亮斑扁角水虻Hermetia illucens L.幼虫能够转化有机废弃物如餐厨垃圾等,获得虫体蛋白可以生产畜禽和水产饲料,虫粪可作为优质有机肥.益生微生物在亮斑扁角水虻幼虫处理有机废弃物过程中扮演着至关重要的角色,然而乳酸菌对亮斑扁角水虻高效处理有机废弃物的促进作用却鲜有研究.本研究以亮斑扁角水虻幼虫为研究对象,通过添加不同的乳酸菌到亮斑扁角水虻幼虫处理人工饲料的体系中,评估不同乳酸菌菌株对亮斑扁角水虻幼虫转化人工饲料的影响,以筛选出能够提高亮斑扁角水虻幼虫存活率、转化率以及促进幼虫蛋白积累效果显著的乳酸菌并定义其为益生乳酸菌.通过将乳酸菌添加到亮斑扁角水虻幼虫转化人工饲料体系,初步筛选出3株亮斑扁角水虻益生乳酸菌L4,L7,L8.经过形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析后,确定L4为短促生乳杆菌,L7为啤酒促生乳杆菌,L8为植物乳植物杆菌.与空白对照组相比,益生乳杆菌L4,L7,L8的添加可以显著提高亮斑扁角水虻幼虫鲜重 5.93%,6.41%,9.43%;亮斑扁角水虻转化率也分别提高了 8.01%,7.18%,13.60%;物料减少率则分别提高了 3.47%,4.75%,6.28%.更重要的是,L4,L7,L8 对亮斑扁角水虻幼虫蛋白积累具有显著促进作用.与空白对照组相比,亮斑扁角水虻幼虫粗蛋白含量分别显著提高了5.14%,3.13%,4.70%;幼虫蛋白总产量分别显著提高了 14.40%,14.84%,17.63%.综上,本研究筛选、鉴定并评估了对亮斑扁角水虻幼虫具有益生作用的乳杆菌,不仅能提高亮斑扁角水虻幼虫对人工饲料的转化率,获得更多的虫体生物质,而且能够促进亮斑扁角水虻幼虫的蛋白积累提高虫体蛋白质含量,获得高品质的昆虫蛋白.研究结果对揭示亮斑扁角水虻与肠道微生物协同代谢营养物质的机制具有重要意义,并且在亮斑扁角水虻大规模转化有机废弃物中应用潜力巨大.

本研究旨在研究甘蔗渣和菠萝渣饲喂黑水虻Hermetia illucens幼虫对其幼虫的生长性能及其肠道微生物的影响.试验分别以未发酵和自然发酵的甘蔗渣、菠萝渣为基础饲料,辅以不同比例的豆腐渣配制成不同饲料配方喂养黑水虻,测定黑水虻幼虫的生长性能及肠道微生物.结果显示,与以纯豆腐渣为基础饲料的对照(CK)相比,处理Ⅳ(80%发酵菠萝渣+20%豆腐渣)喂养黑水虻幼虫可显著提高预蛹前黑水虻幼虫平均体长、体重、生长性能及饲料利用率,降低料重比,养殖7 d后幼虫平均体长、体重、获得生物量、生长率、饲料利用率分别比CK高 11.58%、46.69%、47.12%、46.75%、24.10%,料重比降低了19.18%.分别与以未发酵果渣为基础饲料的处理(Ⅰ、Ⅲ)相比,处理Ⅱ和Ⅳ提高了黑水虻预蛹前幼虫平均体长、体重、幼虫生长率和饲料利用率,降低了料重比.黑水虻幼虫肠道菌群聚类良好,处理Ⅰ～Ⅳ黑水虻幼虫肠道中,拟杆菌门的平均相对丰度显著高于CK,而处理Ⅱ～Ⅳ厚壁菌门的平均相对丰度显著低于CK,处理Ⅰ厚壁菌门的平均相对丰度差异低于CK但不显著.与CK比,处理Ⅰ～Ⅳ黑水虻幼虫肠道中,营发酵单胞菌属相对丰度(40.10%以上)显著增加,肠球菌属相对丰度显著降低,摩根氏菌属、放线菌属相对丰度降低但差异不显著,普罗威登斯菌属相对丰度增加但差异不显著.研究表明,处理Ⅳ黑水虻幼虫生长性能和饲料转化性能优于其他处理,发酵果渣处理优于非发酵处理,且不同饲料配方会引起黑水虻幼虫肠道菌群相对丰度的改变.

目的:探讨肠道菌群通过调节性T细胞(Treg)/吲哚胺2,3-双加氧酶-1(IDO1)轴信号通路参与动脉粥样硬化的进展.方法:将C57BL无特定病原体(SPF)级的5周雌性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为普通饲料处理组(NC组)和高脂饮食(含0.2％胆固醇,42％脂肪)处理组(HF组),每组10只.通过主动脉表面油红O染色和苏木精-伊红染色分析主动脉斑块和硬化损伤面积.采用流式细胞术分析脾细胞中CD4+CD25+叉头框蛋白p3(Foxp3)+Treg在CD4+T细胞中的百分比;蛋白免疫印迹法定量动脉吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO),聚合酶链式反应(PCR)进行粪便微生物群分析.结果:与NC组比较,HF组小鼠主动脉斑块和硬化损伤面积增加(P＜0.001),CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T比例和Foxp3 mRNA水平均降低(P＜0.001).与NC组比较,HF组小鼠IDO1含量降低(P＜0.001).小鼠斑块与Treg、IDO1呈负相关(r值分别为-0.87,-0.66,P＜0.01).厚壁菌门与动脉粥样硬化斑块呈正相关(r=0.64,P＜0.01);放线菌与动脉粥样硬化斑块呈负相关(r=-0.74,P＜0.01).厚壁菌门与IDO1呈负相关(r=-0.59,P＜0.05);拟杆菌门与IDO1呈正相关(r=0.67,P＜0.01).厚壁菌门与Treg呈负相关(r=-0.63,P＜0.01);变形菌门与Treg呈正相关(r=0.61,P＜0.01).结论:肠道菌群改变可能通过Treg/IDO1信号通路,参与高脂饮食诱导的动脉粥样硬化进展.

目的:基于肠道微生物群-法尼酯X受体(FXR)轴探讨文王一支笔(BIH)提取物调控胆汁酸代谢而缓解代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MAFLD)的作用机制.方法:将40只C57BL小鼠随机分为正常组、MAFLD模型组、中剂量BIH组和高剂量BIH组.正常组给予普通饲料,其余组给予高脂饲料喂养12周建立MAFLD模型;同时高、中剂量BIH组分别给予0.598和0.299g/kg BIH溶液灌胃,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水.全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;HE、油红O和Masson染色观察肝脏形态、脂肪变性和纤维化程度;ELISA法检测肝组织TC、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,以及血清和回肠胆汁酸含量;Western blot检测回肠组织内FXR和成纤维细胞生长因子15(FGF15)蛋白表达,以及肝组织内FXR、小异二聚体伴侣(SHP)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)蛋白表达;16S rRNA基因测序检测肠道微生物群结构变化及多样性.结果:(1)与正常组相比,MAFLD小鼠血清TC、TG和LDL-C水平均升高,回肠胆汁酸水平升高,肝组织TC、TNF-α和IL-6含量升高(P<0.05或P<0.01),肝细胞内脂质沉积增加,肝组织FXR和SHP蛋白表达增多,CYP7A1蛋白减少(P<0.05或P<0.01),回肠FXR和FGF15蛋白表达增多(P<0.05);与模型组相比,BIH干预可改善上述指标.(2)肠道菌群分析结果显示,与模型组相比,BIH能提高小鼠肠道菌群的丰富度和多样性;在门水平上,提高拟杆菌门与厚壁菌门相对丰度的比值,降低变形菌门和疣微菌门丰度;在属水平上,提高Duncaniella、Muribaculum和Paramuribaculum属的相对丰度,降低螺杆菌属丰度.结论:BIH提取物可改变MAFLD小鼠肠道微生物群结构,抑制肝肠FXR轴,增加肝内CYP7A1表达,促进胆汁酸合成,减少肝内胆固醇聚集,维持胆汁酸代谢平衡,有效减轻肝脏脂肪变性和炎症损伤,从而达到治疗MAFLD的作用.

目的:采用16S rDNA测序技术分析酒精性脂肪肝病(AFLD)发展过程中小鼠肠道菌群的变化,并探讨小鼠AFLD进展的可能机制.方法:将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(35只)和模型组(25只).适应性喂养5d后,对照组小鼠每天喂食Lieber-DeCarli对照流质饲料(TP4030C),模型组小鼠每天喂食含有4%乙醇的Lieber-DeCarli流质饲料(TP4030B),连续30d后,采用苏木精—伊红(HE)染色法观察肝脏病理变化;16S rDNA测序法分析肠道菌群组成结构.结果:与对照组相比,AFLD模型组小鼠肠道菌群的α多样性结果显示其物种丰富度降低(P＜0.05).Beta多样性结果表明两组小鼠肠道菌群结构组成和丰度存在显著差异(P＜0.05).与对照组相比,模型组粪杆菌属(Faecalibaculum)、杜博菌属(Dubosiella)、异杆菌属(Al-lobaculum)、瘤胃球菌属UCG-013(Ruminococcaceae UCG-013)等菌属相对丰度升高,乳酸杆菌属(Lactobacillus)、毛螺菌属(Lachnospiraceae NK4A136 group)等菌属相对丰度降低.模型组小鼠肠道菌群在丙氨酸转移酶、谷胱甘肽水解酶和组蛋白乙酰转移酶通路活性显著增加(P＜0.05).结论:含4%乙醇的Lieber-DeCarli流质饲料成功构建了AFLD C57BL/6小鼠模型,AFLD小鼠肠道菌群的结构和组成均发生变化,酒精可能通过破坏肠道微生物稳态,增加丙氨酸转移酶、谷胱甘肽水解酶和组蛋白乙酰转移酶通路活性加快AFLD的进展.

目的:探究小檗碱（又名：黄连素）对多囊卵巢综合征（PCOS）模型小鼠的作用，同时探究黄连素对肠道菌群及肠道菌群对PCOS的影响。方法:以脱氢表雄酮辅以高脂饲料喂养建立PCOS小鼠模型，并给予黄连素进行干预治疗，实验分为C组（即空白对照）、M组（即PCOS模型小鼠）和T组（即PCOS模型小鼠予黄连素治疗），定时对小鼠监测体重、动情周期，行腹腔葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验；实验结束后，对小鼠肝脏、卵巢及脂肪垫称量湿重，并行HE染色观察，验证是否造模成功及黄连素的效果。同时取粪便样本进行16S rRNA肠道菌群分析。结果:PCOS造模成功，黄连素缓解了T组小鼠的动情周期紊乱，且显著缓解了小鼠的脂肪积聚和糖代谢异常，T组小鼠脂肪垫细胞截面积为（2 858±146）μm 2，显著低于M组［（9 518±347）μm 2］，两组比较，差异有统计学意义（ P<0.001），T组小鼠的血糖显著低于M组（ P<0.05）。M组PCOS模型小鼠与C组相比以及黄连素干预后的T组小鼠与M组相比，肠道菌群组成及结构显著改变，而Alpha多样性在3组间并无显著变化（ P>0.05）。 结论:黄连素可能通过干预肠道菌群的变化缓解PCOS症状。

目的:探讨肠道菌群移植(FMT)对高草酸诱导的SD大鼠肾草酸钙结晶形成的影响。方法:6只雄性豚鼠给予正常豚鼠饲料喂养1个月，而后给予含5%草酸的饲料喂养，收集5%草酸饮食前及第14天的豚鼠粪便，分别记为豚鼠正常饮食(GSC)组和豚鼠高草酸饮食(GOD)组。将24只雄性SD大鼠随机分为正常饮食(SC)组、高草酸饮食(OD)＋磷酸缓冲盐溶液(PBS)灌胃组(OD＋PBS组)、OD＋肠道菌群移植(FMT)组和SC＋FMT组。其中，SC组和SC＋FMT组采用正常大鼠饲料喂养；OD＋PBS组和OD＋FMT组采用含5%草酸的饲料喂养；OD＋FMT组和SC＋FMT组大鼠给予GOD组的豚鼠粪便滤液灌胃，连续灌胃7 d。收集各组大鼠的24 h尿液及粪便。对粪便标本的16SrRNA基因进行测疗，检测大鼠及豚鼠的肠道菌群。采用高效液相色谱法检测大鼠尿草酸含量。对各组大鼠及其肾脏称重，计算肾脏指数。对大鼠肾脏组织行HE染色观察组织学形态变化，行Pizzolato染色检测肾组织内草酸钙结晶沉积情况。结果:与GSC组相比，GOD组肠道中Muribaculaceae科、双歧杆菌科等共11个科细菌相对丰度明显增加。OD＋PBS组较SC组大鼠肠道菌群的微生物多样性降低，OD＋FMT组较OD＋PBS组大鼠肠道菌群的微生物多样性有所恢复。SC＋FMT组大鼠肠道菌群偏离了SC组，与GOD组菌群相似度增加。在OD＋FMT组中，Muribaculaceae科、丹毒丝菌科及双歧杆菌科等共18个科的细菌显著富集，FMT激活了以Muribaculaceae科细菌为代表的肠道微生物网络。与SC组相比，OD＋PBS组大鼠的肾脏指数明显增加(6.12±0.53与7.63±0.67， P<0.05)，而OD＋FMT组较OD＋PBS组肾脏指数显著降低(6.53±0.64与7.63±0.67， P<0.05)。SC组、OD＋PBS组及OD＋FMT组大鼠的尿草酸含量分别为(0.61±0.05)、(0.89±0.04)、(0.72±0.04)μmol/ml。SC组大鼠肾脏中未见草酸钙结晶(0分)，OD＋PBS组中检测到较多的草酸钙结晶[(4.83±0.41)分]，OD＋FMT组草酸钙结晶评分[(3.17±0.75)分]较OD＋PBS组更低( P <0.01)。 结论:FMT激活了大鼠肠道中以Muribaculaceae科细菌为代表的微生物网络，显著降低了OD大鼠的尿草酸排泄及肾脏草酸钙结晶沉积。

目的:以diquat诱导的小鼠氧化应激为模型，研究微生物源性抗氧化剂（MA）对小鼠肝脏氧化应激、内质网应激、细胞凋亡和功能的影响。方法:选择体质量16～18 g的C57BL/6雌性小鼠18只，随机分为3组，每组6只。抗氧化剂组小鼠灌胃MA，对照组和模型组小鼠灌胃等量等渗盐水，饲养22 d后，模型组和抗氧化剂组腹腔注射diquat溶液，对照组小鼠注射等量等渗盐水，处理3h后处死小鼠采集肝组织。肝脏组织制成10%匀浆后，依据试剂盒说明书检测自由基含量、丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶活性、天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）活性，用qRT-PCR检测内质网应激和细胞凋亡相关基因表达情况。肝脏组织制成10%匀浆后，依据试剂盒说明书检测自由基含量、丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶活性、天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）活性，用qRT-PCR检测内质网应激和细胞凋亡相关基因表达情况。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果:过氧化氢在对照组、模型组、抗氧化剂组分别为（8.74±1.38）、（11.44±1.01）、（9.81±0.98）mmol/g，组间比较差异有统计学意义（ F = 7.640， P < 0.05）。对照组、模型组和抗氧化剂组MDA的含量分别为（0.65±0.07）、（0.86±0.18）、（0.70±0.05）nmol/mg，组间比较差异有统计学意义（ F = 5.406， P < 0.05）。模型组AST活性为（146.68±4.29）U/g，显著高于对照组的（125.64±15.69）U/g与抗氧化剂组的（126.57±1.82）U/g， F = 6.192， P < 0.05。实时定量PCR结果显示，与对照组相比，模型组蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和活化转录因子6（ATF6）基因相对表达量显著升高，分别为1.880±0.442和1.800±0.380（ F值分别为7.702、10.815， P值均< 0.05）；与模型组相比，抗氧化剂组PERK和ATF6基因相对表达量显著降低，分别为1.310±0.333、1.180±0.204（ P值均< 0.05）。细胞凋亡相关基因表达结果显示，抗氧化剂组caspase3和caspase8基因相对表达量分别为1.136±0.381、1.593±0.407，与模型组的1.572±0.127和2.843±0.973相比，显著降低（ F值分别为12.800、7.657， P值均< 0.05）。 结论:微生物源性抗氧化剂减弱diquat诱导的小鼠肝脏氧化应激、内质网应激和肝细胞凋亡，改善肝脏功能。

目的 探讨疏肝理脾汤对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠炎症及肠道菌群、Toll样受体4(TLR4)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)的影响.方法 用蛋氨酸-胆碱缺乏饲料喂养4周建立NASH模型.将SD大鼠随机分为空白组(灌胃0.9％NaCl)、模型组(NASH模型,灌胃0.9％NaCl)、实验组(NASH模型,灌胃6.18 g·kg1疏肝理脾汤).用Illumina边合成边测序法检测大鼠肠道微生物群16S rRNA序列,用蛋白质印迹法检测Tim-3和TLR4蛋白的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-10水平.结果 用药4周后,空白组、模型组和实验组的拟杆菌门相对丰度分别为(47.96±10.52)％、(42.90±15.01)％和(57.15±10.99)％,厚壁菌门相对丰度分别为(49.27±9.99)％、(53.06±11.47)％和(39.99±11.88)％,Tim-3 蛋白相对表达水平分别为 1.03±0.07、0.24±0.06 和1.57±0.11,TLR4蛋白相对表达水平分别为1.04±0.11、3.23±0.33和0.94±0.27,TNF-α 水平分别为(403.03±25.25)、(576.87±60.29)和(385.16±37.67)pg·mL-1,IL-6 水平分别为(125.35±14.07)、(189.75±34.30)和(113.71±18.35)pg·mL-1,IL-10 水平分别为(123.20±15.96)、(66.71±11.94)和(119.54±10.57)pg·mL-1.实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 疏肝理脾汤可能通过影响肠道菌群及TLR4、Tim-3蛋白表达来调控炎症因子,从而改善NASH.

在医学论文的描述中,凡涉及实验动物者,在描述时均应符合以下要求:①品种、品系描述清楚;②强调来源;③遗传背景;④微生物学质量;⑤明确体重;⑥明确等级;⑦明确饲养环境和实验环境;⑧明确性别;⑨有质量合格证;⑩有对饲养的描述(如饲料类型、营养水平、照明方式、温度、湿度要求);?所有动物数量准确;?详细描述动物的健康状况;?对实验动物的处理方式有单独清楚的交代;?全部有对照,部分可采用双因素方差分析.