目的:通过观察醒鼻凝胶滴鼻剂干预变应性鼻炎(AR)豚鼠鼻黏膜成纤维细胞对Fyn-STAT5信号通路的影响,进一步阐明醒鼻凝胶剂治疗AR可能的作用机制.方法:体外分离培养AR豚鼠鼻黏膜成纤维细胞并进行鉴定;将成纤维细胞分为正常组、模型组、TGF-β1组、醒鼻剂组和雷诺考特组,分别检测各组成纤维细胞中Fyn-STAT5信号通路及相关因子的基因和蛋白变化.结果:细胞鉴定结果显示,F3代成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性.MTT检测结果提示,经25ng/mL TGF-β1干预24h后,细胞活力增长最明显.Real-time PCR和Western blot检测结果显示,模型组中Fyn mRNA及蛋白和SCF mRNA高表达(P＜0.01),IL-10 mRNA和STAT5蛋白呈现低表达(P＜0.01);与模型组比较,3个给药组干预12、24h后,Fyn mRNA及蛋白、SCF mRNA的表达均显著降低,IL-10 mRNA、STAT5蛋白显著升高(P＜0.01,P＜0.05),干预48h后,酸鼻剂组及雷诺考特组IL-10 mRNA仍明显升高(P＜0.01).结论:醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过降低Fyn和SCF表达,同时上调STAT5和IL-10,从而抑制Fyn-STAT5信号传导通路,减轻AR成纤维细胞免疫反应.

目的 分析调控人肝癌耐药细胞BEL-7402/FU耐药的关键基因和信号通路,进而探讨引起肝癌多药耐药的可能机制,寻找逆转肝癌多药耐药的潜在靶点.方法 TRIzol法提取人肝癌细胞BEL-7402与耐药细胞BEL-7402/FU的总RNA,采用RNA-seq测序技术检测两组细胞的数字基因表达谱并筛选差异表达基因(DEGs),运用生物信息学分析方法对DEGs进行生物通路等富集分析.结果 检测到上调的DEGs数为2 899个,下调的DEGs数为3 313个;GO富集及KEGG分析发现涉及的主要生物进程为单生物体过程类别、细胞类别、结合分子功能类别,主要的信号通路为代谢通路等;PPI分析显示,在蛋白互作网络中具有重要作用的基因为TP53、EGFR、MAPK8、BCL2L1、STAT5A、STAT5B、ABALON、FYN、CDKN1A、BCL2等.结论 肝癌耐药过程涉及到多个基因和通路,这些具有差异的基因和通路或将成为逆转肝癌耐药的靶点.

目的 探讨中药醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)的影响及可能机制.方法 52只大鼠随机分为正常组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各13只.除正常组外其余各组大鼠以腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏和鼻腔滴OVA溶液激发,建立AR模型.于第7次致敏后第2天开始,醒鼻凝胶滴鼻剂组大鼠双侧鼻孔滴醒鼻凝胶滴鼻剂50μl,布地奈德组滴布地奈德鼻喷雾剂50μl,正常组和模型组滴等量生理盐水,每日2次,连续12天.实验结束后对各组大鼠进行行为学评分(喷嚏、鼻痒和流涕),HE染色观察鼻黏膜病理并进行嗜酸性粒细胞计数,检测大鼠鼻黏膜Fyn、信号转导和转录激活因子5(STATS)蛋白含量和CD19、CD23水平,以及血清转化生长因子[β1 (TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量. 结果 与正常组比较,模型组大鼠行为学评分,嗜酸性粒细胞计数,血清TGF-[β1、IL-10含量,鼻黏膜Fyn蛋白表达、CD19、CD23水平均升高,STATS蛋白表达降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组上述各指标均改善(P ＜0.05或P＜0.01),且醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过防止IgE与靶细胞结合,减少Fyn被磷酸化,减少炎症介质的释放,从而改善AR的喷嚏、鼻痒和流涕症状.

目的:基于中药药性理论,首次提出"性味网络药理学"概念,通过构建中药性味网络并结合分子对接技术,探索经典方剂如金解毒散治疗病毒性肺炎的作用机制.方法:从HERB数据库获取如金解毒散主要成分,G eneCards收集病毒性肺炎相关基因,借助NetInfer和BATMAN-TCM数据库构建如金解毒散性味药物模块的成分-靶点-疾病模型相互关系网络.采用Metascape软件对靶点进行蛋白相互作用网络和KEGG分析;采用Vina软件对成分和靶蛋白进行分子对接验证;采用SwissADME软件进行有效成分药物代谢动力学评价.结果:利用中药数据库共筛选出该方有效成分335个,其中桔梗20个,甘草117个,黄连26个,黄芩62个,黄柏75个,山栀35个.按3种性味模块进行靶点预测及网络构建,其中苦辛平模块(桔梗)潜在靶标596个,甘平模块(甘草)潜在靶标819个,苦寒模块(黄连、黄芩、黄柏、山栀)潜在靶标1097个.网络分析及分子对接结果显示,异甘草黄素、穿贝海绵甾醇、吴茱萸次碱、草香豆酮、黄芩素、槲皮素、木犀草素等是该方治疗病毒性肺炎的重要活性成分;SBC、FYN、LCK、MET、AKT1、ABL1、MAPK8、ITK、CCR5、TP53、PTPN11、EIF2AK2、MAPK1、PIK3CD、MAPK3、BTK、STAT3、PIK3CA、MAPK14等是该方治疗病毒性肺炎的核心靶蛋白;JAK-STAT信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用等是该方治疗病毒性肺炎的关键信号通路.结论:本研究通过性味网络药理学及分子对接技术揭示了如金解毒散多组分、多靶点、多通路的特点,为进一步探索如金解毒散治疗病毒性肺炎作用机制提供了新的思路与方法.研究也表明,采用性味药物模块成分-靶点-疾病模型探析中药复方物质基础具有一定的合理性与可行性.

目的:探讨木兰脂素调控致密物酪氨酸激酶(dense tyrosine kinase Fyn,Fyn)/信号转导和转录激活因子5(signal transducers and activators of transduction 5,STAT5)通路治疗变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的效果.方法:将58 只豚鼠采用随机数字表法分为建模组(n=50)、空白组(n=8).建模组采用卵清白蛋白抗原混悬液全身及局部攻击建立AR 模型,将建模成功的豚鼠随机分为模型组、氯雷他定组(1.05 mg·kg-1)及木兰脂素低剂量组(20 mg·kg-1)、木兰脂素中剂量组(40 mg·kg-1)、木兰脂素高剂量组(80 mg·kg-1).给予相应药物灌胃干预,模型组和空白组以等体积生理盐水灌胃,灌胃体积为10 mL·kg-1,每天1 次,连续7 d.对比干预前后各组豚鼠鼻部症状评分;HE 染色观察各组豚鼠鼻黏膜组织病理变化.体外分离并鉴定各组豚鼠鼻黏膜成纤维细胞,转化生长因子-β1 干预各组成纤维细胞后采用Western Blot 检测Fyn、STAT5、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)蛋白表达水平;RT-qPCR 检测Fyn mRNA、STAT5 mRNA、SCF mRNA、IL-10 mRNA 表达水平.结果:与模型组比较,木兰脂素各剂量组豚鼠鼻部症状评分显著降低(P＜0.05),鼻黏膜病理变化明显减轻.各组鼻黏膜成纤维细胞中波形蛋白均呈强阳性表达,提示鼻黏膜成纤维细胞成功分离;与模型组比较,木兰脂素各剂量组Fyn、SCF 蛋白与mRNA 表达水平明显降低(P＜0.05),STAT5、IL-10 蛋白与mRNA 表达水平明显升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:木兰脂素可减轻AR 豚鼠的鼻部症状和鼻黏膜组织病理改变,其作用机制可能与调控Fyn-STAT5 通路进而调节免疫反应有关.