目的:探索黄花蒿花粉变应性小鼠鼻炎模型维持稳定的激发条件。方法:以BALB/c小鼠为实验动物，选用黄花蒿花粉变应原提取物为致敏蛋白质，于1 d、4 d、7 d对每只小鼠皮下注射0.1 ml的以Art a1计浓度为20 μg/ml的黄花蒿花粉变应原提取液。致敏结束后停息1周，用以Art a1计浓度为500 μg/ml的黄花蒿花粉变应原提取液对小鼠进行首次滴鼻激发，每鼻孔10 μl。将模型组分为3组分别连续激发7 d、10 d、14 d，每隔4周再激发7 d，探索首次激发时间。空白对照组小鼠以生理盐水进行免疫和滴鼻激发。造模后观察各组小鼠行为学和鼻部病理学变化，检测致敏小鼠体液免疫和细胞免疫应答变化。确定最佳首次滴鼻激发周期后，进一步比较不同激发频次对致敏效果的影响。结果:抗原首次激发后，10 d组小鼠过敏症状明显高于7 d和14 d组，且10 d和14 d组小鼠血清特异性IgE抗体水平明显高于7 d组。与空白对照组比较，二次激发后3个模型组小鼠组仍维持明显过敏症状；鼻部均有明显的上皮细胞增生、鼻甲肿大、炎细胞增多等病理变化；血清特异性IgE抗体水平均显著增高；抗原特异性IL-4和IL-6淋巴细胞增殖明显，其中10 d和14 d组高于7 d组。不同激发频次对过敏模型的稳定性有较大影响，每隔2周激发一次的致敏小鼠过敏症状以及血清中抗原特异性抗体水平均显著高于每隔4周激发的小鼠。结论:本研究通过对比不同首次抗原激发时间以及不同激发频次对黄花蒿致敏小鼠模型的影响，最终优化了过敏小鼠评价模型建立的参数，为脱敏治疗药物疗效评价体系的建立提供参考。

目的 基于鼻黏膜-海马神经免疫机制探讨醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)大鼠的影响.方法 选择21日龄(PND21)SPF级SD大鼠40只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组10只.除正常组外,其余3组均采用卵清蛋白(OVA)致敏的方法构建AR动物模型.造模成功后,正常组和模型组均给予生理盐水滴鼻(50 μL/次),中药组给予醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻(50 μL/次),西药组给予布地奈德鼻喷雾剂滴鼻(20 μL/次),2次/d,连续治疗12 d.采用AR大鼠行为学评分标准对大鼠进行鼻炎行为学评分;采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清免疫球蛋白E(IgE)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用苏木精-伊红染色法(HE)观察鼻黏膜组织病理变化及嗜酸性粒细胞(EOS)计数;采用免疫组化法检测海马组织非受体酪氨酸激酶Fyn、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y(NPY)表达水平;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平.结果 ① 鼻炎行为学评分:与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗前鼻炎行为学评分均明显更高(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P＜0.05).与治疗前比较,中药组和模型组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P＜0.05).② 学习记忆功能:与正常组比较,模型组平台潜伏期、游泳总路程均明显更长(P＜0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更低(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后平台潜伏期和游泳总路程均明显更短(P＜0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更高(P＜0.05).③ 血清IgE、TGF-β1含量:与正常组比较,模型组血清IgE、TGF-β1含量均明显更高(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后血清IgE、TGF-β1含量均明显更低(P＜0.05).④ 鼻黏膜组织病理变化及EOS计数:模型组鼻黏膜水肿,上皮细胞排列紊乱;中药组和西药组治疗后鼻黏膜水肿明显减轻,上皮细胞结构较完整.与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗后大鼠鼻黏膜EOS计数均明显增多(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻黏膜EOS计数均明显减少(P＜0.05).⑤ 海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平和蛋白表达水平:与正常组比较,模型组海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显升高(P＜0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显降低(P＜0.05).与模型组比较,中药组和西药组治疗后海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显降低(P＜0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显升高(P＜0.05).结论 醒鼻凝胶滴鼻剂可改善AR大鼠鼻炎行为学和学习记忆功能,可能与通过Fyn信号通路调节鼻黏膜-海马神经免疫机制有关.

2023年度优秀编委田道法 郭裕 韩朝 刘元献2023年度全国中西医结合耳鼻咽喉科优秀论文奖一等奖《穴位埋线对肺虚型变应性鼻炎大鼠的行为学改变》黄河银 1,2 王江 3 张蓝之 4 张勤修 4,5 吴小娟 2 庞锐 21 成都中医药大学(四川成都,610000) 2 四川省中西医结合医院耳鼻咽喉科(四川成都) 3 渠县中医院(四川达州) 4 成都中医药大学附属医院(四川成都) 5 成都中医药大学医学与生命科学学院(四川成都)——中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2023,31(1):1

目的:探讨通窍汤加减对过敏性鼻炎(AR)模型大鼠血清可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)、T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(Tim-1)表达的影响.方法:SPF级SD大鼠,建模成功后分为模型组、低剂量组、高剂量组以及地塞米松组.检测各组大鼠行为学评分,ELISA法检测IFN-γ、IL-4水平,H-E染色观察大鼠鼻黏膜组织病理学形态结构,Real time-PCR及免疫印迹检测sPD-L1、Tim-1 mRNA及蛋白表达.结果:与健康组相比,模型组行为学评分、IL-4水平、Tim-1 mRNA及蛋白表达均升高,IFN-γ水平、sPD-L1 mRNA及蛋白表达均降低;与模型组相比,低、高剂量组及地塞米松组行为学评分、IL-4水平、Tim-1 mRNA及蛋白表达均降低,IFN-γ水平、sPD-L1 mRNA及蛋白表达均升高;与低剂量组相比,高剂量组与地塞米松组行为学评分、IL-4水平、Tim-1 mRNA及蛋白表达均降低,IFN-γ水平、sPD-L1 mRNA及蛋白表达均升高;与高剂量组相比,地塞米松组行为学评分、IL-4水平、Tim-1 mRNA及蛋白表达均升高,IFN-γ水平、sPD-L1 mRNA及蛋白表达均降低.模型组可见鼻黏膜下层水肿,并有大量炎症细胞浸润;与模型组相比,低剂量组、高剂量组以及地塞米松组均有所改善.结论:通窍汤加减对模型AR大鼠具有提高血清sPD-L1水平,以及降低Tim-1水平和调控Th1/Th2水平比例的功效.

目的 探究日本血吸虫源多肽SJMHE1对卵清蛋白(OVA)诱导的小鼠变应性鼻炎(AR)的保护作用与机制.方法 将15只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组、AR组以及AR+SJMHE1组,每组5只.正常组全程未给予任何处理;AR组在第0、7、14天腹腔给予OVA佐剂混悬液致敏,随后在第28～32天鼻腔滴注5%OVA溶液(20 μL)进行局部激发,每日1次;AR+SJMHE1组在诱导变应性鼻炎的基础上于第0、14、28天皮下注射SJMHE1乳化液进行干预.末次激发后观察各组小鼠20 min,并进行行为学(挠鼻和打喷嚏)记录;苏木精-伊红染色观察各组小鼠鼻黏膜病理学改变;酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-4、IL-13和IL-10含量;流式细胞术检测小鼠脾脏CD19+细胞中IL-10+细胞比例.另选6只雌性BALB/c小鼠分为空白对照组和异硫氰酸荧光素(FITC)-SJMHE1组,每组3只.空白对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS),FITC-SJMHE1组皮下注射FITC标记的SJMHE1(FITC-SJMHE1).流式细胞技术检测FITC阳性细胞在脾脏中的含量,并观察CD19+细胞与FITC-SJMHE1 结合比例.结果 与AR组挠鼻次数(33.20±5.07)次/20 min和打喷嚏次数(中位数=8次/20 min)相比,AR+SJMHE1组小鼠挠鼻次数(17.20±6.02)次/20 min和打喷嚏次数(中位数=1次/20 min)显著下降,差异均有统计学意义(F/H=33.71、10.81,P均<0.01),且鼻粘膜病理损伤得到缓解.与AR组小鼠血清中IL-4(21.55±2.78)pg/mL、IL-13(40.80±3.54)pg/mL和IL-10(61.32±15.30)pg/mL的水平相比,AR+SJMHE1组IL-4(14.39±1.53)pg/mL、IL-13(22.49±3.32)pg/mL水平降低,IL-10(108.65±25.26)pg/mL水平升高,差异均有统计学意义(F=58.92、80.10、17.12,P均<0.01).与AR组小鼠脾脏CD19+细胞中IL-10+细胞比例(0.79±0.32)%相比,AR+SJMHE1 组IL-10+比例(3.35±0.99)%显著上调,差异有统计学意义(F=19.55,P<0.01).流式细胞术结果显示FITC-SJMHE1可分布于小鼠脾脏且与CD19+细胞结合.结论 SJMHE1对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有干预作用,可能与上调脾脏中Breg细胞比例有关.

目的:探索麻黄细辛附子汤(MXFD)及其拆方对过敏性鼻炎(AR)的作用机制,明确其是否通过2型固有淋巴样细胞(ILC2s)上的神经通路神经调节肽U(NMU)/神经调节肽U受体1(NMUR1)发挥抗过敏作用.方法:C57BL/6J小鼠分别按单味药、两味药、三味药组合给药分为7组,使用鸡卵清蛋白(OVA)制备AR模型,造模成功后给予不同组合的中药灌胃治疗14 d.过敏反应行为学评分法评价模型是否成功;免疫荧光双染法检测肺组织中活化T细胞核因子2(NFAT2)的含量;逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺组织中神经调节肽U受体1(NMUR1)的基因表达水平.结果:小鼠造模成功,各组NFAT2、NMUR1基因的表达水平均升高(均P＜0.01).中药治疗后,给药各组过敏反应行为学评分均降低(均P＜0.01);NFAT2表达均降低(均P＜0.01),麻黄组抑制效果最显著;除辛附组,其他组NMUR1的基因表达水平均降低(均P＜0.01),麻附组、细辛组抑制效果最显著.结论:麻黄细辛附子汤可影响NMU/NMUR1通路抑制过敏性鼻炎,麻黄单用在抑制NFAT2环节效果最优,麻黄和附子合用、细辛单用抑制NMUR1表达效果最优.

目的 比较联合处方麻芥颗粒与六君子颗粒及其单独处方对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠鼻黏膜紧密连接蛋白、炎症因子、鼻黏膜菌群的影响,研究联合处方麻芥颗粒与六君子颗粒及其单独处方治疗变应性鼻炎大鼠的机制.方法 将60只小鼠随机分为6组,每组10只,除空白组外,其余5组用卵清蛋白诱导AR模型后,根据所给药物分为模型组、六君子组、麻芥组、联合组、辛芩组.用反转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reac-tion,RT-PCR)法检测AR大鼠鼻黏膜紧密连接蛋白(tight junction,TJ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的基因表达水平,并采用16SrDNA测序法评价鼻黏膜菌群结构的变化.结果 各治疗组均能显著降低AR大鼠行为学得分;各治疗组均能显著下调血清中免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)水平;麻芥组、联合组、辛芩组显著提升连接蛋白-1(claudin-1)mRNA表达(P＜0.05),各治疗组均能显著提升闭合蛋白(occludin)mRNA表达水平(P＜0.05);除六君子组外各治疗组均降低AR大鼠鼻黏膜TNF-α的表达(P＜0.05);除六君子组外各治疗组对AR大鼠鼻黏膜TGF-β的mRNA表达均显著上调(P＜0.05).各治疗组均可提升AR大鼠鼻黏膜菌群多样性和相对丰度;在门水平上,与空白组比较,AR大鼠模型组变形菌丰度升高,这种变化被除辛芩组外的各治疗组逆转;在科水平上,相较于空白组,模型组肠杆菌相对丰度显著降低;在麻芥颗粒联合六君子颗粒组中以乳杆菌科(Lactobacilliaceae)相对丰度最为丰富,与模型组对比显著升高(P＜0.01);在麻芥组、六君子大鼠中检测到芽孢菌科(Bacillaceae)与葡萄球菌科(Staphylococcaceae)相对丰度升高(P＜0.01);线性判别分析(linear dis-criminant analysis,LDA)得分结果检测到AR大鼠富集大肠杆菌志贺菌属,六君子组富集芽孢杆菌、麻芥组富集芽孢杆菌与粪便细菌、联合组富集乳杆菌等厚壁菌属.结论 麻芥颗粒联合六君子颗粒可使炎症因子表达量恢复至正常水平并提高变应性鼻炎大鼠TJ蛋白表达水平而增强鼻黏膜屏障功能,其作用机制可能是通过调整鼻黏膜菌群多样性与相对丰度.

目的 探讨鼻敏方治疗变应性鼻炎(AR)肺脾气虚证黏液高分泌的可能作用机制.方法 34只SD大鼠随机分为空白组(8只)、模型组(8只)、鼻敏方低剂量组(8只)、鼻敏方高剂量组(10只).除空白组外,其余各组大鼠以烟熏+番泻叶灌胃+卵清蛋白法建立AR肺脾气虚证大鼠模型.造模结束后,鼻敏方低、高剂量组大鼠分别给予鼻敏方浓缩液(浓度为2.16g/ml)1.08g/100g、2.16g/100g灌胃,模型组给予0.5 ml/100 g生理盐水灌胃,均每日1次,持续28天;空白组不干预.干预后进行行为学评价,ELISA法检测大鼠外周血总免疫球蛋白E(IgE)水平,HE染色观察大鼠鼻上皮黏膜病理学变化,免疫组化法检测鼻上皮黏膜的跨膜蛋白16A(TMEM16A)、黏蛋白5AC(MUC5AC)蛋白表达,Western Blot法检测鼻上皮黏膜核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达,RT-PCR法检测鼻上皮黏膜TMEM16A、MUC5AC、NF-κBmRNA表达.结果 HE染色显示,空白组大鼠鼻上皮黏膜上皮细胞结构完整无脱落,无水肿、坏死等病变;模型组大鼠鼻上皮黏膜上皮组织增厚且部分脱落,可见嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润;鼻敏方高、低剂量组大鼠鼻上皮黏膜组织病理均有改善,且鼻敏方高剂量组改善更明显.与空白组比较,模型组大鼠行为学积分及外周血总IgE水平显著升高,鼻上皮黏膜TMEM16A、MUC5AC、NF-κB蛋白及mRNA表达升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,鼻敏方高剂量组大鼠行为学积分及外周血总IgE水平降低,鼻上皮黏膜TMEM16A、MUC5AC、NF-κB蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05或P＜0.01);鼻敏方低剂量组大鼠行为学积分及外周血总IgE水平降低,鼻上皮黏膜TMEM16A、MUC5AC蛋白及mRNA表达降低,NF-κB蛋白表达降低(P＜0.05或P＜0.01),NF-κB mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).与鼻敏方低剂量组比较,鼻敏方高剂量组NF-κB蛋白表达降低(P＜0.01).结论 鼻敏方可能通过调控鼻上皮黏膜TMEM16A/NF-KB/MUC5AC信号通路改善AR肺脾气虚症状及黏液高分泌.

目的:探讨针刺"蝶腭穴"对变应性鼻炎(AR)大鼠Toll样受体 4(TLR4)、髓样分化因子 88(MyD88)、核转录因子κB(NF-κB)、转录因子T-bet(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)的蛋白表达水平及相关炎性细胞因子的影响.方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针刺组,每组6只.采用卵清蛋白诱导建立AR大鼠模型.针刺组大鼠行双侧"蝶腭穴"针刺,假针刺组仅行假针刺,均每日1次,共6次.记录各组大鼠行为学评分;HE染色法观察大鼠鼻黏膜形态变化;ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-10、IL-17的含量;Western blot法检测大鼠鼻黏膜中TLR4、MyD88、NF-κB p65、T-bet、GATA-3蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组行为学评分升高(P<0.05),血清IgE、OVA-sIgE、IL-4、IL-17的含量及鼻黏膜中GATA-3、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05),血清IFN-γ、IL-10含量及鼻黏膜T-bet蛋白表达水平降低(P<0.05).与模型组比较,针刺组行为学评分降低(P<0.05),血清IgE、OVA-sIgE、IL-4、IL-17的含量及鼻黏膜中GATA-3、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),血清IFN-γ、IL-10的含量及鼻黏膜T-bet蛋白表达水平升高(P<0.05);假针刺组以上指标差异均无统计学意义.模型组和假针刺组可见鼻黏膜炎性浸润,针刺组鼻黏膜炎性反应明显减轻.结论:针刺"蝶腭穴"可减轻OVA诱导的AR大鼠的症状,改善鼻黏膜炎性反应,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,有效调控Th1/Th2、Treg/Th17细胞因子及T-bet/GATA-3的平衡有关.

目的 观察益气温阳方(黄芪、党参、干姜、桂枝、麻黄、辛夷、五味子、地龙、甘草)对变应性鼻炎小鼠模型的治疗效果和对鼻黏膜细胞抑制自噬、保护紧密连接关键蛋白——闭锁连接蛋白1(ZO-1)及闭合蛋白(occludin)的影响.方法 将30只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为6组:空白组,模型组,益气温阳方低、中、高剂量组(7、14、28 g/kg)及西替利嗪组(1.667 mg/kg),每组5只.卵清蛋白腹腔注射加鼻部激发致敏造模,鼻部激发致敏前1 h灌胃给药,共7 d.对小鼠行为进行评分.采集小鼠鼻黏膜组织,HE染色观察鼻黏膜炎症反应,过碘酸希夫染色观察鼻黏膜杯状细胞增生情况,酶联免疫吸附测定法检测鼻腔灌洗液IgE含量,免疫组化法检测空白组、模型组、益气温阳方高剂量组鼻黏膜中ZO-1及occludin蛋白表达,蛋白质印迹法检测鼻黏膜中自噬微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、P62及Beclin1蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠行为学总分升高(P<0.01),挠鼻、喷嚏、流涕各项评分增加.鼻黏膜上皮中断、被破坏,大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生,黏液分泌增多,黏膜肿胀明显,鼻腔灌洗液中IgE含量增加(P<0.01).鼻黏膜中ZO-1、occlu-din蛋白表达减少(P<0.05).LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1蛋白表达增加(P<0.05),P62蛋白表达减少(P<0.05).给药干预后,与模型组比较,益气温阳方高剂量组和西替利嗪组小鼠行为学总分降低(P<0.01),鼻黏膜肿胀减轻,炎性细胞浸润和杯状细胞数量减少,鼻腔灌洗液中IgE含量减少(P<0.01),鼻黏膜中ZO-1、occludin蛋白表达增加(P<0.05).益气温阳方高剂量组小鼠LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1蛋白表达减少(P<0.05),P62蛋白表达增加(P<0.05).结论 益气温阳方对变应性鼻炎小鼠具有良好的治疗效果,该作用机制可能与其抑制鼻黏膜细胞自噬从而促进鼻黏膜修复相关.