目的:探究老年大鼠缺血性卒中后血浆激肽释放酶、缓激肽1受体与脑梗死预后的关联机制。方法:40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分4组：卒中模型组(腹腔注射0.9%生理盐水150 μl、10只)，重组血管舒缓素酶抑制剂DX-88处理组(静脉注射DX-88 30 μl/次、10只)，静脉注射新型缓激肽B1受体拮抗剂R-954处理组(静脉注射R-954 30 μl/次、10只)，DX-88＋R-954联合处理组(同时静脉注射血浆激肽释放酶和缓激肽1受体的抑制、10只)；通过蛋白质印迹法测定血浆激肽释放酶、缓激肽1受体的蛋白质表达水平，通过定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)分析白细胞介素(IL)-1β mRNA、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的转录水平，采用神经功能量表对实验大鼠的脑神经损伤进行评分以及计算实验大鼠脑梗死面积和脑肿胀情况评估脑神经损伤，通过脑梗死面积评估大脑血脑屏障通透性。结果:DX-88处理组、R-954处理组、DX-88＋R-954组的神经功能损伤评分分别为(5.35±1.35)分、(6.49±1.16)分、(4.92±0.92)分，较脑卒中模型组(11.17±2.18)分降低( F＝15.589， P＝0.022)。与脑卒中模型组脑梗死面积(8.26±1.24)mm 2比较，DX-88处理组脑梗死面积(4.35±1.05)mm 2、R-954处理组(5.43±0.26)mm 2及DX-88＋R-954组(3.88±0.13)mm 2减小( F＝13.476， P＝0.034)。在脑肿胀相对面积增长的比较上，DX-88组、R-954组、DX-88＋R-954组分别为(31.28±7.45)%、(35.19±8.57)%、(19.68±3.14)%，较脑卒中模型组(74.26±15.66)%小( F＝16.587， P＝0.026)。DX-88处理组、DX-88＋R-954组血浆激肽释放酶蛋白较脑卒中模型组下降(均 P<0.05)，R-954处理组、DX-88＋R-954组缓激肽1受体mRNA表达较脑卒中模型组下降(均 P<0.05)，以上结果表明血浆激肽释放酶和缓激肽1受体的拮抗抑制剂发挥了作用。脑卒中模型组IL-1β、TNF-α、Caspase-3 mRNA转录水平较DX-88处理组、R-954处理组、DX-88＋R-954组高( F＝12.665、14.574、13.665， P＝0.021、0.015、0.003)。 结论:血浆激肽释放酶、缓激肽1受体功能受到抑制时对脑缺血卒中造成的脑神经可能有保护作用，可改善脑梗死预后。

目的:分析白细胞介素-36(IL-36)家族成员在糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)外周血中的水平，探讨重组人IL-36α对DKD患者单核细胞功能的调控作用。方法:连续入组2型糖尿病患者41例、DKD患者36例、对照者20名，分离血浆和外周血单个核细胞，酶联免疫吸附法检测血浆IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-36受体拮抗剂(IL-36Ra)水平，分选单核细胞，实时定量PCR检测单核细胞中IL-36受体亚基mRNA表达。使用重组IL-36α刺激单核细胞，检测培养上清中毒性分子和细胞因子水平，流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达。单核细胞与Vero细胞共培养，评估单核细胞的杀伤功能。结果:2型糖尿病组和DKD组血浆IL-36α、IL-36β水平显著高于对照组，DKD组血浆IL-36α水平亦高于2型糖尿病组( P<0.05)。IL-36γ和IL-36Ra水平在3组之间差异无统计学意义( P>0.05)。单核细胞中IL-36受体亚基mRNA表达在3组之间差异无统计学意义( P>0.05)。DKD组肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平高于对照组和2型糖尿病组( P<0.05)，PD-1和CTLA-4水平低于对照组和2型糖尿病组( P<0.05)。DKD组单核细胞诱导Vero细胞死亡的比例显著高于对照组和2型糖尿病组( P<0.05)。重组人IL-36α刺激后，DKD患者单核细胞分泌颗粒酶B和TNF-α水平显著升高( P<0.05)，单核细胞诱导Vero细胞死亡的比例显著升高( P＝0.024)。 结论:DKD组单核细胞分泌颗粒酶B和IL-36α水平升高诱导单核细胞功能增强。

目的 构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antago-nist,rhIL-1Ra)菌 种,并进行rhIL-IRa蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险.方法 分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化.收集纯化产物,15％SDS-PAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质.结果 经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确.表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30％以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97％和99％,单体含量分别为99.33％和100％,色谱纯度分别为91.86％和96.96％,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29 × 105U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致.结论 成功构建了 K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础.

背景:在骨关节炎的软骨退变过程中,以软骨细胞为靶点的细胞因子和信号通路起到了重要作用.目的:综述近年来与骨关节炎相关的细胞因子和信号通路的作用机制及治疗方式等最新研究进展,以期为将来探索新的治疗靶点和治疗方式作参考依据.方法:在中国知网、万方数据、维普、PubMed、Web of Science和MEDLINE数据库进行文献检索,并以"骨关节炎,细胞因子,信号通路,软骨细胞,炎症,治疗"作为中文检索词,以"osteoarthritis,cytokine,signal pathway,chondrocyte,inflammation,therapy"作为英文检索词,对最终纳入的60篇文献进行了归纳总结.结果与结论:①在目前的研究中认为骨关节炎具体机制尚不明确,大量研究表明骨关节炎与细胞因子和信号通路关系密切,是一个复杂的作用过程,以细胞因子和信号通路作为治疗突破口的相关研究也是当前的热点.②白细胞介素1等促炎因子的受体拮抗剂对于骨关节炎治疗效果不佳,已有更多的学者开始进行基因治疗方式的研究.③目前关于转化生长因子β等细胞因子和Wnt信号通路的重组因子、基因治疗和间充质干细胞等治疗方式均获得了积极的研究成果,但其安全性和有效性等问题还需进一步的基础和临床研究验证.④目前相关的骨关节炎治疗方式如富血小板血浆疗法已广泛应用于临床,而重组因子疗法、基因治疗和间充质干细胞治疗均处于研究阶段,其中间充质干细胞治疗和基因治疗有望在软骨修复和再生领域做出突破,是值得期待的治疗方式,但其有效性和安全性尚需进一步研究,未来需探寻其作用机制和适用范围以制定标准.

目的 探讨重组人脑利钠肽(rh-BNP)联合艾司洛尔治疗缺血性心力衰竭(IHF)的临床疗效.方法 选取医院2017年1月至2018年6月收治的IHF患者85例,按治疗方法的不同分为对照组(45例)和观察组(40例).两组患者均限制饮水和控制饮食,给予利尿剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、醛固酮拮抗剂,以及盐酸艾司洛尔注射液等药物治疗,观察组患者加用注射用rh-BNP,均治疗7 d.结果 观察组总有效率为95.00％,明显高于对照组的80.00％(P<0.05);治疗后,两组患者的心率(HR)、丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平均明显降低,预射血期(PEP)明显缩短,心排血量(CO)、每搏输出量(SV)及超氧化物歧化酶(SOD)活性均明显升高,且观察组改善情况均明显优于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率与对照组相当(17.50％比11.11％,P>0.05).结论 rh-BNP联合艾司洛尔治疗IHF疗效较好,可有效改善患者的血流动力学、氧化应激指标及炎性因子水平,且不增加不良反应.

目的 探讨Majeed综合征的临床特征、基因突变特点和诊治经验.方法 分析1例在中山大学孙逸仙纪念医院就诊的Majeed综合征患儿的临床表现、基因检测结果及诊治经过,并以“Majeed综合征”或“Majeed syndrome”在万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、中国期刊全文数据库及PubMed数据库中检索,结合国内外的报道进行文献复习.结果 女,汉族,双胎之一,5月龄发病;以反复发热、四肢拒碰、贫血和生长发育落后为表现;基因检测发现LPIN2有2个杂合突变,c.1794-2A＞G和c.469C＞T;使用重组人白细胞介素(IL)-1受体拮抗剂疗效良好.结论 Majeed综合征可在汉族人群中发生,基因检测有助于早期诊断,IL-1受体拮抗剂可能使患者获益.

利用PCR技术从分裂素刺激的人外周血细胞cDNA文库扩增出人白细胞介素-1受体拮抗剂（hIL-1ra）的成熟分子编码区cDNA，将其克隆化插进高效表达的质粒载体pKpL-3a后，在大肠杆菌中高效表达出rhIL-1ra，其N端序列与预期结果一致。经SDS-PAGE分析，rhIL-1ra的表达量占菌体蛋白的30%以上。体外试验证明，该表达产物对单核细胞衍生的IL-1活性有明显抑制作用。

采用肾小球系膜细胞（GMC）培养、 3H-TdR掺入及羟脯氨酸测定的方法，首次观察了重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（rhIL-1Ra）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠GMC增殖和合成细胞外基质-胶原的影响。结果表明：rhIL-1Ra能拮抗hIL-1β诱导的GMC的增殖和胶原的合成；其拮抗增殖的剂量是rhIL-1β的2～50倍，拮抗胶原合成者为rhIL-1β的25～50倍。提示：rhIL-1Ra有望用于治疗由IL-1参与、介导的以系膜细胞增殖和系膜基质扩大为主要病理改变的肾小球肾炎。

目的 探究肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)拮抗剂治疗类风湿关节炎的临床效果,及其对患者炎症反应、免疫功能的影响.方法 选取2017年3月-2019年3月天津市第一中心医院治疗的84例活动期类风湿性关节炎患者,随机分为对照组和研究组,每组42例,对照组患者接受常规治疗方案(塞来昔布+甲氨蝶呤+来氟米特),研究组在对照组基础上加用TNF-α拮抗剂(重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白)治疗,两组均治疗3个月.比较两组患者临床疗效和不良事件(感染、肿胀等)发生率;记录两组患者关节症状改善情况(28个关节压痛和肿胀数、疼痛程度、晨僵时间);分析外周血调节性T细胞Treg与辅助性T细胞Th17比例、转化生长因子(TGF-β)、白细胞介素(IL-17)、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)水平变化.结果 研究组治疗有效率为95.24％,显著高于对照组的80.95％(P＜0.05);治疗后研究组关节压痛数、肿胀数、VAS评分及晨僵时间改善程度优于对照组(P＜0.05);治疗前两组患者外周血Treg/Th17、TGF-β、IL-17、CRP、RF和ESR水平比较均无显著差异,治疗后两组患者Treg/Th17水平升高,TGF-β和1L-17水平均降低,CRP、RF、ESR水平均降低,且研究组改善程度优于对照组(P＜0.05);对照组出现1例上呼吸道感染和1例消化不良,研究组出现1例上呼吸道感染、1例尿路感染、1例注射部位肿胀及1例腹泻,两组均未出现肝肾功能受损等严重不良事件.结论 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白可有效改善风湿性关节炎患者临床症状和实验室炎性指标,纠正Treg/Th17失衡,临床治疗仍需要重视其致感染风险.

目的 建立重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)生物学活性检测方法,并对方法进行验证.方法 根据IL-1Ra阻断IL-1β杀伤人黑色素瘤细胞A375.S2的能力评价IL-1Ra的生物学活性,结果用标准品进行校正.对方法的样品起始浓度(8、10、12、14 μg/mL)和IL-1β终浓度(2、4、6 ng/mL)进行优化,并验证方法的专属性、准确度、线性范围、中间精密度、耐用性.用建立的方法检测本公司在研产品3批原液和3批成品的生物学活性.结果 确定该方法的样品起始浓度为8 μg/mL,IL-1β终浓度为4 ng/mL.IL-1Ra原液缓冲液成分及成品中辅料成分对检测结果无影响;线性范围为6～13 μg/mL,相关系数R2为0.9921;准确度验证线性回归方程的斜率为0.9758;不同试验人员于不同时间对1批原液、1批成品检测结果的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分别为13.895％和8.670％,均＜20％;不同细胞代次、不同细胞密度下相对效价测定值的GCV为5.595％,＜20％.用建立的方法检测3批原液和3批成品的结果较稳定.结论 成功建立了重组人IL-1Ra生物学活性检测方法,该方法准确度高,精密度好,耐用性强,检测结果稳定可靠,可用于产品的生物学活性评价和质量控制.