目的 探讨重组人干扰素α-2b(IFNα-2b)对丙型肝炎患者血清铁调素(Hepcidin)的影响及其机制.方法 选择2020年1月至2023年1月丙型肝炎患者35例,按近3个月是否接受IFNα-2b治疗分为治疗组(n=20)和未治疗组(n=15),检测2组血清Hepcidin水平.另用0、50、100、200、400 μL五种不同剂量的IFNα-2b处理HepG2细胞24 h.分别检测血清Hepcidin、信号转导与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(pSTAT3)的mRNA表达量.结果 治疗组血清 Hepcidin 为(94.91±16.28)ng/mL,明显低于未治疗组的(107.99±17.06)ng/mL,差异有统计学意义(t=4.396,P＜0.05).IFNα-2b 剂量为0、50、100、200、400μL时,HepG2 细胞的 Hepcidin mRNA 表达分别为 1.00±0.23、0.67±0.12、0.28±0.04、0.25±0.03、0.17±0.02,呈递减趋势,各组Hepcidin mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05).组间两两比较,400μL低于 0、50、100、200 μL;100、200μL低于 0、50 μL;50μL低于 0 μL,差异均有统计学意义(P＜0.05).0、50、100、200、400 μL HepG2 细胞的 STAT3 mRNA 表达水平分别为 0.72±0.11、0.74±0.12、0.68±0.09、0.66±0.06、0.66±0.08,差异均无统计学意义(＞P0.05).50、100、200、400μL剂量的IFNα-2b的PSTAT3蛋白水平分别为0.76±0.14、0.65±0.06、0.57±0.07、0.54±0.05 均低于0μL的(0.85±0.16),差异有统计学意义(P＜0.05),50、100、200、400 μL 剂量的IFNα-2b的PSTAT3蛋白水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 丙型肝炎患者IFNα-2b治疗后血清Hepcidin水平会下调,且下调幅度与剂量有关,其机制可能与STAT3通路磷酸活化受阻有关.

目的:研究重组人干扰素α-1b(rhIFNα-1b)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染性肺炎患儿单核细胞Toll样受体4(TLR4)蛋白表达、免疫功能的影响。方法:本研究为病例对照研究。采用单纯随机抽样法，选取青岛市胶州中心医院2017年9月至2018年9月104例RSV感染性肺炎患儿作为研究对象，按照随机抽签法分为观察组与对照组，每组各52例。对照组采用常规治疗，观察组在对照组基础上加用rhIFNα-1b，持续治疗8 d。观察2组临床疗效、临床症状的改善情况、治疗前后免疫指标水平[CD3 +、CD4 +、CD8 +、CD4 +/CD8 +、血清免疫球蛋白(IgE)]、治疗前后单核细胞TLR4表达情况(TLR4 mRNA、TLR4阳性率)、药物不良反应发生情况。 结果:治疗后观察组总有效率高于对照组(90.38%比73.08%， χ2＝5.22， P＝0.022)；观察组白细胞计数及体温恢复正常时间、咳嗽症状消失时间、哮喘缓解及喘息音消失时间、肺部查体阳性体征消失时间及住院时长等临床疗效指标均优于对照组( P值均<0.05)；而CD3 +、CD4 +、CD4 +/CD8 +高于对照组( P值均<0.05)，CD8 +、IgE水平低于对照组( P值均<0.05)；治疗后观察组TLR4 mRNA表达、TLR4阳性率低于治疗前及对照组治疗后( P值均<0.05)；2组均未记录到药物不良反应。 结论:rhIFNα-1治疗RSV肺炎患儿疗效显著，可以显著加速患儿症状改善，同时增强患儿机体免疫功能，降低体内单核细胞TLR4表达。

目的:探讨肺炎克雷伯菌(KP)外膜蛋白A(OmpA)和黏附素MrkD优势抗原表位融合蛋白对KP感染小鼠的免疫保护作用。方法:根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP ompA和mrkD序列，通过生信分析选取这两个蛋白的优势抗原表位，经融合聚合酶链反应(PCR)扩增表位序列后克隆至pColdI载体，并转入本科室保存的大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，Ni ＋层析凝胶纯化后获得重组蛋白rAD。rAD经皮下免疫22只BALB/c小鼠，同时设置22只佐剂对照组。完成免疫程序后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对小鼠血清中的抗体水平和脾脏体外抗原刺激后细胞因子分泌水平进行测定，并对小鼠鼻腔注射KP，观察免疫后的小鼠存活率和肺脏细菌数量。组间比较采用 t检验。 结果:分别扩增出ompA和mrkD抗原表位序列，并成功融合，融合片段大小为1 056 bp，与预测大小一致，克隆至pColdI载体后测序，测序正确。重组表达菌BL21(DE3)-pColdI-rAD经IPTG诱导后破碎收集上清纯化，获得可溶性rAD，大小为38.4×10 3，与预测大小一致。rAD 3次免疫BALB/c小鼠后，免疫组抗体滴度显著高于对照组(170 667.00±59 121.00比0.00±0.00， t＝5.00， P<0.01)。KP感染小鼠后，免疫组小鼠存活率显著高于对照组[(65.00±5.00)%比(0.00±0.00)%， t＝22.52， P<0.01]，免疫组小鼠肺脏细菌数显著低于对照组[(9 500.00±1 384.00) CFU比(87 833.00±25 365.00) CFU， t＝7.55， P<0.01]。脾细胞分离后经rAD刺激，免疫组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌量均显著高于对照组[(115.70±17.21) pg/ml比(24.00±9.17) pg/ml， t＝8.14， P<0.01；(200.30±8.51) pg/ml比(9.00±3.00) pg/ml， t＝36.75， P<0.01；(92.33±6.11) pg/ml比(9.67±1.53) pg/ml， t＝22.73， P<0.01]。 结论:KP OmpA和MrkD优势抗原表位融合蛋白rAD，免疫BALB/c小鼠有助于对KP感染的抵抗。

目的:观察原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者中IL-38的水平，评估IL-38对PBC患者调节性T细胞（Tregs）向辅助性T细胞（Th）17转分化的调控作用。方法:入组46例PBC患者和24名健康对照者，ELISA测定血清IL-38、IL-35、IL-17水平，流式细胞术检测PMBCs中CD4 +CD25 +CD127 dim/-Tregs和CD4 +IL-17A +Th17细胞比例，实时定量PCR法测定转录因子叉头盒蛋白P3（FoxP3）和维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）mRNA表达。纯化的Tregs使用重组IL-38刺激后与自体PBMCs共培养，通过测定细胞增殖和上清细胞因子表达评估Tregs功能。将Tregs向Th17细胞极化培养，并加入重组IL-38刺激，通过检测CCR4、CCR6表达以及IL-17分泌、RORγt mRNA评估IL-38对Tregs向Th17表型转分化的影响。组间比较采用独立样本 t检验或Mann-Whitney U检验。 结果:PBC组血清IL-38水平低于健康对照组，差异有统计学意义[68.0（48.5，96.7）pg/ml与89.6（58.0，265.5）pg/ml， Z=3.25， P=0.037]。PBC组Tregs比例[（6.9±1.3）%与（11.3±3.5）%， t=7.64， P<0.001]、FoxP3 mRNA表达（1.0±0.3与1.9±0.7， t=7.74， P<0.001）、血清IL-35水平[25.9（16.1，37.3）pg/ml与31.0（24.8，52.3）pg/ml， Z=2.02， P=0.047]低于对照组，PBC组Th17细胞比例[（5.5±1.4）%与（3.8±1.0）%， t=5.43， P<0.001]、RORγt mRNA表达（1.4±0.6与1.0±0.4， t=2.72， P=0.008）、血清IL-17水平[202.0（121.6，311.6）pg/ml与104.5（79.8，155.5）pg/ml， Z=4.43， P<0.001]高于对照组。纯化Tregs与自体PBMCs共培养后，PBC组细胞增殖高于对照组[（6.5±1.4）×10 5个与（5.3±1.1）×10 5个， t=2.49， P=0.020]，PBC组上清中IL-35和IL-10分泌水平低于对照组（ P<0.05），但干扰素-γ分泌水平高于对照组（ P=0.011）。PBC组Tregs向Th17细胞极化培养后，CCR4和CCR6平均荧光强度（MFI）、RORγt mRNA和IL-17分泌水平均高于对照组（ P<0.05），但2组间差异无统计学意义。IL-38刺激可增强PBC组和对照组Tregs抑制活性，表现为细胞增殖减弱，IL-35和IL-10分泌增加（ P<0.05）。IL-38刺激仅抑制PBC组Tregs向Th17表型转分化，表现为CCR4 MFI、CCR6 MFI和IL-17分泌降低 P<0.05），但IL-38并未影响对照组Tregs向Th17表型转分化。 结论:IL-38在PBC疾病过程中发挥免疫保护和抑制炎症应答功能，抑制Tregs向Th17细胞转分化。

目的:探讨新疆出血热病毒（XHFV）糖蛋白的2个抗原优势区（GcⅠ和GcⅡ）以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法:以在5'端加入或不加鼠白细胞介素-2（IL-2）信号肽与通用型辅助性T细胞（Th）表位为不同设计策略，将GcⅠ、GcⅡ及GcⅠ上已鉴定出来的表位（Gc 233~248、Gc 241~256和Gc 281~296）分别进行融合并构建至真核表达载体pVAX1与原核表达载体pET-28a上。采用间接免疫荧光法检测重组真核质粒的体外表达效果后进行大量提取，将重组原核质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达及纯化。通过基因免疫、蛋白免疫和DNA初免-蛋白加强免疫（联合免疫）3种方式免疫BALB/c小鼠，酶联免疫吸附测定法检测小鼠体内IgG抗体水平以及小鼠脾细胞培养上清中IL-4和干扰素-γ（IFN-γ）的含量，噻唑蓝比色法检测小鼠脾T淋巴细胞的增殖情况。 结果:双酶切及测序结果表明8种重组质粒构建成功。荧光显微镜下可见构建的重组真核质粒在体外细胞均能成功表达。3次免疫小鼠后，各实验组的小鼠血清IgG抗体水平和刺激指数均明显高于对照组（均 P<0.01）。Th2型细胞因子IL-4与Th1型细胞因子IFN-γ的质量浓度检测结果表明，联合免疫组引起的免疫应答偏向Th1型。 结论:成功构建了XHFV糖蛋白的多表位嵌合疫苗且靶抗原在小鼠体内可有效表达，各免疫组与对照组相比均激发了较强的体液免疫及细胞免疫应答，其中pVAX1-ST（GcⅠe+GcⅡ）联合重组蛋白r（GcⅠe+GcⅡ）的免疫效果最好，有望作为XHFV的新型候选疫苗。

目的:初步研究幽门螺杆菌( Helicobacter pylori ，HP)鞭毛蛋白FliD的部分免疫学特征。 方法:原核表达重组FliD蛋白；制备rFliD兔多克隆抗体，同时酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测rFliD特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G, IgG)与免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)水平；酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot, ELISPOT)检测rFliD刺激Hp患者外周血单核细胞(peripheral blood monocytes, PBMC)后的γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)及白细胞介素4(interleukin4, IL-4)表达水平；流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测rFliD蛋白刺激胃粘膜上皮细胞(Gastric epithelial cells, GES-1)细胞后的凋亡比例。结果:rFliD原核表达纯化成功；成功制备高效价rFliD兔多克隆抗体，并发现rFliD可诱导家兔产生高水平IgG与IgM，与免疫前血清比差异具有统计学意义( t值分别为5.42、8.18， P值均<0.05))，效价可达1：102 400；与健康对照组(healthy control, HC)相比，HP组rFliD特异性IFN-γ与IL-4均显著增高( t值分别为21.91, 13.57， P值均<0.05)，但产生IFN-γ的水平显著高于IL-4( t＝7.55， P< 0.05)；与磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组相比，rFliD刺激GES-1细胞后24或72 h均可发生显著性凋亡且差异具有统计学意义( t值分别为10.12、10.90， P值均<0.05)。 结论:幽门螺杆菌鞭毛FliD蛋白具有强免疫原性，可诱导产生较强的体液及细胞免疫应答，且细胞免疫应答以IFN-γ高表达的Th2型为主；同时发现其对GES-1细胞存在一定程度的凋亡效应。

目的:探讨重组人干扰素α-2b雾化吸入联合高压氧综合治疗在手足口病患者感染防控护理中的应用。方法:选择2016年6月至2018年1月入院治疗的手足口病患者140例，根据护理方案不同分为对照组和观察组，各70例。两组均予以常规方法对症支持治疗，均采用重组人干扰素α-2b雾化吸入联合高压氧综合治疗，对照组采用常规方法护理干预，观察组采用对症护理干预，两组均进行1个月护理。记录并统计两组护理后退热、疱疹结痂、疱疹消退、初次进食及住院时间；采用双抗体夹心法测定两组护理前后C-反应蛋白(CRP)水平；采用酶联免疫吸附试验测定两组护理前后1个月白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(TNF-γ)及白细胞介素-1β(IL-1β)水平；记录并统计两组护理后感染、骨髓抑制、白细胞减少、胃绞痛及嗜酸粒细胞增多发生率，比较两组护理效果及对感染率的影响。结果:观察组护理后1个月退热、疱疹结痂、疱疹消退、初次进食及住院时间均短于对照组；观察组与对照组护理后1个月CRP、IL-6、TNF-r和IL-1β水平均低于护理前；观察组治疗、护理后1个月CRP、IL-6、TNF-r和IL-1β水平均低于对照组；观察组护理后1个月感染、骨髓抑制、白细胞减少、胃绞痛及嗜酸粒细胞增多发生率均低于对照组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:将重组人干扰素α-2b雾化吸入联合高压氧综合治疗用于手足口病患者中有助于缩短症状改善时间，降低炎性因子水平，治疗过程中加强患者对症护理干预有助于降低感染率，值得推广应用。

目的:构建表达结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis， Mtb)潜伏期表达抗原Rv3133c，通过人群以及小鼠实验评价其免疫原性。 方法:构建重组质粒pPROEX-Rv3133c，诱导表达并纯化蛋白质，经Western blot鉴定后，用全血干扰素释放试验评价重组蛋白rRv3133c在 Mtb感染人群中的免疫原性；联合佐剂DC免疫小鼠，检测小鼠血清中rRv3133c特异性抗体分泌水平、脾细胞中抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平以及脾细胞中多功能T细胞免疫应答水平和肺脏组织细胞因子mRNA表达水平。 结果:成功构建表达rRv3133c。rRv3133c可刺激 Mtb感染者尤其是潜伏感染者产生高水平的IFN-γ。免疫小鼠后，rRv3133c+DC组小鼠脾脏IFN-γ、TNF-α、IL-2水平，以及IFN-γ +TNF-α +CD4 +T细胞数量和肺脏组织中抗原特异性IFN-γ、TNF-α、iNOS的mRNA表达水平均高于BCG组，但低于BCG+rRv3133c+DC组；rRv3133c+DC组和BCG+rRv3133c+DC组小鼠血清中IgG2a/IgG1比值均大于1，显著高于BCG组。 结论:rRv3133c具有良好的免疫原性，可以诱发机体产生较强的Th1型免疫应答，是结核病亚单位疫苗的潜在候选靶抗原。

目的:探讨抗程序性死亡受体-1(PD-1)抗体联合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞抗肿瘤作用的可能机制，及此过程中CXC趋化因子受体3(CXCR3)-CXC趋化因子配体9/10/11(CXCL9/10/11)信号轴的作用。方法:取肾细胞癌(RCC)患者外周血10 ml，密度梯度离心获取外周血单个核细胞(PBMC)，利用重组纤维连接蛋白(5 μg/ml)、抗CD3抗体(5 μg/ml)、干扰素-γ(IFN-γ，1 000 U/ml)及白细胞介素-2(500 U/ml)制备CIK细胞。流式细胞技术检测CIK细胞表型，CIK细胞及PBMC中T淋巴细胞CXCR3的表达。利用消化酶混合液消化肾癌组织制备RCC单细胞悬液，分为两组，一组加入抗PD-1抗体(抗PD-1组)，另一组加入非特异性IgG设为对照组。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CXCL9/10/11及IFN-γ mRNA表达水平，Transwell实验检测CIK细胞迁移能力。两组间比较采用 t检验，相关分析采用线性回归。 结果:CIK细胞中CD3 +CD4 +T淋巴细胞、CD3 +CD8 +T淋巴细胞占比分别为(32.93±11.77)%、(59.67±11.60)%，表达CXCR3的CD3 +T细胞百分比(28.05±4.15)%显著高于PBMC (6.69±5.29)%， t＝6.354， P<0.01。抗PD-1组CXCL9/10/11及IFN-γ的mRNA相对表达水平(1.29±0.41，1.87±0.72，1.58±0.68，1.24±0.39)均显著高于对照组( t＝2.655，4.511，3.175，2.315， P<0.05)，且趋化因子CXCL10/11与IFN-γ的mRNA相对表达水平呈正相关( F＝6.672，9.227， P<0.05)。抗PD-1组CIK细胞的迁移率[(16.64±6.47)%]显著高于对照组[(14.21±6.26)%， t＝4.075， P<0.01]。 结论:RCC中，抗PD-I抗体可能通过CXCR3-CXCL9/10/11信号轴促进CIK细胞的趋化迁移，进而发挥协同抗肿瘤作用。

目的:探讨重组人干扰素α1b联合布地奈德雾化治疗对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠肺泡灌洗液及肺组织黏蛋白1的影响。方法:本研究为实验研究。采用随机数字表法将24只Wistar大鼠随机分为4组：阴性对照组、RSV感染组、布地奈德组和联合用药组。4组大鼠均予7%水合氯醛麻醉；阴性对照组予等量生理盐水(0.1 ml/只)滴鼻，其余各组大鼠以RSV Long株病毒(0.1 ml/只)滴鼻染毒，构建病毒感染模型；阴性对照组、RSV感染组大鼠分别给予生理盐水雾化，布地奈德组大鼠单纯给予布地奈德(0.5 mg/次)雾化，联合用药组给予重组人干扰素α1b和布地奈德联合雾化治疗，给药治疗共计6 d；取大鼠肺组织及肺泡灌洗液，观察肺组织病理，免疫组织化学检测黏蛋白1表达水平，对检测结果进行统计学分析。结果:各组大鼠肺泡灌洗液中均有黏蛋白1表达，阴性对照组为(3.52±0.09)μg/L，RVS感染组为(4.05±0.05)μg/L，布地奈德组为(3.90±0.07)μg/L，联合用药组为(3.76±0.07)μg/L，各组间比较差异均有统计学意义( P值均<0.001)。肺组织病理切片结果显示：RSV感染组肺泡间隔明显增宽，部分肺泡塌陷，有明显炎症反应(有较多淋巴细胞、少量中性粒细胞和嗜酸粒细胞，支气管腔内分泌物增多)；布地奈德组肺部炎症略有减轻，可见小灶性肺泡壁增厚和淋巴细胞浸润，联合用药组则炎症明显减轻，仅有少量细胞浸润，支气管腔内分泌物减少。免疫组织化学结果显示：阴性对照组大鼠肺组织黏蛋白1存在表达；RSV感染组黏蛋白1表达水平最高；布地奈德组黏蛋白1表达水平低于RSV感染组；联合用药组黏蛋白1表达水平低于RSV感染组和布地奈德组。 结论:重组人干扰素α1b联合布地奈德雾化治疗可有效降低RSV感染大鼠肺泡灌洗液及肺组织黏蛋白1的含量，从而降低病毒感染引起的炎症反应，控制病毒感染。