目的:了解罕见致病菌马克斯克鲁维酵母（乳酒念珠菌）临床感染状况和耐药趋势，为临床诊疗提供经验。方法:对上海长海医院皮肤科真菌实验室于1例泌尿系结石患者中段尿标本中分离出的1株马克斯克鲁维酵母菌株进行形态学及分子生物学鉴定，体外微量稀释药物敏感性（简称药敏）试验，扫描电镜观察在不同药物作用下菌株超微结构的破坏情况。回顾性分析上海长海医院2009—2021年马克斯克鲁维酵母菌感染临床病例资料。结果:分离到的菌株沙氏琼脂培养基上形成光滑、柔软、奶酪样酵母菌落，镜下可见卵圆形至细长形孢子。经菌落形态、质谱分析和测序分析鉴定为马克斯克鲁维酵母，药敏试验显示两性霉素B最低抑菌浓度0.5 μg/ml，氟康唑0.5 μg/ml，伊曲康唑0.03 μg/ml，伏立康唑≤ 0.03 μg/ml，泊沙康唑0.06 μg/ml，氟胞嘧啶0.5 μg/ml，卡泊芬净≤ 0.016 μg/ml，米卡芬净0.06 μg/ml。扫描电镜观察到未经药物处理时该菌为卵圆形至细长形，大小（3.0 ~ 6.5） μm × （5.5 ~ 11.0） μm；在1 μg/ml药物作用24 h后，泊沙康唑较两性霉素B和伏立康唑对该菌的破坏作用更强，细胞膜皱缩凹陷更明显。2009—2021年上海长海医院共收集8例马克斯克鲁维酵母感染患者，男6例，女2例，菌株分离自腹水3株、肺泡灌洗液1株、痰液和中段尿各2株。结论:对于可疑马克斯克鲁维酵母感染，应利用多种方法尽早确定致病菌种，并完善菌株收集和药敏试验，有助于临床针对性治疗。

分析临床1例脑梗死患者体温达38.4 ℃时外周静脉血及导管血检出的长孢洛德酵母菌的生物学特性，观察科玛嘉念珠菌显色平板的菌落形态和醋酸钠培养基上子囊孢子的产生情况，利用Vitek 2 compact、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）、测序分析分别进行鉴定，并进行药敏试验研究，以提高实验室对该菌的鉴定水平。药敏试验结果显示此例分离株对多种抗真菌药物的MIC值较低。临床给予拔除中心静脉置管，并使用抗真菌药物治疗至最后一次血培养阳性后2周，用药期间多次复查血培养均为阴性，患者无发热，各项感染指标基本降至正常，可供临床参考。

目的:对一株自脓毒血症患者血液中分离的罕见螺原体DGKH1进行菌种鉴定和生物学特性分析。方法:对DGKH1进行常规细菌培养、染色与形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序和系统发育分析，以及基因组测序和基因组相关指数分析，从而确定其分类学地位；参考人型副支原体和解脲脲原体进行药敏试验。结果:分离株DGKH1可以在哥伦比亚血平板、巧克力平板和嗜血巧克力平板上微弱生长，在含有四环素(4 μg/ml)、多西环素(1 μg/ml)、米诺环素(1 μg/ml)、交沙霉素(2 μg/ml)、罗红霉素(1 μg/ml)、克拉霉素(1 μg/ml)和特利霉素(1 μg/ml)的支原体液体培养基中不生长。在商品化的支原体固体培养基上，DGKH1可形成"油煎蛋样菌落"，与人型副支原体相类似。采用常规革兰染色，DGKH1不着色；以磷酸盐缓冲液为基质进行透射电镜观察，其菌体呈螺旋形。16S rRNA基因测序显示，分离株与中华绒螯蟹螺原体CCTCC M 207170 T相似性最高(99.85%)，但尿素分解试验阳性，与已知螺原体属菌种存在差异。全基因组系统发育分析显示，该菌株与中华绒螯蟹螺原体CCTCC M 207170 T聚类为同一个小的分支，但两者之间的全基因组平均核苷酸一致性(ANI)和数字DNA-DNA杂交(dDDH)值分别为94.14%和56.00%，均低于原核生物的种鉴定阈值。 结论:分离株DGKH1隶属于螺原体属，是一种与中华绒螯蟹螺原体亲缘关系密切的潜在新种，其部分微生物学特性与支原体相类似，但自然宿主来源和流行病学资料还有待于更深入研究。

目的:对从临床伤口标本中分离出的贪铜菌SZY C1进行形态学及分子生物学鉴定和分析，了解其微生物学特性及明确分类学地位。方法:将菌株SZY C1复苏培养后，依次进行形态学、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序、全基因组测序，并应用生物信息学软件对其基因组和毒力基因进行分析。结果:菌株SZY C1为不发酵糖革兰阴性菌，菌体无鞭毛、不形成芽孢，可在哥伦比亚血琼脂平板上培养24 h呈现灰白色、圆形、突起、不透明、边缘整齐的菌落。基于16S rRNA基因序列分析结果显示，菌株SZY C1与耐金属贪铜菌( Cupriavidus metallidurans)的相似度为98.52%。菌株SZY C1测得基因组大小为5 515 517 bp，G＋C含量为67.87%，全基因系统发育分析显示，菌株SZY C1与根际贪铜菌亲缘化关系最近，两者之间平均核苷酸一致性值84.76%，数字DNA-DNA杂交值为29.1%，低于原核生物物种的鉴定阈值。基因预测显示菌株SZY C1携带多种毒力基因、耐药基因和抗重金属基因。 结论:根据表型和基因组分析，菌株SZY C1为贪铜菌属中潜在的新种。

目的:探讨碘伏对金黄色葡萄球菌生物膜(BBF)的抗菌作用。方法:体外培养金黄色葡萄球菌，选取480枚钛合金板，分别在钛板表面建立7，14，21，28 d金黄色葡萄球菌生物膜体外模型，每个时相点120枚。再将每个时相点生物膜按随机数字表法分为无碘伏浸泡组(PBS组)、碘伏浸泡5 min组(5 min组)和碘伏浸泡10 min组(10 min组)。PBS组分别采用异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白(FITC-ConA)与碘化丙啶(PI)、PI与SYT09染料将金黄色葡萄球菌染色，染色后使用激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察细菌生物膜的形态结构，并采用活菌计数法(CFU计数)清点菌落数；5 min组、10 min组采用PI和SYT09染色，染色后使用激光共聚焦显微镜观察碘伏浸泡后的生物膜变化及细菌活力，采用活菌计数法评估碘伏的抗菌效果。结果:PBS组采用FITC-ConA和PI染色后，通过激光共聚焦显微镜观察可见，随着培养时间的延长，细菌胞外多聚物逐渐增多，生物膜空间结构逐渐成熟，到21 d时生物膜空间结构变化明显，28 d时成熟；PI和SYT09染色后通过激光共聚焦显微镜观察可见细菌数量增多，外形呈山峰状。扫描电镜观察可见，随着培养时间的延长，细菌胞外多聚物逐渐增多，形成了结构化的微环境并逐渐成熟。5 min组、10 min组中培养7 d[0(0，0)CFU/ml]及14 d[0(0，0)CFU/ml]时细菌被全部杀灭，21 d时5 min组及10 min组抗菌作用均减弱，但10 min组[100(100，125)CFU/ml]较5 min组[300(275，425)CFU/ml]的抗菌效果好( P<0.05)，28 d时碘伏浸泡5 min组[500(375，700)CFU/ml]和10 min组[250(175，400)CFU/ml]的抗菌效果差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:生物膜的成熟是细菌和胞外多聚物的整体成熟并形成空间化的微环境，生物膜以21 d为界分成年轻生物膜和成熟生物膜，二者的主要区别在于胞外多聚物及微环境的成熟；对于培养时间≤21 d的细菌生物膜，碘伏浸泡10 min较5 min抗菌效果好，而对培养时间>21 d的细菌生物膜延长碘伏浸泡时间对于抗菌效果没有明显差别。

目的:探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法（PDT）联合小檗碱对牙龈卟啉单胞菌（P.g）的体外抑制作用。方法:培养P.g至对数期中后期，将不同质量浓度亚甲基蓝加入P.g菌悬液中，作用5 min，激光（波长660 nm，功率140 mW/cm 2）照射2 min，寻找亚甲基蓝结合激光体外抑制P.g的最佳浓度；观察亚甲基蓝介导的PDT体外抑制P.g的效果以及小檗碱对P.g生长曲线的影响；探讨亚甲基蓝介导的PDT与小檗碱先后联合应用对P.g的抑制作用；扫描电子显微镜观察亚甲基蓝介导的PDT及小檗碱对P.g形态的影响；紫外分光光度仪测量各成分吸收峰。 结果:在660 nm激光激发下，亚甲基蓝质量浓度为24.414 1 μg/ml时，抑菌效果最好。与对照组比较，亚甲基蓝组和PDT组差异均有统计学意义（均 P<0.001）。0.05 mg/ml小檗碱对P.g浮游细菌具有抑制作用。与对照组比较，0.05 mg/ml小檗碱组菌落数降低，其差异有统计学意义（ P<0.01）；0.05 mg/ml小檗碱+光照组与对照组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。当PDT与小檗碱联用时对P.g有协同抑制作用，且先PDT后小檗碱组较先小檗碱后PDT组菌落数降低，其差异均有统计学意义（均 P<0.01）。P.g经亚甲基蓝介导的PDT处理后，细菌细胞壁皱缩成团，经小檗碱处理后，细菌表面变得光滑且菌体长度较对照组增长。 结论:亚甲基蓝介导的PDT对P.g有抑制作用，当与小檗碱联用时，对P.g有协同抑制作用，且联合应用中先PDT后小檗碱作用时抑菌效果更好。

目的:探究尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用，并初步了解其相关致病机制。 方法:从C57BL/6小鼠的尿道插管至膀胱，滴注分泌TcpC的UPEC CFT073野生株(CFT073 wt)或 tcpc基因敲除株(CFT073 Δ tcpc)悬液10 9菌落形成单位，构建肾盂肾炎小鼠模型。5 d后处死小鼠取肾脏，观察大体形态变化。HE染色观察肾脏组织病理变化，免疫组织化学法对肾组织中TcpC进行定位。采集感染后的小鼠尿液，十倍稀释法计数尿液中细菌载量，PCR检测小鼠肾脏组织和尿液细菌基因组DNA中的 tcpc基因。实时荧光定量PCR检测CFT073 wt菌株感染树突状细胞后胞内TcpC mRNA水平。Western blot和ELISA分别检测CFT073 wt和CFT073 Δ tcpc菌株对树突状细胞NF-κB活化和促炎因子水平的影响，激光共聚焦显微镜观察UPEC菌株感染树突状细胞后的细菌活力。 结果:与CFT073 Δ tcpc组相比，CFT073 wt组小鼠肾脏有明显脓肿产生，肾脏组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073 wt组小鼠尿液中的细菌载量显著高于CFT073 Δ tcpc组；PCR结果显示，肾脏组织和尿液中细菌均能扩增出 tcpc基因。在CFT073 wt菌株感染树突状细胞过程中，胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073 wt抑制树突状细胞NF-κB信号通路p50的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073 wt在树突状细胞内的存活。 结论:TcpC在CFT073 wt感染及引发小鼠肾盂肾炎过程中表达水平显著升高，并通过抑制树突状细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生有利于CFT073 wt在树突状细胞内的存活，与UPEC致病及抗树突状细胞免疫密切相关。

目的:对1例疑似脑膜炎奈瑟菌阳性病例进行病原学鉴定诊断，评估疫情传播风险。方法:采集患者血液进行脑膜炎奈瑟菌分离培养，通过菌落形态学和菌体革兰染色观察、生化鉴定、乳胶凝集试验、血清玻片凝集试验、核酸检测进行病原鉴定和血清群分群，检测菌株对12种抗生素的敏感性；对病例开展现场流行病学调查并采取疫情防制措施。结果:经多种实验室方法鉴定，该疑似病例确诊为脑膜炎奈瑟菌感染，菌株血清群为Y群，多位点序列分型(MLST)为767，属ST167克隆群，对青霉素、氨苄西林、美罗培南等9种抗生素敏感，对环丙沙星和左氧氟沙星中介，对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药。病例的密切接触者和环境检测结果为阴性。结论:本病例经检测明确病因为脑膜炎奈瑟菌侵袭性感染，菌株为Y群ST167型。流行病学调查显示该病例引发疫情传播流行的风险较低，后续需要持续关注和监测。

目的:探讨肺炎克雷伯菌 wza基因缺失对细菌荚膜形成能力及对噬菌体敏感性的影响。 方法:以野生型肺炎克雷伯菌株W14为背景，利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建Δ wza基因缺失菌株。在溶菌肉汤（LB）培养基固体平板观察菌落形态并在液体LB培养基中测定细菌的生长曲线。通过透射电镜，糖醛酸含量测定的方法检测 wza基因缺失对肺炎克雷伯菌株荚膜形成的影响。并通过观察噬菌斑明确 wza基因缺失是否影响菌株W14对噬菌体phiW14的敏感性。使用 t检验比较菌株W14与Δ wza 缺失菌株荚膜多糖的糖醛酸含量差异情况。 结果:通过PCR技术明确Δ wza基因缺失菌株构建成功。LB固体平板上观察到Δ wza基因缺失菌株的菌落较小，而生长曲线未观察到 wza基因缺失对菌株生长速度的影响。透射电镜结果显示， wza基因缺失后菌株荚膜多糖缺失。糖醛酸含量检测表明Δ wza基因缺失菌株的糖醛酸含量为（45.963±2.795）μg/ml，远低于野生型菌株W14的（138.800±5.201）μg/ml， t=27.233， P<0.001。通过观察噬菌斑发现 wza基因缺失后，菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。 结论:基因 wza的缺失损害了细菌的荚膜形成能力并使得菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。

分析比较临床1例重症肺炎患者痰标本培养出的平滑型脓肿分枝杆菌（Mab S）和粗糙型脓肿分枝杆菌（Mab R），并进行药敏试验研究，为临床诊断治疗提供科学依据。对Mab S和Mab R进行菌体形态观察、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和16S rRNA基因序列测序比对，构建系统发育进化树进行同源性分析，并采用比例法和肉汤法进行体外药敏试验。Mab S和Mab R菌落形态不同，MALDI-TOF MS分析Mab R有223个蛋白峰，Mab S有147个蛋白峰。16s RNA基因测序Mab S为1 397 bp，Mab R为1 402 bp，药敏试验显示二者对抗结核药几乎耐药，对绝大部分抗菌药物敏感。Mab S和Mab R对抗结核治疗药物普遍耐药，而对抗菌药物几乎敏感，联合使用抗菌药物治疗有较好的疗效，可供临床参考。