目的:基于加权基因共表达网络分析和分子对接探讨青娥丸治疗腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)的作用机制.方法:通过GEO数据库获取LDH相关数据集GSE124272,采用R软件构建加权基因共表达网络;通过模块基因与性状的关联分析筛选关键模块,以及模块基因与表型数据的关联分析筛选重要基因.利用中药系统药理学数据库与分析平台(Tra-ditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中药分子机制生物信息学分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)数据库检索青娥丸的活性成分,基于Uniprot数据库筛选活性成分的作用靶点,采用Cytoscape软件构建"药物-活性成分-靶点"网络.通过DisGeN-ET、GeneCards数据库获取LDH疾病靶点,将其与模块基因、青娥丸靶点取交集,作为青娥丸治疗LDH的关键靶点;采用R软件进行基因本体(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;采用AutoDockTools软件进行分子对接验证.结果:GSE124272 数据集共涉及 5 495 个基因,blue 模块(R = 0.63,P = 0.008)可能是LDH的关键模块,筛选得到310 个重要基因.青娥丸活性成分 65 个,排名前 5 的活性成分是补骨脂素、鞣花酸、原人参二醇、异补骨脂素、槲皮素.青娥丸作用靶点997 个,LDH疾病靶点1 127 个,与关键模块基因取交集得到5 个关键靶点,包括丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen activated protein kinase 14,MAPK14)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等.KEGG富集分析筛选得到 125 条通路,包括MAPK信号通路、破骨细胞分化、细胞凋亡等.分子对接显示,青娥丸关键成分与关键基因有较强的结合活性.结论:青娥丸可能通过补骨脂素、鞣花酸、原人参二醇等活性成分作用于MAPK14、MMP-9、IL-1β等关键靶点,调控MAPK信号通路、破骨细胞分化等通路从而发挥治疗LDH的作用.

骨质疏松症是一种临床常见的慢性全身性骨骼疾病,其发病率逐年增加,致死率、致残率应引起大家足够的重视.随着国家大力倡导中医药事业的发展,传承创新中医药的共识不断增强,诸如古方青娥丸等一系列传统医药逐渐显现出其独特优势.着重探讨青娥丸治疗骨质疏松症的临床与基础研究,并结合相关可能机制做出综述,能够更好地展现其独特魅力,以期为骨质疏松症的临证诊疗提供参考与借鉴.

目的 探讨青娥丸联合钙剂对乳腺癌内分泌治疗后骨质疏松患者骨代谢的影响.方法 前瞻性收集乳腺癌内分泌治疗后骨质疏松患者100例,按完全随机原则分为研究组和对照组,每组各50例,研究组给予青娥丸联合钙剂治疗,对照组仅给予钙剂治疗.主要观察指标包括降钙素、骨钙素、碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b、转化生长因子β1、I型胶原羧基末端肽和骨密度.结果 两组患者治疗前骨密度差异无统计学意义[(0.52±0.06)vs(0.54±0.05)g·cm-2,P＞0.05].与对照组比较,研究组患者治疗后6个月时骨密度显著增加[(0.66±0.09) vs (0.58±0.08) g·cm-2,P＜0.05];治疗12个月后骨密度显著增加[(0.71 ±0.11)vs(0.63±0.10)g·cm-2,P＜0.05].两组患者治疗前降钙素、骨钙素、碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后12个月与对照组比较,研究组患者降钙素水平显著升高[(262.39 ±72.59)vs(231.53 ±62.39) ng·L-1,P＜0.05];骨钙素水平显著升高[(11.53 ±2.69)vs(9.35 ±2.27)μg·L-1,P＜0.05];碱性磷酸酶水平显著升高[(111.59 ±35.35)vs(97.93 ±31.56) IU·L-1,P＜0.05];抗酒石酸酸性磷酸酶5b显著降低[(3.57 ±0.91)vs(4.49 ±1.50) mIU·mL-1,P＜0.05)].两组患者治疗前后转化生长因子β1和Ⅰ型胶原羧基末端肽等均差异无统计学意义(P＞0.05).结论 青娥丸联合钙剂有助于改善乳腺癌内分泌治疗后骨质疏松患者骨密度和骨代谢.

目的:观察青娥丸治疗绝经后骨质疏松症肾虚血瘀证的临床疗效.方法:选取2014年9月至12月华中科技大学同济医学院附属协和医院骨质疏松症专病门诊确诊的绝经后骨质疏松症肾虚血瘀证患者48例,根据就诊顺序编号并按随机数字表法分为青娥丸治疗组和青娥丸模拟剂对照组,每组24例.两组均给予碳酸钙D3片作为基础治疗,青娥丸治疗组服用青娥丸,青娥丸模拟剂对照组服用青娥丸模拟剂,每次1丸,每日3次.疗程为24周.基线和治疗24周后对两组有效性评价指标和安全性评价指标进行检测和比较,随时记录不良事件.结果:青娥丸能显著降低绝经后骨质疏松症肾虚血瘀证患者腰背疼痛VAS评分、主要临床症状计分、中医证候总计分、腰背疼痛和腰膝酸软症状程度,并能显著降低血清β-CTX水平(P＜0.05);下肢痿弱、步履艰难、耳鸣症状程度无明显改善;腰椎L2-L4及股骨颈骨密度值无明显增加.青娥丸模拟剂对照组腰椎L2-L4及股骨颈骨密度值与基线比较明显降低(P＜0.01,P＜0.05).青娥丸治疗组总有效率(75.00％)优于青娥丸模拟剂对照组(29.17％)(P＜0.01).结论:青娥丸能显著改善绝经后骨质疏松症肾虚血瘀证患者腰背疼痛和腰膝酸软症状,显著降低β-CTX水平.

目的:建立同时测定青娥丸中陆地锦苷、紫云英苷、异鼠李素、山奈酚及槲皮素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Kinetex-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-1％磷酸为流动相,线性梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为360 nm,柱温为30℃.结果:陆地锦苷、紫云英苷、异鼠李素、山奈酚及槲皮素检测的线性范围分别为1.312～131.200μg/ml(r=0.9999)、1.566～155.600μg/ml(r=0.9997)、1.097～109.700μg/ml(r=0.9999)、0.607～60.700μg/ml(r=0.9999)及0.763～76.300μg/ml(r=0.9996);定量限分别为0.13、0.15、0.11、0.30及0.35μg/ml;检测限分别为0.05、0.05、0.04、0.10及0.15μg/ml;平均加样回收率分别为94.1％(RSD=2.1％,n=6)、96.1％(RSD=2.1％,n=6)、96.5％(RSD=2.5％,n=6)、95.1％(RSD=2.3％,n=6)及96.3％(RSD=2.3％,n=6).结论:该方法简便、准确,适用于青娥丸中陆地锦苷、紫云英苷、异鼠李素、山奈酚及槲皮素含量的测定.

目的 探讨盐炙对青娥丸中主要成分溶出的影响.方法 采用HPLC法测定了青娥丸生品、清炒品、盐润品、盐炙品中15种指标性成分含有量.结果 补骨脂酚经过炮制后含有量均呈显著性降低.与青娥丸生品相比,清炒后补骨脂苷、异补骨脂苷含有量显著升高,京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含有量无显著变化,其他成分含有量均下降;盐水闷润后,补骨脂苷和异补骨脂苷含有量下降,补骨脂素与异补骨脂素含有量显著升高;盐炙后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚含有量明显下降,补骨脂苷、异补骨脂苷、异补骨脂二氢黄酮含有量明显升高,其他成分无显著性变化.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于青娥丸的质量控制.

目的:青蛾丸为祖国医学的传统名方,其临床应用以及随证变方应用十分广泛.我们采用青娥丸治疗绝经后中医辨证属肾虚血瘀型的骨质疏松症患者并观察其临床疗效.方法:共选择60例我院收治并确诊为绝经后肾虚血瘀型骨质疏松症的患者,根据就诊顺序编号并随机分为治疗组与对照组,每组各30例.治疗组在正常治疗方案治疗下,予青娥丸口服,每次1丸,日3次,连续治疗1个月为1个疗程;对照组仅按正常治疗方案治疗,予口服安慰剂蜜丸.对两组有效性评价指标和安全性评价指标进行检测和比较,并随时记录不良事件.结果:青娥丸能显著降低绝经后肾虚血瘀型骨质疏松症的患者腰背疼痛VAS评分、主要临床症状计分、腰背疼痛和腰膝酸软症状程度.经治疗3个疗程后,显效21例,有效5例,无效4例,治疗组有效率为86.7％优于对照组29.17％(P＜0.01).结论:青娥丸治疗绝经后肾虚血瘀型骨质疏松症,可显著改善患者腰背疼痛和腰膝酸软的临床症状,疗效确切且副作用少,患者易于接受,故值得推广.

Objective:To investigate the impact of Qing'e Pill(青娥丸,QEP) on the cancellous bon microstructure and its effect on the level of β-catenin in a mouse model of postmenopausal osteoporosis.Methods:Ninety-six 8-week-old specific pathogen free C57BL/6 mice were randomly divided into 4 groups (24/group):sham,ovariectomised osteoporosis model,oestradiol-treated,and QEP-treated groups.Three months after surgery,the third lumbar vertebra and left femur of the animals were dissected and scanned using micro-computed tomography (micro-CT) to acquire three-dimensional (3D) parameters of their cancellous bone microstructure.The impact of ovariectomy,the effect of oestradiol and QEP intervention on cancellous bone microstructure,and the expression of β-catenin were evaluated.Results:The oestradioland the QEP-treated groups exhibited a significant increase in the bone volume fraction,trabecular number,trabecular thickness,bone surface to bone volume ratio (BS/BV),and β-catenin expression compared with those of the model group (P＜0.05).In contrast,the structure model index,trabecular separation,and BS/BV were significantly decreased compared with those of the ovariectomised osteoporosis model group (P＜0.05).No differences were observed in the above parameters between animals of the QEP-and oestradiol-treated groups.Conclusions:The increased β-catenin expression may be the mechanism underlying QEP's improvement of the cancellous bone microstructure in ovariectomised mice.Our findings provide a scientific rationale for using QEP as a dietary supplement to prevent bone loss in postmenopausal women.

目的 探讨温针灸联合古方青娥丸加味对绝经后骨质疏松患者腰腿痛患者疼痛、氧化应激及性激素水平的影响.方法 选择2015年7月至2017年12月在本院接受治疗的80例绝经后骨质疏松腰腿痛患者进行研究,采用随机数字表法将患者分为2组,每组各40例.对照组单纯采用青娥丸加味进行治疗,观察组在此基础上加以温针灸治疗.对比两组患者疗效、疼痛、氧化应激、性激素水平及不良反应发生情况.结果 观察组患者总有效率为95.00％,明显高于对照组的77.50％(P<0.05).治疗后两组患者血清丙二醛、氧化型谷胱甘肽、疼痛视觉模拟评分均明显下降(P<0.05),且观察组下降幅度更大(P<0.05);治疗后两组患者超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、雌二醇、促卵泡素、促黄体素均明显上升(P<0.05),且观察组升高幅度更显著(P<0.05).对照组不良反应发生率为5.00％,与观察组的7.50％比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 温针灸联合青娥丸加味与单独使用青娥丸加味治疗相比,可明显提高骨质疏松腰腿痛患者疗效、缓解疼痛、改善氧化应激反应、提高性激素水平.

目的:研究青娥丸对慢性温和不可预知应激模型(CUMS)大鼠的抗抑郁效果,及其对雌激素受体及相关信号通路的调控作用,探讨青娥丸的抗抑郁机制.方法:54只SD大鼠建立CUMS抑郁大鼠模型,实验设为正常组、模型组、草酸依他普伦组(6.3 mg·kg-1)及青娥丸低、中、高剂量组(1.71,5.13,15.39 g·kg-1).CUMS造模4周后给予各组相应药物治疗2周,采用行为学[糖水消耗实验(SPT),强迫游泳实验(FST),旷场实验(OFT)]评价大鼠抑郁状态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测雌激素受体α(ERα),雌激素受体β(ERβ),脑源性神经营养因子(BDNF)及酪氨酸激酶受体B(TrkB)的蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠的糖水消耗率及旷场得分均下降(P ＜0.05,P＜0.01),游泳不动时间显著延长(P＜0.01),同时ERα,ERβ,BDNF和TrkB的蛋白表达水平下降(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的行为学表现得到改善,糖水消耗率及旷场得分增加(P ＜0.05,P＜0.01),游泳不动时间减少(P＜0.05),同时ERα,ERβ,BDNF和TrkB蛋白的表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01),其中青娥丸中剂量组的调节作用更为显著.结论:青娥丸可改善CUMS模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调ERα,ERβ的表达,激活雌激素受体介导的ERβ/BDNF/TrkB通路起到神经保护作用有关.