目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)在体外牵张力介导的人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化中的作用.方法:酶消化法分离并体外培养hPDLCs,取第3~8代细胞用于实验.首先通过细胞免疫荧光检测YAP在细胞加力后的定位,然后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测加力细胞成骨分化相关基因碱性磷酸酶(ALP)、远端缺失同源盒5(DLX5)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达变化,通过碱性磷酸酶染色实验检测加力细胞ALP的活性.构建YAP基因沉默模型,分析加力的细胞的YAP基因表达受到抑制后成骨分化相关基因ALP、DLX5及RUNX2的表达变化和ALP活性.结果:hPDLCs加力1 d后,同对照组相比,胞核定位的YAP明显升高,且成骨相关基因的表达均明显上调(P<0.05),ALP活性也增强.转染了YAP SiRNA的细胞加力后与对照组相比,成骨相关基因的表达明显受到抑制(P<0.05),且ALP活性也降低.结论:沉默YAP基因对牵张力介导的hPDLCs成骨分化有抑制作用,推测YAP可能是正畸过程中的一个潜在治疗靶点.

目的 探究远中缺失同源盒基因5(distal-less homeobox genes 5,Dlx-5)和肌节同源盒基因1(Msh homeobox 1,Msx-1)在双膦酸盐药物性颌骨坏死(bisphosphonate-associated osteonecrosis of the jaw,BRONJ)致病机制中的作用.方法 将24只SD大鼠采用随机数字表法随机分为两组,每组12只.实验组腹腔注射唑来膦酸0.2 mg/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水,每周3次,12周后拔除左下第一磨牙.拔牙后8周处死所有动物.通过影像学、大体及组织病理学观察,诊断BRONJ的发生.通过实时荧光PCR检测Dlx-5和Msx-1在骨坏死样本中的表达水平.结果 BRONJ动物模型中,实验组Dlx-5基因表达(5.91±0.28)显著高于对照组(1.00±0.15)(t=15.778,P=0.001),实验组Msx-1基因表达(0.09±0.03)显著低于对照组(1.02±0.06)(t=-10.638,P=0.001).结论 腹腔注射唑来膦酸联合拔牙的方法可成功诱导大鼠发生BRONJ,Dlx-5和Msx-1基因在BRONJ的致病过程中发挥作用.

目的:观察健骨颗粒对去卵巢小鼠骨组织中miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2表达的影响,探讨健骨颗粒防治绝经后骨质疏松的作用机制.方法:30只C57小鼠按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和健骨颗粒组,每组10只.假手术组只切除卵巢周围脂肪,不切除卵巢;生理盐水组和健骨颗粒组均手术切除双侧卵巢,并分别灌服生理盐水和健骨颗粒.干预8周后处死取材,采用micro CT观察胫骨形态并计量;realtime PCR检测骨组织miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2等mRNA的表达;Western blot法检测骨组织Dlx5、Msx2、Runx2等蛋白含量.结果:与生理盐水组比较,健骨颗粒组骨小梁数量、宽度、长度、形态和分布部分恢复,密度和联结性有所增加,仍无法恢复到假手术组水平,但皮质骨面积增加,骨髓腔缩小,基本恢复到假手术组水平;骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积和骨组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)均明显升高;骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)指标均明显降低;小鼠骨组织miR-141、Msx2相对含量明显降低;骨组织Runx2、Dlx5相对含量明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:健骨颗粒可以有效降低miR-141的表达,并通过影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化BMP信号通路Dlx5/Msx2/Runx2信号轴来提高Dlx5、Runx2等成骨关键因子的表达,提高成骨能力,达到预防和治疗骨质疏松的目的.

[目的]研究远端缺失同源盒3 (distal-less homeobox 3,DLX3)基因在结肠癌中的表达情况,探讨DLX3在癌症产生与进展过程中起到的作用和临床意义.[方法]利用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)得到结肠癌公共数据集,获取DLX3 mRNA表达谱和患者相关的临床信息.利用相关生物信息学方法,分析DLX3在结肠癌中的表达量与临床病理指标的相关性以及对预后的影响.用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)预测DLX3在结肠癌中调控的可能通路.[结果]由TCGA数据库结肠癌数据集分析可得,DLX3在肿瘤组织中呈高表达,表达量与年龄、TNM分期和肿瘤有无转移显著相关(P＜0.05).DLX3高表达的患者总体生存期明显低于DLX3低表达的患者(P＜0.05).多因素COX回归分析提示DLX3的表达水平、年龄及TNM分期是影响结肠癌患者总体生存期的独立危险因素(P＜0.05).DLX3高表达的样本存在Wnt/β-catenin 和Kras两个通路基因集的富集(P＜0.05,FDR＜0.25).[结论]DLX3可能在结肠癌的发生发展过程中起到重要作用,具备成为判断结肠癌预后和潜在治疗靶点的临床应用前景.

目的 探讨miRNA-141对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导人主动脉瓣钙化的调控作用及机制.方法 收集24例人退行性主动脉瓣,用qRT-PCR及蛋白质印迹法检测miRNA-141和BMP-2的mRNA及蛋白表达水平.在人主动脉瓣膜间质细胞(HAVIC)中上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较细胞钙化,并比较远端缺失同源盒5(Dlx5)mRNA和BMP-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证Dlx5是否为miRNA-141的靶基因.在主动脉瓣钙化小鼠和Dlx5基因敲除主动脉瓣钙化小鼠中,上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较主动脉瓣钙化,并检测BMP-2蛋白表达.结果 与正常主动脉瓣膜组织相比,人退行性主动脉瓣miRNA-141的表达降低(1.00±0.02 vs 0.35±0.06,P=0.01),BMP-2的mRNA及蛋白表达增加(P均=0.01).在HAVIC中,上调/下调miRNA-141可抑制/促进钙化(P=0.02或P=0.01),并降低/升高Dlx5 mRNA表达(P均=0.01)及BMP-2蛋白的表达(P=0.02或P=0.01).双荧光素酶报告基因实验验证了Dlx5为miRNA-141的靶基因.上调/下调主动脉瓣钙化小鼠miRNA-141可抑制/促进钙化(P均=0.01),并降低/升高Dlx5、BMP-2 mRNA及蛋白的表达(P均<0.05);Dlx5基因敲除小鼠中,上/下调miRNA-141不影响瓣膜钙化和BMP-2的表达.结论 miRNA-141靶向Dlx5基因抑制BMP-2蛋白诱导的人主动脉瓣钙化.

目的 探究舒芬太尼对去卵巢骨质疏松大鼠骨小梁结构及骨代谢的影响.方法 采用双侧卵巢切除术(OVX)建立绝经后骨质疏松大鼠模型,将50只雌性SD大鼠随机分为5组:假手术组、OVX组、OVX+低、中、高剂量舒芬太尼组(1、2、4μg/kg),每组10只.取股骨行uCT扫描测量骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨体积分数(BV/TV),并观察骨小梁数量及软骨数量;采用HE染色观察股骨组织损伤情况;采用TRAP染色检测破骨细胞数量变化情况;采用实时荧光PCR和蛋白印迹检测骨匀浆液中骨标记蛋白[成骨相关转录因子抗体(Osx)、胶原蛋白Ⅰ(Colla1)和远中缺失同源盒基因2(Dlx2)]和骨吸收功能相关蛋白(破骨细胞相关受体OSCAR、TRAP)及mRNA的表达.结果 与假手术组比较,OVX组骨小梁结构明显破坏,排列无规则,BV/TV、Tb.Th、骨小梁数量、软骨数量及Osx、Colla1、Dlx2 mRNA和蛋白表达均减少/降低(P<0.05),Tb.Sp、破骨细胞数量及OSCAR、TRAP mRNA和蛋白表达均增加/升高(P<0.05);与OVX组比较,OVX+中、高剂量舒芬太尼组骨小梁结构相对完整,排列趋于紧密,BV/TV、Tb.Th、骨小梁数量、软骨数量及Osx、Colla1、Dlx2 mRNA和蛋白表达均增加/升高(P<0.05),Tb.Sp、破骨细胞数量及OSCAR、TRAP mRNA和蛋白表达均减少/降低(P<0.05).结论 舒芬太尼可改善骨小梁微结构、促进骨形成、抑制骨吸收,从而减轻骨质疏松大鼠骨小梁损伤并进行骨重塑.

目的 探讨足月子痫前期孕妇胎盘组织中远端缺失同源盒3(DLX3)基因启动子区甲基化状态及表达情况,评估DLX3基因在足月子痫前期发病中的潜在作用.方法 选取2020年1月至2021年1月在亳州市人民医院足月分娩的子痫前期孕妇50例作为观察组,同期正常足月分娩孕妇36例为对照组.分娩后获取两组产妇的胎盘组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测两组胎盘组织中DLX3基因启动子的甲基化状态.同时通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DLX3 mRNA表达水平.结果 足月子痫前期孕妇胎盘组织中DLX3基因启动子区甲基化率为76.00％,对照组为22.22％,且随着子痫前期严重程度的增加,DLX3启动子区甲基化率增加,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组胎盘中DLX3基因mRNA表达(0.98±0.17)相比,观察组胎盘中DLX3基因mRNA表达水平(0.41±0.08)降低,且重度子痫前期较轻度子痫前期胎盘组织DLX3基因mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 足月子痫前期孕妇的胎盘组织中DLX3启动子甲基化率升高可能抑制DLX3表达,影响子痫前期严重程度.

目的 研究骨关节炎患者关节软骨中DNA甲基化的特征,分析甲基化基因的表达在骨关节炎发生发展中的作用.方法 收集2018年3月—2019年1月在新疆医科大学附属第一医院关节中心3例接受全膝人工关节置换术的骨关节炎(Osteoarthritis,OA)患者(OA组),3例膝关节软骨正常截肢患者(对照组)软骨组织标本.采用Illumina Infinium Methylation EPIC Bead Chip(850K芯片)对软骨进行甲基化分析.应用InCroMAP软件进行关节软骨中全基因组DNA甲基化及mRNA表达扩增谱的整合途径富集分析.基于DAVID数据库进行基因本体论(Gene ontology,GO)分析和京都基因及基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析.结果 单基因分析结果显示,本研究共获得1 299个差异甲基化基因;整合DNA甲基化的mRNA表达谱发现,64个基因显著改变,包括远中缺失同源盒基因5(DLX5)、同源异型盒基因5(HOXA5)、软骨酸性蛋白1(CRTAC1)和可溶性富含半胱氨酸结构域的清道夫受体蛋白(SSC5D);GO分析发现,上述基因功能与免疫应答、炎症反应、细胞增殖等有关;KEGG分析发现,上述基因介导与OA发病密切相的丝裂原活化蛋白激酶(MAKP)信号通路和Hippo信号通路.结论 OA生物信息学分析发现可能的异常甲基化差异表达基因和信号通路,这可能会对OA发生和发展过程中的表观遗传学机制的阐明提供新的思路.