目的 探讨金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎的治疗作用及耳蜗Toll样受体4(toll-like receptors-4,TLR-4)-NLR 家族 Pyrin 域包含 3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)信号通路的影响.方法 50 只 Wistar 大鼠分为正常对照组、模型对照组、金银花总皂苷低、中、高剂量组,除正常对照组外,其余各组大鼠在有机玻璃盒中连续15天每天暴露在强度为100 dB声压级(sound pressure level,SPL)的10 kHz倍频程噪声中2 h建立噪声暴露后分泌性中耳炎模型成功后,各药物组给予相应药物干预,正常对照组及模型对照组给予等体积的生理盐水,治疗周期为2周.治疗结束后,测定大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值水平,硝酸银染色观察大鼠耳蜗基底膜显微结构,电镜检测大鼠耳蜗病理改变,实时荧光逆转录法(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法及蛋白印迹法检测耳蜗组织TLR4、NLRP3 mRNA蛋白水平,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测耳蜗组织基质金属蛋白酶9(matrix metallo-proteinase 9,MMP-9)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平.结果 正常对照组耳蜗内外毛细胞结构正常;模型对照组耳蜗内、外毛细胞结构破坏严重(倒置、缺失),排列紊乱,有大面积崩坏;纤毛上皮肿胀,纤毛排列紊乱,部分脱落,中耳黏膜增厚,炎症细胞浸润.经金银花总皂苷干预治疗后,各组大鼠耳蜗内外毛细胞破坏程度明显改善.正常对照组耳蜗毛细胞结构正常,模型对照组耳蜗内、外毛细胞排列紊乱,与螺旋神经节细胞周围突结合出现裂隙;经金银花总皂苷干预治疗后,耳蜗内、外毛细胞排列趋于正常,与螺旋神经节细胞周围突结合处仍然有裂隙,但裂隙较小.模型对照组 ABR 阈值水平、耳蜗组织 TLR4[(0.73±0.12)vs(4.29±0.74),(0.24±0.06)vs(1.06±0.17)/GAPDH]、NLRP3[(0.84±0.14)vs(3.88±0.63),(0.30±0.05)vs(1.12±0.18)/GAPDH)]mRNA 蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP 水平高于正常对照组(P＜0.05);金银花总皂苷低、中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(4.29±0.74)vs(3.18±0.50)、(2.34±0.34)、(1.52±0.24),(1.06±0.17)vs(0.90±0.15)、(0.59±0.10)、(0.40±0.06)/GAPDH)]、NLRP3[(3.88±0.63)vs(3.02±0.48)、(2.18±0.37)、(1.46±0.23),(1.12±0.18)vs(0.83±0.13)、(0.54±0.09)、(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP 水平低于模型对照组(P＜0.05);且金银花总皂苷中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(3.18±0.50)vs(2.34±0.34)、(1.52± 0.24),(0.90±0.15)vs(0.59±0.10)、(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(3.02±0.48)vs(2.18±0.37)、(1.46±0.23),(0.83±0.13)vs(0.54±0.09)、(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于金银花总皂苷低剂量组(P＜0.01),金银花总皂苷高剂量组 ABR 阈值水平、耳蜗组织 TLR4[(2.34±0.34)vs(1.52±0.24),(0.59±0.10)vs(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(2.18±0.37)vs(1.46±0.23),(0.54±0.09)vs(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA 蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP 水平低于金银花总皂苷中剂量组(P＜0.01),剂量-效应关系明显(P＜0.01).结论 金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎具有明显的治疗作用,其机制可能为金银花总皂苷抑制炎症TLR-4-NLRP3通路的激活有关.

目的:采用Box-Behnken设计方法 ,研究金银花中总皂苷的超声提取工艺.方法:采用超声提取法,以乙醇浓度、料液比和超声时间为主要影响因子,以总皂苷提取率为评价指标进行Box-Behnken试验设计,考察最佳提取工艺.结果:最佳提取工艺为乙醇体积分数90％,超声时间131 min,料液比1:12.结论:Box-Behnken设计结合响应面分析法可以很好地对金银花总皂苷提取工艺进行优化.

金银花是一种具有悠久历史的常用中药,具有清热解毒、宣散风热的功效,集中分布于河南、山东、广东等地.金银花的化学成分主要包括有机酸类、黄酮类、环烯醚萜苷类、三萜皂苷类、挥发油类以及其他各种成分.金银花的药理作用主要为抗炎解热,抗肿瘤,抗菌抗病毒,抗衰老抗氧化,降低血糖,保肝,保护肺脏,神经保护作用,增强机体免疫功能以及抗血小板聚集等.因其具有丰富的药理作用,药用价值高,常可与多种其他药物配伍用于多种方剂之中,临床应用广泛,社会需求量大.本文通过查阅近几年金银花的化学成分及其药理作用方面的相关文献,了解到多名学者对其进行研究并从金银花中首次分离得到多种新的化学成分且对金银花的药理作用机制进了详细研究,因此通过整理相关研究结果,对其进行归纳总结,为更多人认识并了解金银花的最新研究进展提供参考,也可为金银花的开发利用提供科学依据.

目的:运用分子对接技术筛选金银花抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)潜在活性成分,为发现抗SARS-CoV-2先导化合物以及揭示金银花抗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的物质基础提供参考.方法:在文献总结并结合中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库检索的基础上,建立涵盖金银花中382个化合物的化学成分库,以SARS-CoV-23CL水解酶(3CL Protease,Mpro)以及SARS-CoV-2与血管紧张素转换酶2(ACE2)复合物为分子对接靶标,利用Discovery Studio软件进行分子对接,以打分值大小筛选抗SARS-CoV-2潜在活性成分.结果:金银花中三萜皂苷类成分与SARS-CoV-2 Mpro有较强的结合力,以SARS-CoV-2 Mpro晶体结构复合的原抑制剂N3为阳性对照,7个化合物为其潜在抑制剂;环烯醚萜类和神经酰胺类成分对SARS-CoV-S/ACE2复合物的阻断较好,保留打分值前3％的化合物,10个化合物可作为SARS-CoV-S/ACE2复合物的潜在阻断剂.结论:从金银花中发现16个潜在抗SARS-CoV-2活性成分.本研究为阐明金银花抗击COVID-19的药效物质基础提供参考,同时为发现新的抗SARS-CoV-2先导化合物指明方向.

目的 建立高效液相色谱-三重串联四极杆质谱联用(HPLC-QQQ-MS/MS)测定芪参颗粒中38种主要成分含量的方法,明确其化学组成,并对制剂批次间一致性进行分析.方法 HPLC采用Zorbax Eclipse Plus C18(50 mmX2.1 mm,1.8μm)色谱柱,0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液梯度洗脱,质谱对正(11个离子对)、负(22个离子对)离子进行动态多反应监测(dynamic multi-response detection,dMRM),实现多批次芪参颗粒中38种主要成分的含量测定.通过主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),筛选影响批次间一致性的成分.结果 建立的HPLC-MS/MS方法在15 min内完成了 38个成分的同时定量分析,12批次芪参颗粒样品中38个化合物的总量为34.923～47.148 mg/g,其中臣药丹参中的丹酚酸B的量最高(16.718 mg/g),其次是金银花中的绿原酸(3.550 mg/g),君药黄芪中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷葡萄糖苷的质量分数分别为0.136、0.753 mg/g,黑顺片中3种双酯型生物碱的质量分数均低于0.003 mg/g,其余化合物的质量分数在0.004～2.935 mg/g.PCA结合OPLS-DA筛选出了 5个对批次一致性影响最大的成分,依次为黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA和二氢丹参酮Ⅰ.结论 所建立的分析方法专属性强,灵敏度高,为芪参颗粒质量控制和一致性分析提供了科学方法和依据.

目的 基于核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-KB)/白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)通路探讨金银花总皂苷对铅中毒大鼠的保肝作用.方法 清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型对照组、金银花总皂苷低、中、高剂量组,除正常对照组外,其余各组大鼠每日腹腔注射醋酸铅溶液(10 mg/kg),持续4周;期间,金银花总皂苷低、中、高剂量组大鼠每日予以相应剂量的金银花总皂苷灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水灌胃.试验结束后获取大鼠血清及肝脏,测定肝/体比值、肝铅含量、血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)水平、肝丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法及蛋白印迹法测定肝 NF-κB 和 IL-1β 水平.结果 与正常对照组比较,模型对照组体质量、SOD、GSH-Px水平降低,肝/体比值、肝铅含量、血清AST[(256.32±16.24)vs(46.81±15.24)μ/L]、ALT[(354.32±18.54)vs(35.36±15.85)μ/L]、GGT 水平[(5.64±0.31)vs(0.94+0.24)μ/L]、肝 MDA 水平[(654.49±16.29)vs(266.54±15.52)ng/g]、肝 NF-κB、IL-1β mRNA 蛋白表达水平[0.82±0.28 vs 3.61±0.23,0.48±0.29 vs 3.71±0.32,0.49±0.12 vs 1.69±0.11,0.38±0.16 vs 1.98±0.14]升高(P＜0.05);与模型对照组比较,金银花总皂苷低、中、高剂量组体质量、SOD、GSH-Px水平降低升高,肝/体比值、肝铅含量、血清 AST[(88.32±15.74)vs(135.20±10.8)、(186.28±12.27)、(256.32±16.24)μ/L]、ALT[(154.68±19.78)vs(204.28±20.47)、(257.68±19.44)、(354.32±18.54)μ/L]、GGT 水平[(2.23±0.27)vs(3.27±0.34)、(4.73±0.27)、(5.64±0.31)μ/L]、肝 MDA 水平[(358.58±15.41)vs(485.52±10.59)、(588.69±12.53)、(654.49±16.29)ng/g]、肝NF-KB、IL-1β mRNA 蛋白表达水平降低(3.61±0.23 vs 2.89±0.25、2.29±0.21、1.65±0.27,3.71±0.32 vs 2.93±0.30、2.33±0.29、1.15±0.24,1.69±0.11 vs 1.39±0.10、0.95±0.14、0.74±0.13,1.98±0.14 vs 1.35±0.15、0.89±0.14、0.53±0.13)(P＜0.05);且随着金银花总皂苷剂量的增加,金银花总皂苷低、中、高剂量组体质量、SOD、GSH-Px水平逐渐升高,肝/体比值、肝铅含量、血清AST、ALT、GGT水平、肝MDA水平、肝NF-κB、IL-1β mRNA蛋白表达水平逐渐降低,具有明显剂量-效应关系(P＜0.05).结论 金银花总皂苷能明显减轻铅中毒大鼠肝氧化损伤及炎症反应,具有明显肝保护作用,其机制可能与金银花总皂苷抑制铅中毒大鼠肝NF-κB/IL-1β通路的激活有关.