织中,MaMfe2 在脂肪体中表达量最高,在前胸中表达量最低.[结论]松墨天牛Mfe2 基因 MaMfe2 编码过氧化物酶体多功能酶,在不同虫态和成虫组织中存在差异表达.本研究为进一步探究该基因在松墨天牛中的功能奠定了基础.

目的 探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制.方法 培养H9c2细胞,利用H2O2(400 μ M,4h)建立心肌细胞损伤模型.设立空白对照组、心肌损伤模型组(H2O2组)、柴胡皂苷D组(4μM),加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400μM H2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量,同时利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体(PPARγ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)基因水平的表达变化.结果 Hoechst33258染色和流式细胞检测结果显示:与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组(均P＜0.05);细胞内活性氧(ROS)含量检测结果显示:H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组(均P＜ 0.05);与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低(均P＜0.05);柴胡皂苷D组的PPAR γ、Nrf2、HO-1在mRNA水平的表达较H2O2组升高(均P＜0.05).结论 柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用.

SAGA复合体是一种多功能蛋白复合物,负责细胞内10％以上的基因转录.Spt7作为SAGA复合体的核心蛋白,维持SAGA复合体的稳定.除酵母之外的真菌中并未有Spt7相关的研究报道.本研究对不同黑曲霉、丝衣霉等丝状真菌来源的Spt7的氨基酸序列进行多序列比对及蛋白结构的分析,发现Spt7在不同物种一致性较低,但均存在保守型的Bromo结构域.以黑曲霉1062为出发菌株,通过农杆菌转化法将过表达spt7的质粒转入1062菌株中,获得黑曲霉OE spt7转化子.通过对OE spt7转化子及对照组在CM培养基生长形态进行观察分析发现,过表达Spt7有益于菌体的生长及分生孢子的生成,在72 h时OE spt7转化子和对照组的菌落直径分别达到2.9 cm和2.8 cm,且转化子的孢子数量达到(5.8-6.3)×107/cm2,较对照组(2.3×107/cm2)提高1.5-1.7倍,且转化子菌丝分支较对照组多.另外,与对照组相比,OE spt7转化子在15 mmol/L H2O2条件下孢子萌发更快,菌落直径是对照组4倍,且在15％NaCl高渗以及39℃高温的条件下较对照组生长更加鲜活.通过qRT-PCR分析参与菌体抗氧化胁迫的过氧化物酶及耐高温的热休克蛋白基因的转录水平,发现除了CatR转录水平下调3.56倍,其他的过氧化物酶SOD、CpeB、GPX分别上调了3.8、1.89、3.56倍,除Hsp40及Hsp70较对照组无显著差异,Hsp90的转录水平上调19倍.