经皮腔内血管成形术（percutaneous transluminal angioplasty，PTA）是目前治疗动脉粥样硬化或其他原因所致的血管狭窄或闭塞性病变的主要方法。虽然PTA治疗股腘动脉病变具有较好的即刻疗效，但是术后1年再狭窄的发生率高达60% ［1, 2］。虽然药物涂层球囊（drug-coated balloon，DCB）及药物涂层支架（drug-eluting stents，DES）的临床应用明显提高了下肢动脉腔内治疗的通畅率，但血管弹性回缩、夹层、严重钙化及长段病变仍然是腔内治疗失败的主要原因，因此，充分的血管准备成为腔内治疗的重要部分。镍钛合金约束球囊导管通过独特的约束结构，在球囊中创建“枕部”和“减压槽”，在增加球囊接触面积的同时，通过减压槽释放压力，提供可控、均匀且无创伤的扩张，以最大程度地减少血管创伤。现将本中心应用镍钛合金约束球囊腔内治疗下肢动脉粥样硬化闭塞症的临床结果及经验汇报如下。

目的:观察布鲁菌外膜蛋白（OMP）16脂化型（L16）和非脂化型（U16）对成骨细胞的毒力效应。方法:利用大肠埃希菌BL21（DE3）原核表达系统制备L16和U16重组蛋白，并使用镍柱纯化。采用成组设计，利用小鼠成骨细胞系（MC3T3细胞）分别与L16和U16重组蛋白共孵育（L16、U16刺激组），以布鲁菌脂多糖（LPS）刺激物为阳性对照（LPS对照组），未加任何刺激的细胞作为阴性对照，孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力；离心收集培养细胞上清，生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的释放率，评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用；进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率，以及通过免疫印迹法（WB）检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果:L16刺激组细胞活力[（56.16±1.63）%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[（97.02±1.44）%、（98.64±0.90）%， P均< 0.01]，LDH释放率[（84.64±0.96）%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[（34.82±3.41）%、（26.75±1.95）%， P均< 0.01]。Annexin Ⅴ-PE/7-AAD染色结果显示，L16刺激组细胞凋亡率为（46.45±2.19）%，而其余组均< 1%。WB结果显示，L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3，而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。 结论:L16能诱导成骨细胞的凋亡，使成骨细胞的增殖受到抑制，而U16的作用不明显，具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。

目的:通过对7种浸提介质浸提镍钛合金丝不同时间段所释放的镍离子含量的测定，绘制其镍离子释放曲线，根据该释放曲线，确定一种浸提介质可替代血液，进行体外镍释放评价。方法:使用微波消解/电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定山羊全血中镍的释放，山羊血清中镍的释放量太高，通过稀释的方法测定，其他浸提介质直接测定其镍释放量。以释放量和不同的时间点为变量做镍释放的标准曲线，根据各个浸提介质的镍释放曲线，找出可以替代血液的浸提介质。结果:通过7种浸提介质的镍释放曲线分析得出，这7种溶液都不适合作为评价镍释放的体外浸提介质。考虑到浸提介质的安全性和配制的简便性，选用盐酸溶液暂作为浸提介质，但浓度需要稀释，最终确定了可替代血液进行体外考察镍钛合金心血管产品镍释放的浸提介质为0.005%盐酸溶液。结论:找出了可替代血液的体外浸提介质暂为盐酸，但其浓度过高，导致镍释放量也过多，偏离实际情况，故对盐酸溶液逐级稀释，考察其镍释放曲线，直至接近临床释放水平，确定其实际浓度，为后续的安全性和风险性评价打下了坚实的基础。

建立基于萤火虫荧光素酶的大肠杆菌超声破碎辅助定量方法,利用荧光素酶灵敏度高、检测迅速的特点,对靶细胞的破碎效果进行表征.以表达了萤火虫荧光素酶的大肠杆菌作为内标,在破碎前与靶蛋白表达菌按一定比例混合,考察不同破碎条件下荧光素酶和靶蛋白活性向胞外释放的情况,对辅助定量效果进行评价.结果表明,将表达了萤火虫荧光素酶的大肠杆菌按 1∶500(体积比)同待破碎菌悬液混合,能够通过破碎后上清液中荧光素酶活性的变化,正确反映靶细胞的破碎程度,并为破碎过程中蛋白质的活性保存提供参考.破碎产物中引入的荧光素酶,对后续靶蛋白的镍珠法纯化没有影响.含有萤火虫荧光素酶的菌体,可在-80℃环境下保存至少 90 d而不产生酶活性的显著下降,且细胞对超声破碎的耐受性也不因冻存改变,可在临用前直接解冻并与靶细胞混合,起到辅助定量作用.因此,利用萤火虫荧光素酶对大肠杆菌超声破碎的程度进行辅助定量,是简便、稳定且高效的.

镍钛记忆合金是一种在一定温度下具有形状记忆能力的合金,相较于传统骨科内固定材料,镍钛记忆合金凭借弹性强、不易形成应力集中、生物整合性好、抗疲劳等优势广泛应用于骨科,其制成的固定物有锁骨环抱器、聚髌器、肋骨环抱器及腕关节融合器等.但镍钛记忆合金也存在钢性不足、易松脱等缺点.此外,将其长期植入体内是否会释放有害物质损害机体仍存在争议.该文就镍钛记忆合金近年在骨科临床应用的研究进展作一综述.

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目的 研究猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)引起血小板聚集的作用机制,为猪链球菌临床救治提供科学依据与理论基础.方法 镍柱亲和层析法纯化MRP-N、MRP-C蛋白,通过血小板聚集仪、血栓弹力图仪以及扫描电子显微镜观察MRP蛋白引起血小板聚集的情况.结果 猪链球菌2型野生株可以引起血小板的聚集,而突变株ΔMRP则不能;MRP-N蛋白可以引起血小板的聚集,而MRP-C蛋白则不能;β2整合素受体抑制剂(GPRP)能显著抑制MRP引起的血小板聚集.结论 MRP是猪链球菌2型引起血小板聚集的关键因子,MRP通过β2整合素受体途径引起血小板的聚集.

目的 研究不同厚度纳米铜硅胶膜对记忆合金硅胶宫内缓释系统[Memory Alloy Silicone Intrauterine System,MAS-IUS]中左炔诺孕酮(LNG)释放量造成的影响,并探讨其释放模式.方法 将直径为0.3mm的钛镍合金丝在280℃下盘旋形成外径为3 mm的合金丝管架;将一定比例(质量比)的纳米铜硅胶混合物封闭合金丝管架外壁,制成膜厚度分别为0.5、1.0、1.5、2.0mm的“钛镍记忆合金纳米酮硅胶管”模型.将52 mg LNG置于管腔中,以硅胶粘合剂封堵两端,制成不同纳米铜硅胶膜厚度的MAS-IUS.将不同膜厚度的MAS-IUS模型置于盛有10 mL无水乙醇的离心管中,置于在37℃恒温水浴箱中,定期用紫外分光光度计测量离心管中LNG含量.结果 一定剂量的LNG在MAS-IUS模型中的释放速率随纳米铜硅胶膜的增厚而下降,各组释放量均在5d后趋于稳定,表现为在一定范围内波动的缓释规律.结论 LNG在不同纳米铜硅胶膜厚度的MAS-IUS中,表现为先爆释、然后缓释的状态;可以通过调整纳米铜硅胶膜厚度控制MAS-IUS中LNG的释放量.

LVIS支架作为治疗颅内动脉瘤的新型辅助支架,是一种编织型、自膨式设计的镍钛合金闭环支架.具有较高的金属覆盖率,网孔直径仅1 mm,故可有效避免弹簧圈突出和逃逸,尤其适合微小宽颈动脉瘤的辅助栓塞[1].虽然理论上LVIS支架具有理想的顺应性和贴壁性,但任何类型的支架在动脉转折处都存在贴壁困难的可能,特别是LVIS支架作为编织型支架,如果规格选择有偏差或释放手法不当,则可能在动脉转折处出现张开不良、无法贴壁的情况,甚至导致血栓栓塞性并发症[2].现报道2例应用LVIS支架辅助弹簧圈栓塞颈内动脉虹吸部动脉瘤的经验,探讨LVIS支架的规格选择和释放技巧.

目的 从美洲钩虫 (Necator americanus) cDNA中扩增编码NaKuI10基因片段, 构建原核表达系统, 重组表达并纯化rNaKuI10, 采用化学发色法和平板溶解试验等检测其对有关丝氨酸蛋白酶的抑制作用及纤溶活性.方法 根据GenBank MH218867序列, 从美洲钩虫cDNA中扩增出编码成熟肽NaKuI10基因片段并连接入表达载体, 构建原核表达重组质粒pET32a-sumo/NaKuI10, 鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌 (Escherichia coli) BL21 (DE3) 中, 用IPTG诱导表达, 超声破碎细菌后用镍亲和层析纯化表达产物, 在纯化柱上用SUMO蛋白酶切割融合标签获得rNaKuI10, 用发色底物法检测rNaKuI10对各丝氨酸蛋白酶的抑制活性, 通过纤维蛋白平板法和纤维蛋白原降解试验观察rNaKuI10对纤溶酶纤溶活性的抑制作用.结果 成功构建了重组质粒pET32a-sumo/NaKuI10, 表达产物纯化后获得可溶性rNaKuI10.2倍及等摩尔比的rNaKuI10分别能抑制100％及90.4％的人纤溶酶活性, 22.4％及10.3％的人胰蛋白酶活性.但1、2、5倍摩尔比的rNaKuI10对人中性粒细胞弹性蛋白酶, 组织蛋白酶G, 蛋白酶3, 胰糜蛋白酶, 胰弹性蛋白酶, 凝血酶, 凝血因子Xa (FXa) 、FXIa、FXIIa、FIXa, 活化蛋白C, 血浆激肽释放酶及FVIIa/TF均无明显抑制作用.rNaKuI10对人纤溶酶的抑制常数 (ki) 为 (0.83±0.10) nmol/L.2 000nmol/L的rNaKuI10接近完全抑制1 000nmol/L的人纤溶酶对纤维蛋白平板中纤维蛋白的溶解作用, 等摩尔比的rNaKuI10可完全抑制人纤溶酶对纤维蛋白原的降解作用.结论 NaKuI10是一种抑制活性强且特异性较好的纤溶酶抑制剂, 其生物学功能还需进一步研究.