目的:探讨金雀异黄酮在健康受试者体内对咖啡因主要代谢产物药代动力学的影响，从而阐明金雀异黄酮对人CYP1A2、CTP2A6、NAT2及XO酶活性的影响。方法:18名健康受试者于试验第1天口服咖啡因100 mg后收集0~24 h的外周静脉血以及0~12h总尿液，第2~15天服用金雀异黄酮1000 mg/d，第16天早上服用探药咖啡因100mg，第16天服用咖啡因后收集0~24h的外周静脉血以及0~12 h总尿液标本。血、尿标本中咖啡因及代谢产物的浓度采用高效液相色谱法（HPLC）定量检测，计算血中咖啡因及主要代谢产物的药代动力学参数及各代谢物的尿液排泄量。结果:与服用金雀异黄酮后相比，受试者血浆中1，7-二甲基黄嘌呤（17X）的药时曲线下面积（AUC（0-24 h）显著降低了11.77%（ P=0.007）。尿液中17X和1-甲基黄嘌呤（1X）的排泄量分别显著降低了14.31%（ P=0.027）和27.18%（ P=0.002），而1，7-二甲基尿酸（17U）显著性增加了57.33%（ P=0.028），1-甲基尿酸（1U）显著降低了14.61%（ P=0.028），未发现尿液中咖啡因和5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基尿酸（AFMU）排泄量的变化。 结论:金雀异黄酮在体内影响了中国健康受试者咖啡因的主要代谢产物药代动力学，通过对药物代谢活性酶的影响从而产生相应的药物相互作用。

目的 基于Toll样受体 4(TLR4)信号通路探讨金雀异黄酮(GEN)对急性心肌梗死(AMI)大鼠左心室功能的影响及潜在机制.方法 100 只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GEN(GEN,40 mg/kg)组、GEN+TAK242(TLR4 抑制剂,10 mg/kg)组和GEN+LPS(TLR4激动剂,5 mg/kg)组,每组 20 只.采用结扎冠状动脉左前降支的方法构建AMI大鼠模型,经1 次/d给药治疗 4 周后,通过心脏超声检测大鼠左心室功能;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、基质裂解素2(ST2)、脑利钠肽(BNP)水平;计算左心室质量指数(LVMI);苏木精-伊红(HE)染色法观察左心室心肌组织病理学改变;马森(Masson)染色法观察左心室心肌组织纤维化状况并计算胶原容积分数(CVF);ELISA法检测左心室心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;蛋白免疫印迹法检测TLR4、核因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达.结果 与模型组比较,GEN组左心室功能改善,左心室收缩末期内径(LVIDs)和左心室舒张末期内径(LVIDd)降低,左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)升高;血清AngⅡ、ST2、BNP水平和LVMI降低;左心室心肌组织病理性改变和纤维化状况均改善,CVF降低;心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低;TLR4、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).TAK242 能够增强GEN对AMI大鼠上述指标的调控作用;LPS则能够阻断GEN对AMI大鼠各指标的调控作用.结论 GEN具有抑制AMI大鼠心室重构,改善左心室功能的作用,其机制可能与抑制TLR4 信号通路,减轻炎症反应,减少细胞外基质生成有关.

目的 探讨金雀异黄酮对膜性肾病大鼠肾损伤及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 从45 只SD大鼠中随机取8 只作为正常组,剩余大鼠采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法构建膜性肾病模型.将 32 只成模大鼠随机分为模型组、金雀异黄酮组、瑞沙托维组和金雀异黄酮+瑞沙托维组,每组8 只.金雀异黄酮组给予金雀异黄酮30 mg/kg腹腔注射,瑞沙托维组给予瑞沙托维10 mg/kg腹腔注射,金雀异黄酮+瑞沙托维组分别给予金雀异黄酮30 mg/kg和瑞沙托维10 mg/kg腹腔注射,均1 次/d,干预4 周.检测肾功能指标[24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、血浆白蛋白];HE染色、Masson染色和透射电子显微镜观察肾组织病理学形态、胶原沉积情况及细胞超微结构;免疫荧光染色法观察肾组织中免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;ELISA法检测肾组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;RT-PCR法检测肾组织中TLR4、NF-κB p65、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况,Western blot法检测肾组织中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠24h 尿蛋白、BUN、SCr水平均明显升高(P均＜0.05),血浆白蛋白水平明显降低(P均＜0.05);肾小球体积增大,肾小管细胞空泡样变,间质区炎性细胞浸润,间质区和肾小球大量胶原沉积,胶原容积分数明显升高(P＜0.05);肾小球细胞肿胀,足突融合或消失,基底膜不规则增厚,上皮细胞下可见大量电子致密物沉积,IgG大量沉积;肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65、TGF-β1 mRNA相对表达量和TLR4、NF-κB p65、TGF-β1、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05),肾组织中Smad7 蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05).与模型组比较,各药物组大鼠24h 尿蛋白、BUN、SCr水平均明显降低(P 均＜0.05),血浆白蛋白水平均明显升高(P 均＜0.05);肾组织病理学改变、细胞超微结构改变均明显减轻,胶原容积分数明显降低(P均＜0.05),IgG沉积量明显减少;肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65、TGF-β1 mRNA相对表达量和TLR4、NF-κB p65、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均明显降低(P均＜0.05),Smad7 蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05).与金雀异黄酮组和瑞沙托维组比较,金雀异黄酮+瑞沙托维组肾损伤更轻,各检测指标改善情况更明显(P均＜0.05).结论 金雀异黄酮可明显改善膜性肾病大鼠肾功能,减轻肾损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎症反应和肾纤维化有关.

目的 观察金雀异黄酮干预对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠炎症反应的抑制作用及其作用机制.方法 采用烟熏结合气道滴注内毒素,并联合鼻腔给菌法构建AECOPD模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和低、高剂量实验组.低、高剂量实验组大鼠分别灌胃给予7、14 mg·kg-1金雀异黄酮,每天1次,直至建模结束;地塞米松组在造模末期灌胃给予1 mg·kg-1地塞米松溶液,每天1次,连续5 d;对照组和模型组大鼠灌胃给予等量的蒸馏水.结束后24 h检测各组大鼠肺功能;以瑞氏-吉姆萨染色检测肺泡灌洗液炎症细胞总数及淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞数水平;以试剂盒检测血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)及炎症因子表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA表达水平;以蛋白质印迹法检测相关蛋白表达水平.结果 对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组、地塞米松组大鼠0.3 s内用力呼气容积/用力肺活量(FEV0.3/FVC)水平分别为(81.57±8.58)％、(53.34±2.75)％、(64.42±6.09)％、(76.24±5.30)％和(79.53±4.73)％;淋巴细胞数分别为(80.19±6.88)× 106、(169.52±57.28)× 106、(130.17±9.01)× 106、(103.55±8.43)× 106 和(84.79±7.31)× 106·L-1;NE 水平分别为(2.02±0.36)、(3.44±0.16)、(3.15±0.24)、(2.34±0.15)和(2.36±0.13)ng·mL-1;TNF-α 水平分别为(9.43±0.62)、(17.08±1.69)、(14.04±1.47)、(10.18±0.98)和(9.70±0.98)ng·mL-1.模型组上述指标与对照组比较,低剂量实验组、高剂量实验组、地塞米松组上述指标与模型组比较,高剂量实验组上述指标与低剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 金雀异黄酮可抑制炎症因子、NE、MUC5AC表达蛋白,进而改善炎症反应和黏液分泌.

目的 采用网络药理学和分子对接技术及分子动力学技术,研究骆驼刺治疗脓毒症作用机制,并进行动物实验验证.方法 首先筛选骆驼刺有效成分及其作用靶点,同时筛选治疗脓毒症的相关作用靶点,构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行拓扑学分析,绘制中药-疾病-靶点网络图.其次对网络图中核心靶点进行京都基因与基因组百科全书富集分析,同时进行基因本体功能富集分析;接着对核心靶点进行分子对接和分子动力学模拟实验验证.最后采用小鼠进行动物实验验证.结果 筛选出骆驼刺活性成分30个,度值排名前5为(-)-儿茶素酸酯、金雀异黄酮、山奈酚、槲皮素、表没食子儿茶素,作用靶点196个;脓毒症疾病相关靶点2144个,骆驼刺-脓毒症交集靶点105个,核心靶点为TNF、IL-6、AKT1、VEGFA、CASP3、IL-1β等.涉及PI3K-Akt、TNF、HIF-1、AGE-RAGE、IL-17等信号通路,介导炎症反应、细胞凋亡等生物过程,发挥对脓毒症的治疗作用.分子对接结果显示,骆驼刺黄酮类化合物与各关键靶点结合性能均良好,其中结合能最低最稳定的构象为(-)-epigallocatechin gallate-IL-6和quercetin-IL-6,对两对复合物进行分子动力学模拟,结果表明,通过静电、范德华势能和氢键的共同作用,可以达到稳定结合的效果.动物实验证实骆驼刺可抑制脓毒症小鼠肺组织内PI3K/Akt信号通路的激活,降低Caspase-3、VEGF蛋白表达,减少外周血炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,减轻组织及脏器炎性损伤.结论 骆驼刺对脓毒症的治疗作用是通过多生物过程、多靶点、多通路来实现的.本研究为骆驼刺的临床应用以及脓毒症治疗提供了一定的理论依据.

目的 探讨金雀异黄酮对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的影响及其可能的分子机制.方法 取雄性SD大鼠55 只,随机选择10 只作为正常组,其余大鼠采用一次性腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg的方法复制糖尿病肾病模型.将40 只成模大鼠随机分为模型组、金雀异黄酮组、鸦胆子苦醇组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组,每组10 只.金雀异黄酮组给予30 mg/kg金雀异黄酮灌胃,鸦胆子苦醇组给予鸦胆子苦醇2mg/kg灌胃,金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组给予30 mg/kg金雀异黄酮和鸦胆子苦醇2 mg/kg灌胃,均1 次/d,连续灌胃6 周.检测各组大鼠空腹血糖(FPG)水平及肾功能指标[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和 24h尿微量白蛋白(24h U-mAlb)],计算肾脏指数,HE染色、PAS染色、Masson染色观察肾组织形态,透射电子显微镜观察肾细胞超微结构,分光光度法检测肾组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)含量,Western blot法检测肾组织中E2 相关因子2(Nrf2)、p-Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、总核因子κB(NF-κB)、胞核NF-κB蛋白表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-mAlb水平和肾脏指数均明显升高(P均<0.05);肾小球肥大、硬化,炎性浸润,胶原沉积,肾小球细胞可见足突肿胀或消失、基底膜弥漫性增厚、线粒体嵴断裂或消失;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显降低(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量均明显升高(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2比值均明显降低(P均<0.05),胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显升高(P均<0.05).与模型组比较,金雀异黄酮组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-mAlb水平和肾脏指数均明显降低(P均<0.05);肾组织病理改变和肾小球细胞超微结构病变均明显减轻;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显升高(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8 含量均明显降低(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2 比值均明显升高(P均<0.05),胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显降低(P均<0.05).鸦胆子苦醇组上述指标变化趋势与模型组相同且更加严重,鸦胆子苦醇可明显逆转金雀异黄酮对上述指标的调控作用.结论 金雀异黄酮能够抑制糖尿病肾病大鼠肾组织氧化应激和炎症反应,减轻肾组织病变和肾细胞超微结构病变,其机制可能与促进Nrf2/HO-1 通路活化、抑制NF-κB核转位有关.

目的 观察不同剂量的X射线照射后,金雀异黄酮干预治疗对人永生化皮肤表皮角质形成细胞(HaCaT)、人正常肺上皮细胞(Beas-2B)、人舌癌细胞(Tca-8113)、人口腔鳞状细胞(HCS-4)的抑制率和凋亡情况,探讨金雀异黄酮联合X射线照射对口腔癌治疗的有效性.方法 取人HaCaT、Beas-2B、Tca-8113、HCS-4细胞进行常规体外培养,将细胞分为 4组:对照组(未加金雀异黄酮且不进行X射线照射)、金雀异黄酮组、X射线组和金雀异黄酮+X射线组.其中,金雀异黄酮组将金雀异黄酮(浓度分别为 1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L)加入 4种细胞中处理 12 h;X射线组用X射线(剂量分别为 1、3、7 Gry)对 4种细胞照射 24 h;金雀异黄酮+X射线组根据X射线剂量不同,得到 4种细胞的金雀异黄酮最佳处理值,用流式细胞仪和噻唑蓝法测定 4种细胞的凋亡水平和细胞抑制率,并进行分析.结果 4种细胞加入不同浓度的金雀异黄酮后,HaCaT和Tca-8113两种细胞抑制率提高,差异有统计学意义(P<0.001),且与加入的金雀异黄酮浓度呈正相关,在 20.00 μmol//L浓度下细胞抑制率达到峰值.4种细胞进行不同能量值X射线照射后,仅有HSC-4细胞抑制率高于其他 3种细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与X射线剂量呈正相关,当剂量为 7 Gry时达到最高.仅有HaCaT细胞经金雀异黄酮和射线照射后细胞凋亡水平提高,差异有统计学意义(P<0.001).金雀异黄酮组HaCaT、Tca-8113细胞的凋亡水平高于其他两种细胞(P<0.001),但经射线照射后,HaCaT、Beas-2B、HSC-4细胞的凋亡水平有所提高(P<0.001).与其他 3组比较,金雀异黄酮+X射线组对HSC-4细胞的抑制作用更强,且细胞凋亡水平更高,差异有统计学意义(P<0.001).结论 金雀异黄酮与X射线联合作用能有效抑制HCS-4和Tca-8113细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,二者联用对口腔癌治疗有效.

目的:明确朱红栓菌菌丝体的主要化学成分.方法:通过100 L发酵罐发酵培养朱红栓菌菌丝体,烘干粉碎后用乙酸乙酯提取,提取物采用硅胶和凝胶等柱色谱方法进行分离纯化,获得的单体化合物利用核磁共振波谱、质谱等技术进行结构鉴定.结果:从朱红栓菌菌丝体的乙酸乙酯提取物共分离纯化得到11个化合物,分别是1,3-二油酰甘油酯(1)、α,α ’-双棕榈酰甘油酯(2)、麦角甾醇(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、桦褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀异黄酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11).结论:以上化合物均为首次从朱红栓菌菌丝体中分离得到.

目的 探讨金雀异黄酮(genistein)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的可能机制.方法 采用 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;集落形成法观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞集落形成能力的影响;金雀异黄酮干预 MDA-MB-231细胞36 h 后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK 蛋白的表达.结果 MTT 结果显示,金雀异黄酮呈时间、浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;集落形成实验结果显示,金雀异黄酮能明显抑制乳腺癌 MDA-MB-231细胞的集落形成(P <0.05);Western blot结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组相比,Bcl-2、NF-κB、p-ERK蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bax、caspase-3、p-JNK蛋白表达水平明显上调(P<0.05).结论 金雀异黄酮能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、ERK,激活JNK信号转导通路有关.

目的:探讨miR-200a与金雀异黄酮对3种胃癌细胞生长及侵袭能力的影响及可能机制.方法:MGC803、BGC823、MKN45细胞分别分为4组:阴性对照组(转染阴性对照NC mimic)、金雀异黄酮组(加入50μmol/L的金雀异黄酮)、miR-200a组(转染miR-200a mimic)、联合组(miR-200a mimic转染联合50μmol/L的金雀异黄酮处理),MTT法观察处理24 h对细胞生长的影响,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力的变化,RT-PCR及Western blot检测各组细胞EphA2 mRNA及蛋白的表达.结果:miR-200a与金雀异黄酮单用均可抑制部分胃癌细胞的生长、侵袭及EphA2蛋白的表达,两者交互作用仅出现在BGC823细胞中(P<0.05).结论:miR-200a与金雀异黄酮可能通过调控EphA2抑制胃癌细胞生长及侵袭,且二者存在部分协同作用.