慢性鼻窦炎是耳鼻咽喉科常见的炎症性气道疾病。鼻及鼻窦黏膜细胞接受环境刺激、释放细胞因子，在鼻腔、鼻窦的炎症反应和免疫调节过程中发挥重要的协调作用。细胞培养是体外研究的主要手段之一，由于体外培养的原代鼻黏膜细胞与体内细胞的生理功能和形态特点相似而日益受到关注。本文对鼻黏膜上皮细胞及成纤维细胞原代培养方案做一综述，探讨较佳的体外原代细胞培养方案，为鼻疾病甚至气道疾病的体外研究奠定基础。

慢性鼻窦炎是具有高度异质性的鼻窦黏膜的炎性疾病,其发病机制尚不完全清楚.鼻黏膜组织重塑在其发病中起关键作用,主要表现为上皮黏膜损伤、基膜增厚、新生血管形成、成纤维细胞增殖等,即细胞外基质的生成与降解失衡.基质金属蛋白酶是降解细胞外基质的重要酶类之一,基质金属蛋白酶及其组织抑制因子通过影响细胞外基质的平衡进而影响组织重塑,抑制基质金属蛋白酶对组织重塑的影响是慢性鼻窦炎的一种潜在的治疗方法.论文就关于基质金属蛋白酶及其组织抑制因子对慢性窦炎组织重塑影响的研究进展进行综述.

中医药改善慢性鼻窦炎内镜术后鼻黏膜重塑是有效预防术腔黏膜发生新病变及复发的关键.本文综述慢性鼻窦炎内镜术后鼻黏膜重塑的机制及中医药治疗的独特优势.虚、痰、瘀三者互为因果导致"肺失治节"是鼻黏膜重塑迁延不愈的主要原因.治疗以"补虚祛痰,益气活血"为原则,针药并用、内外兼治以调节Th17/Treg平衡,减少炎症浸润;阻断MAPK和NF-κB途径的磷酸化抑制TGF-β1诱导的肌成纤维细胞,减少胶原沉积及抑制其重塑等,促进黏膜上皮化进程,可为中医药防治鼻黏膜重塑进程的理论和临床治疗研究提供思路.

目的 观察低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因干扰对低氧环境下人鼻黏膜上皮细胞(HNEC)转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养HNEC,取传3代对数生长期细胞随机分为空白对照组、NC-shRNA组、HIF-shRNA组和低氧诱导组.空白对照组不予任何处理,NC-shRNA组、HIF-shRNA组分别予NC-shRNA、HIF-shRNA转染,并于转染24 h后经CoCl2化学诱导模拟低氧环境;低氧诱导组仅经CoC12化学诱导模拟低氧环境.采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组HIF-1 α、TGF-β1、VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达;采用Western blotting 法检测PI3 K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt表达.结果 与空白对照组比较,低氧诱导组HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF mRNA和蛋白表达均明显升高(P均＜0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组上述指标mRNA和蛋白表达均明显降低(P均＜0.05).与空白对照组比较,低氧诱导组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P均＜0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P均＜0.05);各组PI3K、Akt蛋白表达比较P均＞0.05.结论 低氧诱导HIF-1 α表达可促进人鼻黏膜上皮细胞TGF-β1、VEGF、bFGF表达,干扰HIF-1α基因则抑制上述因子的表达;HIF-1α对上述因子的调控机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路有关.

目的 探讨大黄素对肺炎链球菌肺炎小鼠肺组织炎症反应及丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)表达的影响.方法 选择32只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、肺炎模型组、大黄素组和头孢呋辛组各8只.肺炎模型组、大黄素组及头孢呋辛组麻醉后,用无菌针头刺破鼻黏膜,缓慢滴入肺炎链球菌混悬液50μL(0.5麦氏单位)建立链球菌性肺炎模型;对照组用无菌针头刺破鼻黏膜后滴入50μL生理盐水.造模成功后,大黄素组予以大黄素25 mg/(kg·d)灌胃,头孢呋辛酯组予以头孢呋辛酯50 mg/(kg·d)灌胃,对照组及模型组予以等量生理盐水灌胃,均灌胃1次/d,连续灌胃7 d.最后1次灌胃12 h后,将所有小鼠用水合氯醛麻醉,开胸取肺组织,将左肺用于HE染色,光镜下观察肺组织病理学表现;采用ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平;聚合酶链式反应(PCR)检测小鼠肺组织p38 MAPK mRNA表达,Western blotting法检测肺组织p38 MAPK蛋白表达.结果 对照组肺泡结构完整,肺泡间隔内毛细血管无明显充血、扩张及炎症细胞浸润;模型组肺间质大量炎性细胞浸润;大黄素组、头孢呋辛组肺泡腔内纤维素渗出、炎症细胞浸润均较模型组少.模型组肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平较对照组增高,大黄素组、头孢呋辛组肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平均较模型组降低(P均<0.05).模型组p38 MAPK mR-NA及蛋白表达均较对照组增高,大黄素组p38 MAPK mRNA及蛋白表达均较模型组降低(P均<0.05).结论 大黄素可以抑制肺炎链球菌肺炎小鼠肺组织的炎症反应,其机制可能与抑制p38 MAPK mRNA及蛋白表达有关.

目的:通过观察醒鼻凝胶滴鼻剂干预变应性鼻炎(AR)豚鼠鼻黏膜成纤维细胞对Fyn-STAT5信号通路的影响,进一步阐明醒鼻凝胶剂治疗AR可能的作用机制.方法:体外分离培养AR豚鼠鼻黏膜成纤维细胞并进行鉴定;将成纤维细胞分为正常组、模型组、TGF-β1组、醒鼻剂组和雷诺考特组,分别检测各组成纤维细胞中Fyn-STAT5信号通路及相关因子的基因和蛋白变化.结果:细胞鉴定结果显示,F3代成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性.MTT检测结果提示,经25ng/mL TGF-β1干预24h后,细胞活力增长最明显.Real-time PCR和Western blot检测结果显示,模型组中Fyn mRNA及蛋白和SCF mRNA高表达(P＜0.01),IL-10 mRNA和STAT5蛋白呈现低表达(P＜0.01);与模型组比较,3个给药组干预12、24h后,Fyn mRNA及蛋白、SCF mRNA的表达均显著降低,IL-10 mRNA、STAT5蛋白显著升高(P＜0.01,P＜0.05),干预48h后,酸鼻剂组及雷诺考特组IL-10 mRNA仍明显升高(P＜0.01).结论:醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过降低Fyn和SCF表达,同时上调STAT5和IL-10,从而抑制Fyn-STAT5信号传导通路,减轻AR成纤维细胞免疫反应.

目的 副交感神经抑制是否影响变应性鼻炎(AR)鼻黏膜Th1/Th2细胞因子及神经肽的表达.方法 24只小鼠随机分成对照组、AR模型组和AR治疗组.检测各组白细胞介素4、干扰素γ,P物质、血管活性肠肽的表达.结果 AR模型组白细胞介素4、P物质、血管活性肠肽表达水平明显高于对照组,AR治疗组上述因子低于AR组.结论 抑制胆碱能神经可以缓解AR症状,而且可以调节AR鼻黏膜Th2优势的免疫反应以及神经肽等炎症相关因子的表达.

目的:探讨音猬因子(sonic hedgehog,SHH)基因转染对大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesen-chymal stem cell,EMSCs)分化为神经样细胞的影响.方法:利用组织贴壁法分离、培养和纯化EMSCs,SHH基因重组腺病毒转染EMSCs(SHH-EMSCs),免疫荧光染色观察转染前后EMSCs的干细胞标志蛋白巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43,蛋白质印迹检测SHH蛋白表达.诱导分化实验分为4组:SHH-EMSCs诱导组、SHH-EMSCs正常培养组、EMSCs诱导组、EMSCs正常培养组;倒置相差显微镜观察分化过程中细胞形态变化;免疫荧光染色和蛋白质印迹检测诱导后轴突膜蛋白(GAP-43)、β-3微管蛋白(TUBB3)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达.并将SHH-EMSCs悬液注入大鼠脊髓组织内,观察该细胞在脊髓内存活和分化情况.结果:免疫荧光染色结果显示,经SHH基因转染后的EMSCs巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43阳性率达90％;蛋白质印迹结果显示,SHH蛋白表达明显升高.SHH-EMSCs诱导组培养7 d后,细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经细胞样形态;免疫荧光染色和蛋白质印迹结果表明SHH-EMSCs诱导组GAP-43、TUBB3、MBP和Smoothen的表达水平明显高于其他3组,差异有统计学意义;GFAP在4组细胞中均为弱表达,无显著差异.SHH-EMSCs在大鼠脊髓内存活情况良好且表达TUBB3.结论:SHH基因转染的EMSCs具有更高的向神经样细胞分化效率,并可在脊髓内存活;EMSCs可望成为移植脊修复髓损伤的一种新的种子细胞.

目的 观察重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)在慢性鼻窦炎鼻息肉内镜术后康复中的疗效.方法 将在该院耳鼻喉科接受鼻内镜手术治疗的192例慢性鼻窦炎鼻息肉患者按入院顺序随机分为两组,将术后未给予rh-bFGF治疗的96例患者作为对照组,术后给予rh-bFGF治疗的96例患者作为观察组.观察术后两组患者的术区黏膜完全上皮化时间和比率、临床疗效和并发症.结果 观察组患者鼻腔黏膜完全上皮化时间明显短于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组患者在术后6个月内鼻腔黏膜完全上皮化比例明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组治疗总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);对照组11例、观察组1例患者出现并发症.结论 鼻内镜术后应用rh-bFGF辅助治疗可以促进鼻黏膜修复,减少并发症的发生,疗效显著.

背景:鼻黏膜成纤维细胞可通过分泌多种细胞因子和趋化因子, 参与多种鼻部疾病的炎症反应和损伤修复;豚鼠是最适合用于变态反应性疾病研究的实验动物之一.目的:探讨豚鼠鼻黏膜成纤维细胞分离、培养、纯化和鉴定的有效方法.方法:胶原酶消化法分离豚鼠鼻黏膜成纤维细胞, 经差速贴壁法纯化后, 采用倒置相差显微镜进行形态学观察, 波形蛋白免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞, 并通过MTT检测法绘制细胞生长曲线.结果与结论:①倒置相差显微镜下可见原代鼻黏膜成纤维细胞中有不同形态细胞交杂生长, 以类梭形和扁平状细胞为主, 细胞成团散落分布;纯化后的成纤维细胞形态均一, 多呈长梭形, 分布较均匀, 呈鱼群状或放射状排列;②免疫细胞化学染色显示, 成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性;③细胞生长曲线大致呈"S"形.④结果表明, 所分离培养的细胞具有典型的成纤维细胞生物学特征.