目的:探究鼻咽癌来源外泌体中含有的长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录本（CCAT2）对鼻咽癌血管生成的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为鼻咽癌细胞（CNE2）上清共培组与正常鼻咽上皮细胞（NP69）上清共培组，CCK8法检测两组HUVEC增殖能力。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测CNE2上清与HUVEC共培后lncRNA CCAT2的表达。将HUVEC分为鼻咽癌患者血清共培组、健康人血清共培组，CCK8法检测两组HUVEC增殖能力，qRT-PCR检测两组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达。超速离心法提取CNE2、NP69细胞上清外泌体。将HUVEC分为CNE2上清外泌体共培组与NP69细胞上清外泌体共培组，CCK8等血管生成实验比较两组HUVEC功能差异。在HUVEC中转染短发夹RNA（shRNA）抑制lncRNA CCAT2表达，CCK8等血管生成实验比较不同表达lncRNA CCAT2的HUVEC功能差异。通过shRNA转染CNE2，提取上清外泌体RNA，qRT-PCR检测不同表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体中lncRNA CCAT2的差异，将上述两组外泌体分别与HUVEC共培，qRT-PCR检测共培后HUVEC中lncRNA CCAT2的表达差异，同时迁移实验检测HUVEC的功能差异。用GraphPad Prism 8作图及统计分析。结果:与NP69上清共培组相比，CNE2上清共培组HUVEC增殖能力较高。CNE2上清与HUVEC共培48 h与0 h相比，lncRNA CCAT2表达较高（1比1.40±0.01， t=42.43， P=0.000）。与健康人血清共培组相比，鼻咽癌患者血清共培组HUVEC增殖能力较高，48 h lncRNA CCAT2表达较高（1比1.25±0.03， t=14.43， P=0.001）。与NP69细胞上清外泌体共培组相比，CNE2上清外泌体共培组HUVEC增殖能力较高，迁移实验中穿过小室的细胞数较多（53.12±2.13比154.74±4.17， t=37.73， P=0.000），小管生成实验中结点数较多（10.72±1.02比53.65±3.21， t=22.63， P=0.000）。与sh-NC组相比，sh-CCAT2组HUVEC增殖能力较低，迁移实验中穿过小室的细胞数较少（401.34±22.15比138.25±6.85， t=23.19， P=0.000），裸鼠皮下基质胶栓塞实验中微血管计数较少（41.00±0.32比27.15±0.23， t=61.53， P=0.000）。与正常表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体（sh-NC外泌体组）相比，低表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体（sh-CCAT2外泌体组）中lncRNA CCAT2表达较少（1比0.65±0.02， t=30.31， P=0.000）。与sh-NC外泌体组相比，sh-CCAT2外泌体组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达较低（1比0.73±0.01， t=46.77， P=0.000），sh-CCAT2外泌体组迁移实验中穿过小室的细胞数较少（389.73±26.34比190.54±8.36， t=12.47， P=0.001）。 结论:鼻咽癌来源外泌体中含有的lncRNA CCAT2促进鼻咽癌血管生成。

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默长链非编码RNA肠癌相关转录子2(CCAT2)表达对人多发性骨髓瘤细胞株RPM I 8226、U266的体外杀伤作用.方法 选取对数生长期RPM I 8226、U266细胞经脂质体法转染2条靶向沉默CCAT2的siRNA(siCCAT2-1、siCCAT2-2),实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测基因水平上沉默CCAT2最好的siRNA用于后续实验(实验组),同时设立阴性对照组(转染无意义序列)和空白对照组(未转染).采用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞增殖的抑制率,流式细胞术Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测各组的凋亡率,qPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平,Transwell法检测各组侵袭转移细胞数目.结果 siCCAT2-1、siCCAT2-2转染后多发性骨髓瘤细胞株中的CCAT2水平均降低,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均 P<0.05);且RPMI 8226、U266细胞中siCCAT2-2转染抑制率高于siCCAT2-1(均 P<0.05),故选取siCCAT2-2来验证细胞学功能.实验组RP-M I 8226、U266细胞的增殖抑制率均高于空白对照组和阴性对照组(均 P<0.05),且总体上抑制效果呈时间依赖的趋势;与其余两组相比,实验组RPMI 8226细胞的凋亡率及Bax、Bad的mRNA水平升高,Bcl-2水平及 Transwell穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(均 P<0.05).空白对照组和阴性对照组以上指标的差异无统计学意义(均 P>0.05).结论 在多发性骨髓瘤细胞株中,siRNA靶向沉默CCAT2表达可抑制其增殖、侵袭转移并诱导凋亡,可能在多发性骨髓瘤防治中有一定价值.

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对口腔鳞状细胞癌SCC-9细胞侵袭、迁移及上皮间充质转化的影响及机制.方法:利用RT-PCR检测CCAT1在癌旁组织、口腔鳞状细胞癌组织、口腔角质细胞系hNOK、口腔鳞状上皮细胞癌细胞系SCC-4、SCC-9、SCC-25和舌鳞状细胞癌Tca83细胞系的表达情况.进而用sh-CCAT1转染SCC9细胞,用CCK8检测细胞增殖情况,Hoechst染色检测细胞凋亡情况,划痕检测细胞迁移能力,Transwell检测细胞侵袭能力,免疫印迹检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、钙依赖性黏附蛋白E(E-cadherin)、钙依赖性黏附蛋白N(N-cadherin)、Snail、β-连环素(β-catenin)、T细胞因子4(TCF-4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)的表达水平.结果:CCTA1的mRNA水平在口腔鳞状细胞癌组织及细胞中显著升高,且其在SCC-9中的mRNA水平高于其他口腔鳞状细胞癌细胞系,故选用SCC-9进行后续实验.sh-CCAT1可显著下调SCC-9细胞中CCAT1的mRNA水平,降低SCC-9细胞增殖速率及PCNA的表达,提高SCC-9凋亡细胞百分比,并降低SCC-9细胞划痕闭合率,减少SCC-9侵袭细胞数及MMP-2和VEGF的表达.同时,sh-CCAT1可显著提高E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Snail的表达.此外,sh-CCAT1显著降低 β-catenin、TCF4和Cyclin-D1的表达.结论:CCAT1可通过促进上皮间充质转化增强口腔鳞状细胞癌SCC-9细胞侵袭和迁移能力.

目的 分析长链非编码RNA CCAT1(LncRNA CCAT1)在非小细胞肺癌细胞系中的表达及作用.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定非小细胞肺癌细胞系HCC827、H1650、H1299、A549及正常肺上皮细胞系BEAS-2B中LncRNA CCAT1的表达;将A549细胞系分为CCAT1-siRNA组、CTR-siRNA组及Mock组,经LipofectamineTM 3000分别转染pcDNA3.1-LncRNA-CCAT1-shRNA、pcDNA3.1-LncRNA-CCAT1-NC及空白质粒pcDNA3.1;MTT实验测定细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验测定细胞迁移、侵袭能力,qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验分别测定细胞中miR-152和成纤维细胞生长因子2(FGF2)蛋白表达水平.结果 LncRNA CCAT1在非小细胞肺癌细胞系HCC827、H1650、H1299、A549中的表达量高于BEAS-2B(均P<0.01).MTT结果示,转染72及96 h后,CCAT1-siRNA组细胞增殖活力显著低于CTR-siRNA组和Mock组(均P<0.05).CCAT1-siRNA组划痕愈合率低于CTR-siRNA组[(33.45±2.62)％vs.(52.73±4.17)％,P<0.05].CCAT1-siRNA组侵袭细胞数少于CTR-siRNA组[(93.7±6.2)vs.(172.8±11.5),P<0.01)].CCAT-siRNA组miR-152表达量高于CTR-siRNA组[(3.73±0.18)vs.(1.02±0.05),P<0.01)].CCAT-siRNA组FGF2蛋白表达量低于CTR-siRNA组[(0.59±0.03)vs.(1.01±0.06),P<0.01)].结论LncRNA CCAT1在非小细胞肺癌细胞系中高表达,LncRNA CCAT1沉默可抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与miR-152表达上调和FGF2表达下调有关.

目的 探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖、凋亡和成骨分化的影响及可能机制.方法 以成骨诱导液诱导hBMSCs,分别于诱导后0 d和1、3、7、14 d采用RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、CCAT1和miR-335-3p基因表达水平.转染CCAT1小干扰RNA或miR-335-3p模拟物(mimics)至hBMSCs,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测hBMSCs存活率、流式细胞术检测细胞凋亡率、RT-qPCR检测细胞中ALP、RUNX2和OCN基因表达,蛋白印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-335-3p与CCAT1调控关系.以健康体检者为对照,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测OP患者血清中CCAT1和miR-335-3p表达水平.结果 随着诱导时间的增加,hBMSCs中ALP、RUNX2、OCN及CCAT1基因表达水平逐渐升高(P<0.05),miR-335-3p表达水平逐渐降低(P<0.05).低表达CCAT1或高表达miR-335-3p后,hBMSCs存活率和CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),ALP、RUNX2和OCN水平降低(P<0.05).CCAT1在hBMSCs细胞中靶向负调控miR-335-3p表达.低表达miR-335-3p逆转了低表达CCAT1对hBMSCs增殖、凋亡和分化的影响.与对照组比较,OP患者血清CCAT1表达水平降低(P<0.05),miR-335-3p表达水平升高(P<0.05).结论 OP患者血清中CCAT1表达降低,miR-335-3p表达升高.低表达CCAT1可能通过靶向上调miR-335-3p抑制hBMSCs增殖和分化,并促进其凋亡.