目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制.方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠 2 型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组 10 只.各给药组灌胃给药 8 周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清 CK-MB、AST及 LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物 3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达.结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及Collagen Ⅰ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05).结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3 信号通路,减轻 2 型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应.

目的 探究金雀异黄素对脑卒中大鼠小胶质细胞激活及高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)4 通路的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量组(5 mg/kg金雀异黄素)、高剂量组(10 mg/kg金雀异黄素)、高剂量+甘草酸组(10 mg/kg金雀异黄素+0.03 g/kg HMGB1 抑制剂)各 10 只;通过颈内动脉线栓法建立脑卒中大鼠模型,对照组仅暴露左侧颈内、外动脉,不进行插线及结扎;Longa评分对大鼠神经功能进行评分;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测脑组织神经细胞凋亡情况;免疫组化法检测脑组织小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子(Iba)1 表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织白细胞介素(IL)-1β及IL-10 水平;Western印迹检测脑组织中精氨酸酶(Arginase)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白及HMGB1/TLR4 通路蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1 阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4 水平显著增加,IL-10、Arginase水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组及高剂量组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1 阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4 水平显著降低,IL-10、Arginase水平显著增加(P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+甘草酸组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1 阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4 水平显著降低,IL-10、Arginase水平显著增加(P<0.05).结论 金雀异黄素可能通过抑制HMGB1/TLR4 通路来降低脑卒中大鼠小胶质细胞激活,促进其M1 向M2 型的转变.

目的 探讨金雀异黄素(genistein,Gen)对血小板微颗粒(platelet-derived microparticles,PMPs)诱导的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)迁移和侵袭的影响,并探究其可能的机制.方法 应用CCK-8试剂盒检测Gen对PMPs作用后RA-FLS活力的影响;通过Transwell细胞迁移、侵袭实验,以及细胞与细胞外基质(ECM)的黏附实验,探究Gen对PMPs诱导的RA-FLS迁移、侵袭以及与ECM黏附的影响;免疫荧光染色观察Gen对PMPs作用后RA-FLS应力纤维的分布、丝状和片状伪足形成的影响;Western blot检测Gen对PMPs作用后RA-FLS中NF-κB信号通路组分的影响.结果 Gen对PMPs诱导的RA-FLS的活力无明显影响;然而,Gen可抑制PMPs诱导的RA-FLS的迁移、侵袭及黏附;同时,Gen可减少PMPs作用后RA-FLS片状伪足的形成,促进应力纤维的形成.此外,Gen能下调PMPs诱导的RA-FLS中p-IκB、p-NF-κB的表达.结论 Gen可抑制PMPs激活的NF-κB信号通路,影响RA-FLS的肌动蛋白细胞骨架装配,从而抑制PMPs诱导的RA-FLS与ECM的黏附、迁移和侵袭.

目的 研究高、低浓度金雀异黄素对雌激素受体(ER)阳性人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、集落形成及ERα/ERβ蛋白表达比值影响的差异.方法 以ER阳性人子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究对象,正式实验前用Opti-MEM无酚红减血清培养基培养24 h,然后分为金雀异黄素低浓度组、高浓度组及溶剂对照组,依次加入由2％DCS-FBS的Opti-MEM无酚红减血清培养基配置所需浓度的金雀异黄素药液及含0.5‰DMSO的培养液.应用CCK-8法检测高浓度(10、25、50μmoL/L)和低浓度(0.001、0.01、0.1、1μmoL/L)的金雀异黄素干预Ishikawa细胞24、48、72 h对增殖的影响.平板集落形成实验检测高浓度(25、50μmoL/L)和低浓度(0.01、0.1μmoL/L)金雀异黄素干预1周对集落形成的影响.用Western blot法检测高浓度(25、50μmoL/L)和低浓度(0.01、0.1μmoL/L)金雀异黄素干预48 h后对ERα/ERβ蛋白表达比值的影响.结果 低浓度(0.001、0.01、0.1μmoL/L)范围内金雀异黄素促进Ishikawa细胞增殖,在干预48 h后最明显,0.1μmoL/L浓度促增殖作用达到最强(P<0.01);高浓度时(10、25、50μmoL/L)抑制细胞增殖(P<0.05),且呈时间和浓度的依赖性,50μmoL/L浓度下干预72 h后抑制作用达到最强(P<0.01).低浓度金雀异黄素的集落形成率分别为14.60％和15.13％,和溶剂对照组(12.20％)相比有统计学差异(P<0.05);高浓度集落形成率分别为6.07％、4.27％,显著低于溶剂对照组(P<0.01).高浓度和低浓度下ERα蛋白表达均上调,且在0.1μmoL/L时达到最高;ERβ蛋白表达均下降,在25、50μmoL/L时达到最低;ERα/ERβ蛋白比值均明显上调,在0.1μmoL/L时达到最高.结论 低浓度金雀异黄素具有促ER阳性Ishikawa细胞生长的作用,可能通过上调ERα/ERβ蛋白表达比值实现;高浓度金雀异黄素虽然也可以上调ERα/ERβ蛋白表达比值,但可能存在其他非ER依赖机制主导发挥抑制Ishikawa细胞生长的作用.

目的 探讨金雀异黄素对人肺癌细胞生长 、侵袭和转移的影响及其机制.方法 金雀异黄素处理体外培养的人肺癌A549和H358细胞,采用M TT法检测细胞活力,集落形成实验观察细胞生长,流式细胞术分析细胞凋亡,细胞迁移与侵袭实验观察对肺癌细胞迁移和侵袭的影响.在裸鼠体内注入绿荧光素酶标记的肺癌A549细胞,观察金雀异黄素对肺癌细胞体内生长和转移的影响.采用qRT-PCR和Western blot分析金雀异黄素对肺癌细胞转移相关mRNA和蛋白表达的影响.结果 金雀异黄素可以抑制肺癌A549和H358细胞的生长.金雀异黄素能引起肺癌细胞凋亡增加(P<0.01).金雀异黄素可以抑制体外和体内肺癌细胞的迁移和侵袭(P<0.01).金雀异黄素能下调MM P-9和血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)mRNA和蛋白的表达.结论 金雀异黄素能抑制肺癌细胞生长 、侵袭和转移;其机制可能与下调MMP-9和VEGFR3的表达有关.

本文旨在研究金雀异黄素(genistein,GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响,探讨GEN抗动脉粥样硬化的药理学作用机制.应用LPS活化RAW264.7细胞,qRT-PCR检测肿瘤坏死因子-仅(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin 6,IL-6) mRNA表达,Western blot检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthases,iNOS)蛋白表达.使用GEN预处理细胞2h,再与LPS共孵育24 h后,CCK8检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,qRT-PCR检测CHOP、caspase-3和miR-21基因表达,Western blot检测CHOP和caspase-3蛋白表达.结果显示,1 000 ng·mL-1 LPS上调RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、COX-2和iNOS基因或蛋白表达;GEN呈浓度依赖性下调LPS活化的RAW264.7细胞活力,增加凋亡率,上调CHOP和caspase-3表达,并下调miR-21表达;慢病毒介导的miR-21 up抑制LPS活化的RAW264.7细胞CHOP和caspase-3表达,与GEN作用相反;慢病毒介导的miR-21 down促进LPS活化的RAW264.7细胞CHOP和caspase-3表达,与GEN具有协同作用.这些结果提示,金雀异黄素能够促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡,其作用机制可能与下调miR-21表达,激活内质网应激反应性凋亡途径有关.

目的 探讨不同剂量金雀异黄素对白介素-6(IL-6)诱导的SKOV3人卵巢癌细胞增殖作用及其机制.方法 将SKOV3人卵巢癌细胞分为5组,即对照组、IL-6组(25 ng/ml IL-6)、低(25 ng/ml IL-6+80 μmol/L金雀异黄素)、中(25 ng/ml IL-6+ 120 μmol/L金雀异黄素)和高剂量金雀异黄素组(25 ng/ml IL-6+ 160 μmol/L金雀异黄素).然后检测各组细胞增殖抑制率、凋亡率、迁移能力和侵袭能力,Western blot检测细胞CDK4和G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)表达情况.结果 低、中和高剂量金雀异黄素组卵巢癌细胞增殖抑制率明显高于IL-6组(P＜0.05),凋亡率明显高于IL-6组(P＜0.01),低、中和高剂量金雀异黄素组卵巢癌细胞增殖率随金雀异黄素剂量上升明显降低(P＜0.05),而卵巢癌细胞凋亡率随金雀异黄素剂量上升明显增高(P＜0.01),上述差异均有统计学意义.低、中和高剂量组金雀异黄素和对照组卵巢癌细胞迁移率和穿膜细胞数明显低于IL-6组,低、中和高剂量金雀异黄素组卵巢癌细胞迁移率和穿膜细胞数随金雀异黄素剂量上升而降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).对照组、低、中和高剂量组卵巢癌细胞CDK4和CyclinD1蛋白表达明显低于IL-6组,低、中和高剂量组卵巢癌细胞CDK4和CyclinD1蛋白表达随金雀异黄素剂量上升明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 金雀异黄素可抑制IL-6诱导的SKOV3细胞增殖,其使用剂量越高,抑癌效果越好,机制可能是通过抑制CyclinD1/CDK4信号通路实现.

目的 ·探讨金雀异黄素(genistein,Gen)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 ·取新生1d的C57BL/6J小鼠分离原代小胶质细胞进行培养,并分为LPS组、Gen+LPS组、对照组.LPS组给予LPS(1μg/mL)处理24 h,Gen+LPS组给予Gen(10 μmol/L)预处理0.5 h后加入LPS(1μg/mL)处理24 h,对照组不做处理.采用Western blotting分析CD11b蛋白的表达,采用MitoSOXTM红色试剂和CM-H2DCFDA分别观察线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞内ROS水平,通过免疫荧光染色、比色法和ELISA法分别检测NLRP3 (NLR family pyrin domain containing 3)炎症小体、胱天蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素1β (interleukin-1β,IL-1β)的变化.结果 ·与对照组比较,LPS组小胶质细胞CD11b蛋白水平,及线粒体、细胞内ROS水平均显著升高(均P＜0.05),而Gen+LPS组明显低于LPS组(均P＜0.05).此外,LPS组小胶质细胞NLRP3炎症小体免疫荧光强度、caspase-1活性和IL-1 β分泌显著高于对照组(均P＜0.05);与LPS组相比,Gen+LPS组均明显下降(均P＜0.05).结论 ·Gen可抑制LPS诱导的小胶质细胞线粒体ROS生成、NLRP3炎症小体活化和炎症因子IL-1β分泌等炎症反应.

目的:探讨镁离子联合金雀异黄素对自发性高血压大鼠血压的影响.方法:选用雌性6周自发性高血压大鼠28只, 饲养7d后测量大鼠初始收缩压 (SBP) 及心率 (HR), 应用双盲分组原则, 将大鼠分成对照组、镁离子组、金雀异黄素组、及联合组, 每组各7只.饲养7d后, 取一次性注射器, 消毒抽取药物, 暴露尾部及血管, 进行注射.每7d注射一次, 连续注射4周.比较各组大鼠SBP、HR、hs-CRP、MCP-1、vWF、血管紧张素 (AngⅡ).结果:给药前四组大鼠SBP水平比较无差异 (P＞0.05).给药后对照组SBP水平高于其他三组 (P＜0.05), 镁离子组与金雀异黄素组比较无差异 (P＞0.05), 联合组大鼠在给药1周、2周、4周后SBP水平显著低于其他三组 (P＜0.05).给药前四组大鼠心率比较无差异 (P＞0.05).给药后对照组、镁离子组、金雀异黄素组与治疗前相比无差异 (P＞0.05), 联合组低于治疗前 (P＜0.05).给药第2、4周联合组HR水平低于其他三组 (P＜0.05).联合大鼠hs-CRP水平显著降低 (P＜0.05), MCP-1、vWF水平显著升高 (P＜0.05).给药前各组大鼠AngⅡ水平比较无差异 (P＞0.05), 给药2周、4周联合组AngⅡ水平显著降低 (P＜0.05).结论:镁离子联合金雀异黄素能提高自发性高血压大鼠血管顺应性, 减少炎症反应, 预防动脉粥样硬化, 降低血压.

[目的]研究金雀异黄素(genistein,GEN)对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠胰岛素抵抗及子宫内膜葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 4,GLUT4)、雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)的影响.[方法]72只雌性wistar大鼠分为6组:空白对照组(A组)、PCOS-IR模型对照组(B组)、GEN低剂量组(C组)、GEN中剂量组(D组)、GEN高剂量组(E组)、雌激素阳性组(F组),每组12只.给药14d后,记录各组大鼠体质量和卵巢脏器系数,观察卵巢形态学改变,采用ELISA法检测血清胰岛素(insulin,INS)、睾酮(testosterone,T)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组大鼠子宫内膜GLUT4、ERα、PR mRNA和蛋白表达水平.[结果]B组大鼠卵巢表现出明显囊性扩张,显微镜下可见黄体及卵泡减少,颗粒细胞层数减少且被挤压呈扁平状,治疗后C、D、E、F组大鼠卵巢体积缩小,显微镜下可见囊肿卵巢较少,成熟卵泡、黄体个数及颗粒细胞层增加,E、F组卵巢形态学改变更为明显;与B组比较,治疗后C、D、E、F组大鼠体质量、卵巢脏器系数及血清INS、T水平、子宫内膜ERα、PR mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05),血清LH水平及子宫内膜中GLUT4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),且E、F组改变更加明显.[结论]GEN能够量效依赖地改善PCOS大鼠胰岛素抵抗,降低子宫内膜病变风险.