目的 考察谷红注射液对体外及体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶的影响.方法 人肝微粒体"Cocktail"探针底物法进行体外酶抑制实验,检测7种探针底物代谢产物的相对生成量,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50),评估谷红注射液(0.05％～10％)对7种CYP450亚酶抑制作用.人原代肝细胞体系进行体外酶诱导实验,分别检测酶活性及其mRNA表达水平,评估谷红注射液对CYP450酶诱导作用.采用整体动物法进行体内酶活性实验,检测7种特异性探针底物血浆药物浓度,评估谷红注射液(0.9、3.6mL/kg)对大鼠7种CYP450亚酶活性的影响.结果 谷红注射液对人肝微粒体 CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6 和 CYP3A4 的 IC50 值分别为 1.98％、7.95％、2.85％、5.39％、4.92％、7.76％和3.41％,均大于0.5％(理论临床最大血药浓度值);人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达增加＞2倍,且前两者呈浓度相关性增加,对CYP1A2酶活性高于阳性对照40％.谷红注射液在超临床剂量下使大鼠CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19和CYP3A4酶的体内探针底物茶碱、安非他酮、奥美拉唑和咪达唑仑的总清除率明显增加、系统暴露降低.结论 谷红注射液在临床剂量下对7种CYP450酶无显著抑制作用,但不排除高剂量下对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19和CYP3A4的诱导效应,建议开展使用敏感探针底物的临床试验以进一步确认潜在的药物相互作用.

目的 探究泽泻汤及其拆方对高脂血症模型小鼠细胞色素P450(CYP450)酶亚型的影响.方法 通过给KM小鼠饲喂高脂饲料建立高脂血症模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、泽泻汤组、泽泻组和白术组,并设置空白组,每组 10 只.泽泻汤组、泽泻组、白术组小鼠每天灌胃给药(给药剂量分别为 12.0、8.6、3.4 g·kg-1)持续28 d,空白组、模型组均给予等体积生理盐水.采用"Cocktail"探针药物法和实时荧光定量PCR技术检测CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP3A4 酶活性及基因表达量.结果 与模型组相比,泽泻汤组、泽泻组和白术组CYP3A4 酶活性升高,CYP2E1 酶活性降低,泽泻汤组CYP1A2 酶活性降低.与模型组相比,泽泻汤组、泽泻组和白术组回调了CYP1A2、CYP3A4 mRNA表达水平,对CYP2C9 无明显作用,泽泻汤组降低了CYP2E1 mRNA表达水平.结论 泽泻汤及其拆方能够回调高脂血症引起的CYP3A4 酶活性及基因表达量的改变,而泽泻在泽泻汤中起主导作用.

目的 考察复方脑肽节苷脂注射液对细胞色素P450(CYP)1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4活性的影响.方法 将大鼠随机分为对照组和实验组,实验组每日尾静脉注射复方脑肽节苷脂注射液1.8 mL·kg-1,对照组给予0.9％NaCl,共10 d.最后一次给药30 min后,2组均灌胃Cocktail探针溶液(茶碱、安非他酮、瑞格列奈、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔、咪达唑仑).在不同时间点采血,用LC-MS检测各探针的血药浓度,计算7个探针药的药代动力学参数,评价相应CYP450酶亚型的体内代谢活性.结果 对照组瑞格列奈的 AUC0-t为(942.01±234.99)ng·h·mL-1,AUC0-∞为(970.62±232.35)ng·h·mL-1,清除率(CL)为(328.28±83.20)L·h·kg-1,而实验组瑞格列奈的 AUC0-t 为(1 740.40±720.71)ng·h·mL-1,AUC0-∞为(1 757.03±714.44)ng·h·mL-1,CL 为(202.53±81.49)L·h·kg-1,与对照组相比,瑞格列奈的AUC0-t、AUC0-∞分别显著增加1.85倍、1.81倍,CL显著降低了 38.31％,其他探针药物的药代动力学参数差异无统计学意义.结论 复方脑肽节苷脂注射液可抑制CYP2C8的活性,而对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6 和 CYP3A4 无显著影响.

目的 采用Cocktail混合探针药物法,探究聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)对大鼠体内Cyp450同工酶活性的影响,为提高临床低生物利用度药物的疗效提供新的途径,也为药物研发领域研制新型制剂选择合适的辅料提供理论依据.方法 选用非那西丁、奥美拉唑、安非他酮和咪达唑仑分别作为大鼠体内4种Cyp450酶(Cyp1a2、Cyp2c11、Cyp2b1、Cyp3a1)的探针药物.SD雄性大鼠连续尾静脉注射吐温80溶液14d,第14日给药30 min后,尾静脉注射混合探针药物后于各时间点取血.采用LC-MS/MS法测定试验组和对照组混合探针药物的血药浓度,用DAS 2.0软件拟合药代动力学参数.结果 吐温80连续尾静脉注射2周后,与空白对照组相比,非那西丁、奥美拉唑、安非他酮的代谢明显减慢,而咪达唑仑的代谢无明显差异.结论 吐温80对大鼠体内Cyp2c11、Cyp2b1、Cyp1a2酶有明显抑制作用,而对大鼠体内Cyp3a1无明显影响.因此,在临床上吐温80与CYP1 A2、CYP2B6、CYP2C19酶相关的底物合用时,应注意给药剂量,防止药物在体内的血药浓度过高从而导致不良反应.

目的 采用液质联用法结合特异性探针技术,研究氢溴酸槟榔碱(AH)对人肝微粒体(HLM)中细胞色素P450(CYP450)亚型酶的体外影响.方法 将CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B6的探针底物分别在0~160μmol/L AH的HLM中温孵,高效液相法测定CYP1A2、2E1、3A4、2C9的酶活性;高效液相色谱-串联质谱仪测定CYP2D6、2B6的酶活性.结果 AH对HLM中CYP2D6、2B6、2E1、2C9的酶活性有轻微抑制作用,且随AH浓度的升高而增强.当AH为160μmol/L时,对CYP2D6、2B6、2E1、2C9酶活性的抑制率分别为36.2%、38.3%、35.0%和35.4%.结论 槟榔嗜好者使用CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B66个CYP450酶的底物药物时,其代谢相互作用的风险仍不可忽视.

目的:全面系统地探讨左归饮对大鼠体内3种细胞色素P450酶不同亚型体内代谢活性的影响,为临床安全、合理用药提供基础研究.方法:采用Cocktail探针药物法,结合LC-MS/MS检测技术,选择咪达唑仑、氢溴酸右美沙芬、非那西丁作为探针底物,研究左归饮对大鼠肝脏细胞色素P450不同亚型Cyp3a1、Cyp2d2、Cyp1a2活性的影响.结果:建立的LC-MS/MS方法,可以同时测定3种探针药物非那西丁、氢溴酸右美沙芬及咪达唑仑在大鼠体内的血药浓度.各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便.同空白组相比,实验组咪达唑仑和氢溴酸右美沙芬的主要药动学参数T1、V、CL、AUC(0～t)和AUC(0～∞)有显著性差异,而非那西丁无显著性差异.结论:左归饮在大鼠体内对Cyp3a1酶和Cyp2d2酶活性有诱导作用,对Cyp1a2无显著影响.

目的 采用Cocktail探针药物法评价左归饮对大鼠体内细胞色素氧化酶P450亚型酶Cyp2b1、Cyp2c11和Cyp2c7代谢活性的影响,为左归饮的开发应用提供实验依据.方法 选用阿莫地喹、安非他酮、奥美拉唑分别作为Cyp2b1、Cyp2c11和Cyp2c7的探针底物,制备成Cocktail混合溶液.将SD雄性大鼠分为实验组和空白组,实验组每日清晨灌服高、中、低剂量左归饮溶液,空白组每日清晨灌服空白溶剂,均连续给药14 d.第14天清晨尾静脉注射混合探针药物后于各时间点测定大鼠体内探针药物的血药浓度.经DAS 2.0软件计算探针药物的药物代谢动力学参数,评价左归饮对大鼠体内代谢酶活性的影响.采用LC-MS/MS法同时测定3种探针药物的血药浓度.结果 与空白组比较,高、中、低剂量左归饮连续给药对Cyp2b1、Cyp2c7和Cyp2c11酶活性的影响均无统计学意义(P>0.05).结论 左归饮配伍其他药物使用对代谢酶无明显影响,左归饮可在临床上广泛地配伍应用.

目的 建立同时测定细胞色素P450(CYP450)亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并利用该方法研究口服钩藤总生物碱(TAU)对上述4种亚酶活性的影响.方法 以咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和氨苯砜分别作为CYP1 A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的探针底物,以卡马西平作为内标物质,建立了乙腈-0.5％甲酸的梯度洗脱法同时测定4种探针药物的血药浓度,并对该方法进行方法学考察.雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予空白溶剂(0.5％羧甲基纤维素)以及40、80 mg/kg的TAU,连续灌胃给药10 d,在第11天给予Cocktail探针药液后于不同的时间点采集大鼠血样.利用HPLC测定大鼠血浆中该4种探针药物浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.0软件进行药动学分析.结果 与空白对照组比较,80 mg/kg的TAU给药组灌胃10 d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞和t1/2z均显著减小,CLz/F均显著增大;甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞均显著减小,CLz/F显著增大;氯唑沙宗的AUC0t、AUC0-∞、MRT0-tMRT0-∞和t1/2z减小,CLz/F增大,但差异无统计学意义;氨苯砜的药代学参数基本无变化.40 mg/kg的TAU给药组与空白组比较,该4种探针底物的药动学参数基本无变化.结论 本方法准确,灵敏度较高,适用于同时评价药物对CYP1A2、CYP2C9/11、CYP2E1和CYP3A4该4种亚酶的影响.80 mg/kg的TAU给药组给药10 d后对大鼠肝药酶CYP1 A2、CYP2C9和CYP2E1均存在不同程度的诱导作用,对CYP3A4的活性基本无影响,而40 mg/kg的TAU给药组对以上4种亚酶基本无影响.提示TAU在临床使用过程中,尤其是与其他药物联用时,应注意调整用药剂量,防止药物相互作用可能造成的不良反应;本文为临床合理配伍使用该药提供参考.

目的 以地西泮为内标,使用超高效液相色谱-串联质谱仪 (UPLC-MS/MS) 同时测定大鼠血浆中5种探针药物 (安非他酮、美托洛尔、咪达唑仑、非那西丁和甲苯磺丁脲),这5种探针药物分别是细胞色素P450同工酶CYP2D6、CYP3A4、CYP1A2、CYP2B6、和CYP2C9底物.方法 血浆样品用乙腈沉淀法去除蛋白,色谱分离采用UPLCBEHC18 (2.1 mm×50 mm,1.7μm) 柱,流动相为乙腈-水 (含0.1％甲酸) 梯度洗脱,采用电喷雾离子化,MRM多反应监测模式进行定量.结果 日间精密度和日内精密度＜12％,准确度为90.3％～111.4％,提取回收率为78.6％～98.8％,基质效应为93.8％～109.5％,血浆标准曲线在1 ng/ml2 000 ng/ml内呈良好线性关系,相关系数r≥0.995.结论 该方法快速、灵敏,并成功应用到拉帕替尼对大鼠CYP450酶活性影响研究,表明拉帕替尼对大鼠CYP2B6、CYP2D6、CYP3A4、CYP1A2酶都有不同程度的诱导作用.

目的 用Cocktail探针药物法评估敌敌畏对大鼠CYP450酶代谢活性的影响.方法 将大鼠随机分为敌敌畏组和对照组.敌敌畏组给予腹腔注射12.5 mg/kg敌敌畏,对照组给予等体积生理盐水.然后灌胃给予5种探针药物 (安非他酮、美托洛尔、非那西丁、睾酮和甲苯磺丁脲),用超高效液相色谱串联质谱法测定血浆探针浓度;同时分离肝脏,用PCR法测定5种亚型酶mRNA的表达量.结果 敌敌畏组CYP1A2、CYP2D1和CYP3A2的AUC明显高于对照组,差异有统计学意义 (P＜0.05),而对CYP2B1和CYP2C11的药代动力学无显著影响;CYP2D1和CYP3A2的mRNA表达水平均显著降低 (P＜0.05),CYP1A2的mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义 (P＜0.05),而CYP2C11和CYP2B1的mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 结合PCR结果,腹腔注射敌敌畏可以抑制大鼠CYP2D1和CYP3A2的酶活性.