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马尾松针提取物通过核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件通路对人毛乳头细胞氧化应激损伤保护作用的研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨马尾松针提取物(PMNE)对人毛乳头细胞(HDPC)抗氧化应激的保护作用及机制。方法:以HDPC为研究对象,分别采用0(对照组)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mmol/L H 2O 2处理HDPC,建立体外HDPC氧化应激的最佳条件;在HDPC中转染核因子E2相关因子2(Nrf2)干扰片段siRNA1、siRNA2、siRNA3或过表达质粒pCMV6-XL5-Nrf2,实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测Nrf2 mRNA及蛋白的表达;H 2O 2条件下检测转染后各组细胞活性及凋亡率。常规培养HDPC并分组处理,对照组:正常培养,不予其他处理;双氢睾酮组:加入0.03 μg/ml双氢睾酮;原花青素组:加入0.03 μg/ml双氢睾酮和6.00 μg/ml原花青素B2处理;不同浓度PMNE组:加入0.03 μg/ml双氢睾酮培养液,同时分别给予1、5、25、100 μg/ml PMNE处理;分别检测各组细胞活性及凋亡率、细胞内活性氧(ROS)相对荧光强度和丙二醛(MDA)含量,Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、转化生长因子(TGF)-β1、Sma和Mad相关蛋白2/3(Smad2/3)、p-Smad2/3的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:HDPC细胞活力为75% ~ 85%时,选择0.4 mmol/L H 2O 2作为体外HDPC氧化应激最适处理浓度。Nrf2-siRNA1、Nrf2-siRNA2、Nrf2-siRNA3组Nrf2 mRNA和蛋白表达均显著低于空白组和对照组(均 P < 0.05),细胞凋亡率(12.50% ± 0.05%、26.07% ± 0.05%、58.44% ± 1.03%)均显著高于空白组(10.38% ± 0.64%)和对照组(13.05% ± 0.12%),均 P < 0.05。Nrf2-siRNA2组的Nrf2蛋白表达量最低,选择Nrf2-siRNA2为最佳干扰片段进行后续实验。Nrf2过表达组Nrf2 mRNA和蛋白表达均显著高于空白组和对照组(均 P < 0.05),其细胞凋亡率明显低于空白组和对照组(均 P < 0.05)。0.4 mmol/L H 2O 2处理条件下,Nrf2过表达组细胞凋亡率显著低于过表达空载组( t = 3.66, P < 0.001),细胞活性高于过表达空载组( t = 40.40, P < 0.001);Nrf2-siRNA2组细胞凋亡率显著高于对照组( t = 13.13, P < 0.001),而细胞活性显著低于对照组( t = 67.37, P < 0.001)。PMNE处理实验中,原花青素组和不同浓度PMNE组细胞活性均显著高于双氢睾酮组(均 P < 0.01),而细胞凋亡率显著低于双氢睾酮组(均 P < 0.01);原花青素和不同浓度PMNE均能显著抑制双氢睾酮诱导的HDPC细胞内ROS和MDA的过度表达(均 P < 0.01);原花青素组和5、25、100 μg/ml PMNE组Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达显著高于双氢睾酮组(均 P < 0.05),原花青素组和25、100 μg/ml PMNE组Keap1、TGF-β1蛋白表达及Smad2/3磷酸化水平显著低于双氢睾酮组(均 P < 0.05)。 结论:Nrf2在抵抗HDPC的氧化应激损伤中起重要作用,PMNE可能通过激活Nrf2抗氧化反应元件通路而对HDPC产生明显的保护作用。
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编辑人员丨1周前
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马尾松不同部位挥发物对松墨天牛触角电位和行为反应的影响
编辑人员丨2024/6/8
[目的]探究马尾松健康植株不同位置挥发性物质,比较其不同部位的挥发物的种类差异及含量,分析松墨天牛成虫对健康马尾松各部位挥发物的触角电位反应和嗅觉反应,为开展松墨天牛的行为调控技术提供依据.[方法]采用静态顶空法和气相色谱-质谱联用技术分析了马尾松松针、1 cm枝条、5 cm枝条、20 cm树干、30 cm树干、松油脂6个部位的挥发物,并对松墨天牛雌雄成虫进行触角电位测定和行为反应观测.[结果]6个部位的挥发物提取物中,共检测出36种挥发性物质,各部位挥发物种类相近,相对含量差异较大,但其主要挥发物均为萜烯类物质,主要包括月桂烯、蒎烯、左旋-beta-蒎烯、莰烯等.在触角电位试验中,5 cm枝条挥发物提取物的触角电位值最高,松油脂挥发物提取物的触角电位值最高;在行为反应试验中,各部位挥发物对松墨天牛成虫均有一定的引诱作用,其中雌成虫对5 cm枝条挥发物提取物的趋向性最高,雄成虫对30 cm树干和松油脂挥发物提取物的趋向性最高.[结论]健康状态下,马尾松5 cm枝条及30 cm树干和松油脂中萜烯类挥发物制成的植物源引诱剂对松墨天牛两性成虫具有更好的引诱作用,这将为提高现有的诱捕剂效果提供参考,同时为松墨天牛虫害防治提供科学依据.
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编辑人员丨2024/6/8
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马尾松针提取物对镉毒16HBE细胞保护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究马尾松松针提取液对氯化镉(CdCl2)致16HBE细胞毒性的保护作用.方法 用萃取法提取马尾松松针乙醇提取物(PMNE),分别用1、100和500 μg/mL的PMNE(低、中、高浓度组)预处理16HBE细胞6h,随后用25 μmol/L CdCl2毒染至48 h,同时设阴性对照组(正常培养16HBE细胞)及空白对照组(无细胞组),用CCK8法检测细胞相对生存率,硫代巴比妥酸(TBA)法检测各组细胞内丙二醛(MDA)含量,qPCR法检测各组细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax相对表达量.结果 与阴性对照组相比,CdC12单独作用组细胞相对生存率下降(P<0.05),细胞内MDA表达量升高(P<0.05);低、中、高浓度PMNE预处理组细胞与CdCl2单独处理组相比,细胞相对生存率均升高(P<0.05),MDA含量均降低(P<0.05),且浓度越高细胞相对生存率越高(P<0.05),MDA含量越低(P<0.05).与CdCl2单独作用组相比,低、中、高浓度PMNE预处理组抑凋亡基因Bcl-2相对表达量均上调(P<0.05),促凋亡基因Bax相对表达量均下调(P<0.05),且浓度越高Bcl-2相对表达量越高(P<0.05).结论 PMNE对CdCl2所致的细胞毒性有一定程度的保护作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑水缬草提取物及其活性成分对肝脏药物代谢酶活性的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:评价黑水缬草提取物及其活性成分对人肝微粒体6种细胞色素P450(CYP450)主要亚型酶活性的影响.方法:分别以香豆素、丁氨苯丙酮、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬、睾酮作为CYP2A6,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4的探针底物,以其羟基化或去甲基化的专一性代谢产物7-羟基香豆素,羟基丁氨苯丙酮,4-羟基甲苯磺丁脲,5-羟基奥美拉唑,右菲烷,6β-羟基睾酮作为酶活性的分析指标,建立Cocktail探针底物人肝微粒体体外模型,运用该方法评价黑水缬草提取物及其活性成分对人肝微粒体酶的影响.结果:黑水缬草提取物对CYP2B6,CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4共4种亚型酶均有不同程度的抑制作用,半抑制浓度(IC50)分别为87.49,1.73,68.29,2.80 mg·L-1;在9个木脂素成分中,左旋马尾松树脂醇-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对CYP2A6具有中等的抑制作用,IC50=8.51 μmol·L-1;8,8'-二羟基-松脂素-4,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对CYP2D6具有中等抑制作用,IC50=8.73μmol·L-1;(+)-梣皮树脂醇-4,4'-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷对CYP2B6和CYP2C9具有中等抑制作用,IC50分别为5.41,8.20μmol·L-1.结论:黑水缬草提取物及其活性成分对肝脏CYP450酶存在抑制作用,在进行新药临床研究时,需要对联合用药可能会带来药物相互作用的风险进行充分评估.
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编辑人员丨2023/8/5
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马尾松针提取物调控Nrf2-ARE通路治疗雄激素性脱发的研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察马尾松针提取物对双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)诱导的雄激素性脱发(Androgenetic alopecia,AGA)模型小鼠的干预效应,并通过核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路探讨马尾松针提取物促毛发生长的作用机制.方法 采用DHT皮下注射建立AGA小鼠模型,48只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组,DHT组,原花青素组,马尾松针提取物(松针)低、中、高剂量组,每组8只.空白组不予任何处理,DHT组仅皮下注射DHT 30 mg·d-1,原花青素组皮下注射DHT并灌服原花青素B25 mg·kg-1,松针低、中、高剂量组皮下注射DHT,同时分别灌服马尾松针提取物4、8、12 mg·kg-1.每组均给药4周,每周拍照并记录毛发生长情况.d28后取其背部圆形皮片,刮取毛发称质量,行HE染色.计算生长期、休止期毛囊数量并计算二者比值.取部分皮肤组织,检测ROS和MDA含量.qPCR和Western blot法检测Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1、TGF-β1 mRNA与蛋白的表达水平.结果 马尾松针提取物呈剂量依赖性地促进AGA小鼠的毛发生长,松针高剂量组与原花青素组毛发质量以及生长期/休止期毛囊比值均无显著性差异.马尾松针提取物能够降低组织内ROS和MDA含量,呈剂量依赖性地促进Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA与蛋白的表达,抑制Keap1、TGF-β1 mRNA与蛋白的表达.结论 马尾松针提取物可能通过激活Nrf2-ARE信号通路,改善氧化应激水平,从而促进AGA小鼠毛发的生长.
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编辑人员丨2023/8/5
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马尾松松针提取物调节JNK3/caspase-3信号转导减轻大鼠脑缺血再灌注后氧化应激损伤
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨马尾松松针提取物(PNE)对大鼠脑缺血再灌注后氧化应激损伤的保护作用.方法:将SD雄性大鼠随机分为手术对照组、模型对照组、依达拉奉组、PNE小剂量组(200 mg/kg)、PNE中剂量组(400 mg/kg)、PNE大剂量组(800 mg/kg),于造模前连续7 d及造模后6 h分别灌胃给药.其中,手术对照组和模型对照组灌胃给予等渗氯化钠溶液,依达拉奉组灌胃给予等渗氯化钠溶液的同时腹腔注射依达拉奉3 mg/kg,PNE各组灌胃给予各剂量PNE.通过大脑中动脉阻塞法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,于再灌注24 h后测定各组大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积.采用苏木素-伊红染色观察大脑皮层及海马组织结构病理变化并统计正常神经细胞数;TUNEL法检测大脑皮层神经细胞凋亡率;试剂盒检测缺血侧脑组织一氧化氮、丙二醛含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白质印迹法检测大脑皮层c-Jun氨基末端激酶(JNK)3、磷酸化JNK3、B淋巴细胞瘤蛋白(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C、胱天蛋白酶(caspase)-3的蛋白表达水平.结果:与模型对照组比较,PNE各剂量组行为学评分、脑组织含水量及脑梗死体积均显著降低(均P<0.05),大脑皮层及海马CA1区组织病理性损伤显著减轻,缺血侧皮层及海马CA1区中正常神经细胞数增加(均P<0.05),以PNE中剂量组效果最好.与模型对照组比较,PNE中剂量组皮层神经细胞凋亡率显著减小,大脑皮层组织中一氧化氮、丙二醛含量显著减少,SOD活性显著升高,磷酸化JNK3/JNK3比值、细胞色素C、caspase-3蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(均P<0.05).结论:PNE对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,这种保护作用可能与清除一氧化氮和丙二醛,抑制氧化应激介导的JNK3/caspase-3信号转导来抑制神经细胞凋亡有关.
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编辑人员丨2023/8/5
