目的:对2020年8月21日和9月27日广州市2起食物中毒事件中分离的41株金黄色葡萄球菌（金葡菌）进行肠毒素、肠毒素基因、耐药性、耐药基因情况以及分子分型分析。方法:对2起食物中毒样本分离的41株金黄色葡萄球菌，通过多位点序列分型（MLST）和 spa基因分型方法进行分子分型；ELISA检测菌株产肠毒素型别；PCR检测肠毒素基因；采用纸片扩散法对菌株进行药敏检测。选取21株代表性菌株进行全基因组测序，分析其耐药性和毒力基因，运用Snippy进行同源性分析。 结果:2起食物中毒的41株菌经MLST和 spa基因分型方法分为ST6-t701和ST7-t091。耐药性分析显示，27株ST7-t091中有2株鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），其余25株ST7-t091为甲氧西林敏感金色葡萄球菌（MSSA），对7种抗菌药物耐药；14株ST6-t701菌株的耐药谱完全一致，对6种抗菌药物耐药。PCR结果显示，所有菌株都携带 sea基因。全基因组分析显示，21株金葡菌具有相同毒力基因谱 scn、 sak、 sea、 hla、 hld、 hlgA、 hlgB、 hlgC、 lukD，携带的 scn-sak-sea属于人类免疫逃避基因簇D型，位于前噬菌体?Sa3上。单核苷酸多态性同源分析显示，2株MRSA ST7-t091高度同源，而12株MSSA ST7-t091和7株MSSA ST6-t701分别聚为一簇。 结论:2020年8月21日和9月27日广州市2起食物中毒事件分别为MRSA ST7-t091和MSSA ST7-t091混合感染以及MSSA ST6-t701感染引起，菌株耐药性较强且具有高致病力。

目的:明确新生儿金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus，SA)临床分离株的分子分型及毒力基因的携带特点。 方法:2013年1月—2019年10月从北京儿童医院共收集到189株新生儿SA临床分离株，对所有菌株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing , MLST)、葡萄球菌染色体盒(staphylococcal cassette chromosome mec, SCC mec)分型、金黄色葡萄球菌蛋白A( Staphylococcus protein A, Spa)分型，并进行了杀白细胞毒素(Panton-valentine leucocidin, PVL)基因及21种超抗原毒力基因的检测。 结果:189株SA临床分离株中，125株分离自呼吸道分泌物标本，55株分离自皮肤软组织感染的脓液，8株分离自血液，1株分离自胸腔积液。189株SA中有98株甲氧西林敏感SA(methicillin-susceptible SA，MSSA)及91株甲氧西林耐药SA(methicillin-resistant SA，MRSA)。MSSA克隆型较分散，共发现了42种克隆型，ST188-t189是主要的克隆型，占11%；MRSA共有26种克隆型，ST59-SCC mecⅣa -t437为主要的克隆型，占53%。MRSA中PVL的阳性率(32%)明显高于MSSA(10%)( P<0.01)，有166株菌株(88%)至少携带一种超抗原毒素基因，其中携带率最高的为肠毒素基因 seq和 seb，分别为47%和43%， seb- sek- seq是最常见的超抗原基因谱型。MRSA、MSSA菌株超抗原基因携带率分别为85%(77/91)和90%(88/98)，两者间无明显差异。 结论:新生儿MRSA与MSSA的主要克隆型不同，MRSA的主要克隆型为ST59-SCC mecⅣa -t437，MSSA的主要克隆型为ST188-t189, MSSA的克隆型更为分散。MRSA中的PVL阳性率(32%)明显高于MSSA的PVL阳性率(10%)，两者超抗原毒力基因携带率分别为85%和90%，无明显差异。

目的:探讨金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性。方法:采用回顾性病例对照研究方法。2017年6月—2018年3月，取南通大学附属医院收治的10例（女9例、男1例，年龄19~59岁）耳部瘢痕疙瘩患者行耳部瘢痕疙瘩核心切除术后弃用瘢痕组织及3例（均为女性，年龄20~24岁）色素痣患者手术后弃用正常皮肤组织。取耳部瘢痕疙瘩表面分泌物，培养细菌并进行鉴定。取瘢痕疙瘩和正常皮肤组织，采用蛋白质印迹法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+毒性休克综合征毒素1（TSST-1）的蛋白表达，并根据蛋白表达情况将瘢痕疙瘩分为超抗原阳性组和超抗原阴性组。蛋白质印迹法检测2组瘢痕疙瘩T细胞受体（TCR） Vβ蛋白表达。Masson、苏木精-伊红（HE）染色观察2组瘢痕疙瘩真皮内胶原纤维形成和炎症细胞浸润情况。酶联免疫吸附测定法检测超抗原阳性瘢痕疙瘩中金黄色葡萄球菌肠毒素A、肠毒素B、TSST-1表达。对数据行配对样本 t检验。 结果:耳部瘢痕疙瘩表面分泌物培养出细菌，优势菌培养24 h可见细菌周围出现溶血现象，菌落呈白色或金黄色，鉴定为金黄色葡萄球菌。3例患者正常皮肤肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性，蛋白表达量为0.267±0.016。4例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阳性，蛋白表达量为0.472±0.016，纳入超抗原阳性组；6例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性，蛋白表达量为0.255±0.004，纳入超抗原阴性组。超抗原阳性组瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达量明显高于超抗原阴性组瘢痕疙瘩和正常皮肤（ t=15.22、8.63， P<0.01）。超抗原阳性组瘢痕疙瘩TCR Vβ蛋白表达量为0.389±0.023，明显高于超抗原阴性组的0.169±0.014（ t=8.62， P<0.01）。Masson染色显示，2组瘢痕疙瘩真皮内均见大量胶原纤维增生。HE染色显示，超抗原阴性组瘢痕疙瘩真皮可见血管周围少量炎症细胞浸润，超抗原阳性组瘢痕疙瘩血管周围可见大量炎症细胞浸润。4例超抗原阳性瘢痕疙瘩患者中金黄色葡萄球菌肠毒素A阳性2例、金黄色葡萄球菌肠毒素B阳性2例，其中1例患者检测出肠毒素A和肠毒素B双阳性，未有患者检出金黄色葡萄球菌TSST-1。 结论:金黄色葡萄球菌分泌的超抗原是耳部瘢痕疙瘩众多发病原因中的一种，可能与金黄色葡萄球菌超抗原激活瘢痕疙瘩信号通路有关。

目的:探讨用小干扰RNA（siRNA）沉默信号传导和转录激活因子6（signal transducer and activator of transcription 6，STAT6），能否抑制小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎（eosinophilic chronic rhinosinusitis，ECRS）的产生。方法:2022年3—9月期间，48只BALB/c雌性小鼠随机分为Control（对照）组、Vehicle（转染试剂）组、Scramble siRNA（对照siRNA）组和STAT6 siRNA组，每组12只。用卵清蛋白（OVA）联合金黄色葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxin B，SEB）诱导小鼠ECRS，并用siRNA鼻腔滴注进行干预。随后收集外周血以及鼻黏膜组织标本。血细胞分析仪检测外周血嗜酸粒细胞（Eos）的数目及百分比；酶联免疫吸附实验检测外周血总免疫球蛋白E（IgE）和OVA-特异性IgE（OVA-sIgE）水平，以及鼻黏膜组织中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-5、IL-17A和嗜酸粒细胞趋化因子1（Eotaxin-1）的表达量；用苏木精-伊红（HE）染色鼻黏膜组织切片，在高倍视野（HPF）下对Eos进行计数；蛋白免疫印迹检测鼻黏膜中STAT6和磷酸化STAT6（p-STAT6）蛋白水平；免疫荧光染色对鼻黏膜中p-STAT6表达进行定位。采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果:STAT6 siRNA组小鼠外周血Eos计数、Eos百分比、总IgE以及OVA-sIgE水平［（0.318±0.045）×10 3/μl、（3.667±0.479）%、（102.070±13.205）ng/ml和（38.870±7.352）ng/ml］明显低于Vehicle组［（0.532±0.049）×10 3/μl、（6.710±1.061）%、（203.102±29.653）ng/ml和（74.575±6.432）ng/ml， Z值分别为-2.56、-2.24、-2.40、-2.56， P值均<0.05］和Scramble siRNA组［（0.493±0.036）×10 3/μl、（5.858±0.872）%、（189.964±30.042）ng/ml和（80.935±8.358）ng/ml， Z值分别为-2.17、-2.08、-2.24、-2.72， P值均<0.05］，且鼻黏膜组织中IL-5和Eotaxin-1表达量分别为（312.279±34.281）pg/ml和（25.297±4.323）pg/ml，也显著低于Vehicle组［（689.667±31.905）pg/ml、（68.278±6.485）pg/ml， Z值分别为-2.73、-2.88， P值均<0.01］和Scramble siRNA组［（661.783±42.094）pg/ml、（63.015±7.416）pg/ml， Z值分别为-2.72、-2.81， P值均<0.01］。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织Eos计数为（29.132±4.163）/HPF，明显低于Vehicle组［（78.050±7.912）/HPF， Z=-2.88， P<0.01］和Scramble siRNA组［（73.864±8.671）/HPF， Z=-2.72， P<0.01］。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织中STAT6蛋白相对表达水平为0.105±0.021，与Control、Vehicle及Scramble siRNA组（0.232±0.037、0.243±0.039、0.228±0.032）相比显著降低（ Z值分别为-2.25、-2.49、-2.56， P值均<0.05）。与Vehicle组（0.613±0.046）和Scramble siRNA组（0.641±0.050）相比，STAT6 siRNA组p-STAT6蛋白相对水平（0.292±0.038）明显下降（ Z值分别为-2.81、-2.88， P值均<0.01）。免疫荧光染色结果显示，p-STAT6主要位于鼻黏膜上皮细胞及炎性细胞的细胞核中，STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜中表达p-STAT6的绿色荧光弱于Vehicle及Scramble siRNA组。 结论:经鼻滴入STAT6 siRNA可下调鼻黏膜STAT6表达，降低p-STAT6水平，抑制ECRS产生。

目的:探讨广州地区就诊患儿粪便分离金黄色葡萄球菌毒素基因的分布状况和临床诊断及各分子分型的关系。方法:收集2018年8至11月广州市妇女儿童医疗中心3所院区就诊儿童2 059份非重复粪便标本所分离的412株金黄色葡萄球菌，采集相关临床信息。提取菌株DNA后用PCR的方法检测相关的毒素基因，其中包括葡萄球菌肠毒素（SE）基因（ sea、 seb、 sec、 sed、 see）以及杀白细胞毒素基因（ pvl），采用多位点序列分型（MLST）的方法对菌株进行分子分型，最后采用χ2检验对数据进行比较。 结果:从所分离的412株金黄色葡萄球菌中检测到256株（256/412，62.1%）至少含有1种肠毒素基因，携带率较高的依次为 sec（125/412，30.3%）、 seb（98/412，23.8%）和 sea（66/412，16.0%），并且金黄色葡萄球菌 pvl基因的携带率为18.7%（77/412）。其中分离自胃肠炎患者粪便的金黄色葡萄球菌 sea基因检出率（58/319，18.2%）明显高于非胃肠炎组（8/93，8.6%）（χ2=4.912， P=0.027），而在住院肺炎患者粪便中的金黄色葡萄球菌 pvl基因检出率（8/21，38.1%）高于非肺炎组（6/47，12.8%）（χ2=4.252， P=0.039）。并且金黄色葡萄球菌的毒素基因与特定的ST型密切相关，82.4%（28/34）的ST6携带 sea基因，所有的ST338和ST59均携带 seb基因，96%（48/50）的ST45携带 sec基因，ST338的 pvl基因携带率高达5/5。 结论:ST6型金黄色葡萄球菌产生的SEA毒素可能与儿童患者胃肠炎诊断呈密切相关。PVL毒力基因在社区获得性肺炎住院患儿金黄色葡萄球菌中的携带率高于非肺炎组，且与CC59克隆群密切相关。

目的:了解皮肤软组织感染（SSTIs）社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）的分子特征、耐药率及毒力基因携带情况，为临床抗生素使用及感染防控提供流行病学依据。方法:回顾分析衢州市人民医院2014至2018年皮肤软组织感染金黄色葡萄球菌，从中筛选出CA-MRSA菌株共72株，采用多位点序列分型（MLST）方法进行分子分型，采用纸片扩散法（K-B法）和微量肉汤稀释法进行药敏试验，使用聚合酶链式反应（PCR）方法对所收集菌株的7种毒力基因包括纤连蛋白结合蛋白基因（fnbA，fnbB）、溶血素基因（hla，hlb）、肠毒素基因（sec，seh）、杀白细胞素基因（PVL）进行分析，采用χ 2检验或Fisher精确检验对ST59组和非ST59组之间耐药率和毒力基因携带率之间的差异进行统计分析。 结果:衢州地区SSTIs CA-MRSA以ST59型（55.56%，40/72）为主要流行克隆株。所有分离株对红霉素（90.28%，65/72）、克林霉素（68.06%，49/72）、四环素（41.67%，30/72）具有较高的耐药率，对万古霉素、呋喃妥因、达托霉素及利奈唑胺全部敏感，序列型59（ST59）型对克林霉素的耐药率为（85.00%，34/40），ST59对克林霉素的耐药率明显高于其他克隆型（χ 2=11.886， P<0.01）。其余抗生素的耐药率在两组之间没有显著性差异。72株皮肤软组织感染CA-MRSA毒力基因的携带率分别为hla（97.22%，70/72）、hlb（33.33%，24/72）、fnbA（50.00%，36/72）、fnbB（48.61%，35/72）、PVL（63.89%，46/72）、sec（4.17%，3/72）、seh（4.17%，3/72），PVL基因在ST59中的携带率为（77.50%，31/40），ST59 PVL携带率显著高于在其他非ST59中的携带率（χ 2=7.227， P<0.01）。 结论:衢州地区SSTIs CA-MRSA的主要克隆为ST59型，与全国其他地区一致，ST59型分离株PVL基因的携带率明显高于其他分离株。SSTIs CA-MRSA对红霉素及克林霉素具有较高的耐药率，治疗中不宜作为经验性用药的首选。

目的:利用多种检测方法查明一起疑似细菌性食物中毒引起的食源性疾病的病因。方法:2022年8月9日上午9时35分合肥市疾病预防控制中心处理的一起疑似食源性疾病事件，实验室检测结果初步显示为金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染。运用实时荧光聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测分离培养鉴定所得的16株金葡菌的肠毒素基因（SEA-SEE）。同时对分离出的16株不同来源的金葡菌菌株运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型，分析菌株之间的相关性。结果:分离到的16株金葡菌肠毒素（SEs）分布情况是李姓售卖员肛拭子和砧板（内）涂抹样为SEB型，其余14株都同时携带A、C、E型肠毒素基因。PFGE分型结果显示所有菌株分为2个型别，除李姓售卖员肛拭子和砧板（内）涂抹样外其他14株均为同一型别，相似度为100%。李姓售卖株员肛拭子和砧板（内）涂抹样相似度为80.65%，与另一型别相似度为59.26%。这一结果和SEs的检测结果基本一致。结论:该例食源性疾病是由具有肠毒素的2种或3种不同来源的金葡菌混合污染引起的。

目的:预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W（SElW）与T细胞受体（TCR）的对接和超抗原活性位点，并对SElW进行克隆表达和纯化。方法:利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测，借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象，并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增 selw基因，将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序；经限制性内切酶 BamHⅠ和 Hind Ⅲ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a（+）中，重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达；用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化，用BCA法对蛋白进行定量。 结果:三维结构预测结果显示，SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成，其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成，羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08，其中93.24％的氨基酸Verify_3D得分≥0.2，且无氨基酸位于不允许区。模拟对接预测选择评分最高的对接构象（评分值为1 521.328）作为分析对象，采用PyMOL软件分析SElW与TCR之间形成的19个氢键。结合序列比对和既往研究结果，本研究预测发现了SElW蛋白的5个重要超抗原活性位点，分别是Y18、N19、W55、C88和C98。通过克隆表达和蛋白纯化，获得了高纯度的可溶性重组蛋白SElW。结论:研究预测了SElW蛋白中5个可能的超抗原活性位点，成功构建并表达了SElW蛋白，为进一步探索SElW免疫识别机制奠定了基础。

目的 了解武汉市生熟肉制品以及乳制品中金黄色葡萄球菌污染现状以及产肠毒素和耐药性情况.方法 参照GB4789.10-2016 进行金黄色葡萄球菌的检测,采用金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)PCR试剂盒、酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行SEA-E型检测;使用肉汤稀释法和PCR法进行药敏试验.结果 共采集 202 份生、熟肉以及乳制品,金黄色葡萄球菌检出率为6.43%(13/202),生肉中的检出率为 9.82%(11/112),熟肉制品为 4.00%(2/50),乳制品中无检出;13 株分离株中6 株检出肠毒素,产毒率为 46.15%(6/13),6 株产肠毒素金葡菌中有 4 株分型,分别为A、C、D、AB型.金黄色葡萄球菌对四环素和磺胺类药物普遍耐药,耐药基因检出率60%以上;对青霉素、红霉素耐药率超过50%;优势耐药谱为检出3 株的单一耐药(PEN)金葡菌(25.08%,3/13),其次为检出2 株的五重耐药(PEN-ERY-CLI-SXT-GEN)金葡菌(15.38%,2/13)和双重耐药(PEN-ERY)金葡菌(15.38%,2/13);基因检测与表型检测一致.结论 武汉市2020 年生熟肉食品中存在金黄色葡萄球菌污染,13 株分离株 6 株产肠毒素,需要警惕生熟肉食品潜在的食品风险,加强对该地区生熟肉食品安全风险的监管.

目的 研究一起食源性疾病事件金黄色葡萄球菌(金葡菌)病原学特征和同源性.方法 采用国标方法分离鉴定病原菌,微量肉汤稀释法检测菌株对16种药物的敏感性,全基因组测序和生物信息学分析病原菌分子遗传特征和同源性.结果 该事件分离得到16株金黄色葡萄球菌,包括8株患者分离株,l株厨工分离株和7株食品分离株.MLST 和 Spa 分型结果为 ST7-t91、ST5-t548、ST398-t588 和 ST965-t62,患者株分为 ST7-t91 型和 ST5-t548型;ST7分离株均对四环素和青霉素耐药,携带耐药基因aadD、tet(K)、blaZ和lnu(A),ST5株对16种抗生素均敏感;cgMLST分析发现ST7型菌株间等位基因差异≤3;毒力基因注释发现ST7株携带sea、chp、scn和sak毒力基因,ST5株携带chp、scn、sak、seg、selk、selm、selo和seln毒力基因.结论 该事件由多个ST型金葡菌混合感染引起,以ST7-t91型为主,该克隆株致病力强,但对头孢类抗生素和喹诺酮类等临床一线抗生素敏感.