目的 基于鼻黏膜-海马神经免疫机制探讨醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)大鼠的影响.方法 选择21日龄(PND21)SPF级SD大鼠40只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组10只.除正常组外,其余3组均采用卵清蛋白(OVA)致敏的方法构建AR动物模型.造模成功后,正常组和模型组均给予生理盐水滴鼻(50 μL/次),中药组给予醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻(50 μL/次),西药组给予布地奈德鼻喷雾剂滴鼻(20 μL/次),2次/d,连续治疗12 d.采用AR大鼠行为学评分标准对大鼠进行鼻炎行为学评分;采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清免疫球蛋白E(IgE)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用苏木精-伊红染色法(HE)观察鼻黏膜组织病理变化及嗜酸性粒细胞(EOS)计数;采用免疫组化法检测海马组织非受体酪氨酸激酶Fyn、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y(NPY)表达水平;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平.结果 ① 鼻炎行为学评分:与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗前鼻炎行为学评分均明显更高(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P＜0.05).与治疗前比较,中药组和模型组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P＜0.05).② 学习记忆功能:与正常组比较,模型组平台潜伏期、游泳总路程均明显更长(P＜0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更低(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后平台潜伏期和游泳总路程均明显更短(P＜0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更高(P＜0.05).③ 血清IgE、TGF-β1含量:与正常组比较,模型组血清IgE、TGF-β1含量均明显更高(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后血清IgE、TGF-β1含量均明显更低(P＜0.05).④ 鼻黏膜组织病理变化及EOS计数:模型组鼻黏膜水肿,上皮细胞排列紊乱;中药组和西药组治疗后鼻黏膜水肿明显减轻,上皮细胞结构较完整.与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗后大鼠鼻黏膜EOS计数均明显增多(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻黏膜EOS计数均明显减少(P＜0.05).⑤ 海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平和蛋白表达水平:与正常组比较,模型组海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显升高(P＜0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显降低(P＜0.05).与模型组比较,中药组和西药组治疗后海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显降低(P＜0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显升高(P＜0.05).结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可改善AR大鼠鼻炎行为学和学习记忆功能,可能与通过Fyn信号通路调节鼻黏膜-海马神经免疫机制有关.

目的:通过观察醒鼻凝胶滴鼻剂干预变应性鼻炎(AR)豚鼠鼻黏膜成纤维细胞对Fyn-STAT5信号通路的影响,进一步阐明醒鼻凝胶剂治疗AR可能的作用机制.方法:体外分离培养AR豚鼠鼻黏膜成纤维细胞并进行鉴定;将成纤维细胞分为正常组、模型组、TGF-β1组、醒鼻剂组和雷诺考特组,分别检测各组成纤维细胞中Fyn-STAT5信号通路及相关因子的基因和蛋白变化.结果:细胞鉴定结果显示,F3代成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性.MTT检测结果提示,经25ng/mL TGF-β1干预24h后,细胞活力增长最明显.Real-time PCR和Western blot检测结果显示,模型组中Fyn mRNA及蛋白和SCF mRNA高表达(P＜0.01),IL-10 mRNA和STAT5蛋白呈现低表达(P＜0.01);与模型组比较,3个给药组干预12、24h后,Fyn mRNA及蛋白、SCF mRNA的表达均显著降低,IL-10 mRNA、STAT5蛋白显著升高(P＜0.01,P＜0.05),干预48h后,酸鼻剂组及雷诺考特组IL-10 mRNA仍明显升高(P＜0.01).结论:醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过降低Fyn和SCF表达,同时上调STAT5和IL-10,从而抑制Fyn-STAT5信号传导通路,减轻AR成纤维细胞免疫反应.

目的 探讨中药醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)的影响及可能机制.方法 52只大鼠随机分为正常组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各13只.除正常组外其余各组大鼠以腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏和鼻腔滴OVA溶液激发,建立AR模型.于第7次致敏后第2天开始,醒鼻凝胶滴鼻剂组大鼠双侧鼻孔滴醒鼻凝胶滴鼻剂50μl,布地奈德组滴布地奈德鼻喷雾剂50μl,正常组和模型组滴等量生理盐水,每日2次,连续12天.实验结束后对各组大鼠进行行为学评分(喷嚏、鼻痒和流涕),HE染色观察鼻黏膜病理并进行嗜酸性粒细胞计数,检测大鼠鼻黏膜Fyn、信号转导和转录激活因子5(STATS)蛋白含量和CD19、CD23水平,以及血清转化生长因子[β1 (TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量. 结果 与正常组比较,模型组大鼠行为学评分,嗜酸性粒细胞计数,血清TGF-[β1、IL-10含量,鼻黏膜Fyn蛋白表达、CD19、CD23水平均升高,STATS蛋白表达降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组上述各指标均改善(P ＜0.05或P＜0.01),且醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过防止IgE与靶细胞结合,减少Fyn被磷酸化,减少炎症介质的释放,从而改善AR的喷嚏、鼻痒和流涕症状.

目的 观察醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠呼吸区鼻黏膜形态及肌醇需求酶1α(IRE1α)表达的影响,探讨其治疗变应性鼻炎的可能机制.方法 选取60只Hartley品系、鼠龄为2～3个月健康普通级豚鼠,雌雄各半.采用简单数字随机及性别、体重的分层随机法分为空白组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂低剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂中剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂高剂量组、雷诺考特组,每组10只.除空白组外,其余组以卵清蛋白构建变应性鼻炎豚鼠模型.于造模第16天起,模型组给予生理盐水滴鼻,醒鼻凝胶滴鼻剂低、中、高剂量组分别给予6.88 mg/kg、13.76 mg/kg、27.52 mg/kg醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻,雷诺考特组给予20μg/kg雷诺考特滴鼻,均2次/d,连续11 d.干预结束后,取各组豚鼠呼吸区鼻黏膜进行扫描电镜观察,取鼻黏膜、肺组织采用Western blot法检测IRE1α 蛋白表达情况.结果 扫描电镜下模型组豚鼠呼吸区纤毛柱状上皮表面微绒毛、纤毛结构缺失,排列混乱,方向不一致,且柱状上皮细胞之间的间隙增宽;醒鼻凝胶滴鼻剂中剂量组豚鼠呼吸区纤毛传输系统有改善;醒鼻凝胶滴鼻剂高剂量组和雷诺考特组柱状上皮细胞排列较整齐,纤毛生长较好,排列有明显的方向性,并可见腺体分泌细胞.模型组豚鼠鼻黏膜、肺组织中IRE1α蛋白表达水平均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组豚鼠鼻黏膜、肺组织中IRE1α蛋白表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且鼻黏膜中的IRE1α 蛋白表达水平降低与醒鼻凝胶滴鼻剂给药浓度呈负相关.结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可在一定程度上修复变应性鼻炎纤毛柱状上皮细胞的纤毛,其可能通过调节鼻黏膜及肺组织中IRE1α蛋白的表达发挥减轻气道炎性反应的作用.

目的 观察醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠上下气道相关的鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液白介素4(IL-4)、白介素13(IL-13)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响,鼻黏膜及肺组织X盒结合蛋白1(XBP1)的影响,及肺组织炎症情况.方法 健康普通级豚鼠60只,适应性喂养1周后,以卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立变应性鼻炎豚鼠模型,采用简单数字和分层随机法随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂13.76 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂27.52 mg/kg剂量组、雷诺考特组;10只/组.并于造模第16天开始给药.采用ELISA检测鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-13、TGF-β;用RT-PCR检测鼻黏膜及肺组织XBP1 mRNA;用HE染色评价肺组织炎症情况.结果 与正常对照组比较,模型组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液及鼻黏膜、肺组织XBP1 mRNA指标明显升高(P＜0.01);与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组及雷诺考特组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液的IL-4、IL-13、TGF-β,鼻黏膜的XBP1 mRNA指标明显降低(P＜0.01);醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组,雷诺考特组及肺组织的XBP1 mRNA指标降低明显(P＜0.01).HE染色显示,与正常对照组比较,模型组豚鼠肺组织气道血管周围炎症细胞浸润明显;与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂干预后,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组肺组织气道血管周围炎症细胞浸润减轻.结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可通过下调上气道包括鼻腔灌洗液、鼻黏膜等相关炎症因子的表达,减轻豚鼠鼻炎模型肺组织气道血管周围炎症,发挥治疗变应性鼻炎的作用,并能在一定程度上下调下气道相关的支气管肺泡灌洗液及肺组织相关炎症因子的表达,为醒鼻凝胶滴鼻剂在上下气道的变态反应性Th1/Th2细胞因子的作用机制研究提供了一定的实验参考数据.