目的 探讨miR-15a-5p调控Wnt信号通路对PQ致肺纤维化的影响及分子机制.方法 构建PQ诱导的16HBE细胞模型,采用高通量miRNA芯片技术和RT-qPCR筛选表达差异明显的miR-15a-5p进行实验.实验分组为:NC组(对照组):无特殊处理;PQ组:50 μmol/L PQ处理细胞72 h;miR-15a-5p组:转染miR-15a-5p过表达慢病毒的16HBE稳转株;miR-15a-5p+PQ组:50 μmol/L PQ处理稳转株细胞72 h.RT-qPCR和Western blot检测Wnt通路相关基因Wnt3 α和β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA,上皮细胞标记基因Occludin和CK18表达情况.构建PQ诱导的肺纤维化小鼠模型,采用Western blot、HE染色和免疫组织化学检测蛋白表达及肺组织损伤情况.数据以均数±标准差((x)±s)表示,采用独立样本t检验分析两组间数据.结果 细胞损伤模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA表达显著上调(P＜0.05),上皮细胞标记基因Occludin和CK18显著下调(P＜0.05),过表达miR-15a-5p可靶向抑制Wnt3α表达并缓解PQ诱导的EMT进程.动物模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA蛋白水平显著升高(P＜0.01),肺组织结构紊乱并发生纤维化,过表达miR-15a-5p可抑制Wnt3 α蛋白表达水平(P＜0.05)且改善肺组织损伤.结论 miR-15a-5p可通过调控Wnt3 α/β-catenin信号通路改善PQ导致的肺损伤,从而抑制肺纤维化的发生发展.

目的:探索碳黑纳米颗粒（CBNPs）对人支气管上皮细胞（16HBE细胞）的毒性效应，并根据全转录组高通量测序对差异表达的环状RNA进行筛选与鉴定，为CBNPs暴露的生物标志物研发与其在表观遗传毒理学的应用提供依据。方法:于2020年6月，用20、40和80 μg/ml浓度的CBNPs对16 HBE细胞进行染毒处理，以不加任何干预的16HBE细胞作为对照组，通过CCK8与乳酸脱氢酶（LDH）实验检测CBNPs细胞毒性。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及ELISA法检测各浓度CBNPs染毒72 h后白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-8（IL-8）mRNA及蛋白水平改变，Western blot检测核因子-κB（NF-κB）相关炎性蛋白[Toll样受体4（TLR4）、磷酸化核因子-κB（P-NF-κB）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）]的表达水平；根据高通量测序结果筛选并通过qRT-PCR鉴定差异表达的circRNA，选择稳定差异表达且与NF-κB通路关联性最强的circRNA进行环状性能鉴定。结果:与对照组比较，40、80 μg/ml CBNPs暴露72 h后16HBE细胞细胞活力明显下降，20、40、80 μg/ml CBNPs暴露72 h后16HBE细胞LDH释放量明显上升（ P<0.05）。与对照组比较，不同浓度CBNPs暴露72 h后16HBE细胞IL-6、IL-8 mRNA表达水平均增加，IL-6、IL-8蛋白水平均增高，TLR4、P-NF-κB、ASC、Caspase-1蛋白水平均明显上调，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，共有492个差异性表达的环状RNA（|log 2 FC|>1），在验证出的5个差异表达（ P<0.05）的环状RNA中，选择circ_002642作为后续环状RNA研究对象，80 μg/ml CBNPs暴露72 h后16HB细胞的circ_002642明显高表达（ P<0.05）。 结论:CBNPs可引起16HBE细胞炎症反应并诱导炎症反应环状RNA的差异性表达。

目的:探讨人偏肺病毒(human metapneumovirus，hMPV)感染后辛伐他汀是否可以抑制病毒复制。方法:体外试验，hMPV感染16HBE细胞(人支气管上皮样细胞)后用辛伐他汀试剂处理，qPCR和Western blot检测病毒滴度和自噬的强弱以及相关通路表达水平；体内试验，利用辛伐他汀灌胃处理被hMPV感染的BALB/c小鼠，肺组织切片观察病理情况，提取肺组织蛋白和RNA检测病毒载量的变化、自噬发生情况以及相关通路的表达。结果:体外试验，辛伐他汀干预组病毒滴度降低，自噬水平高于病毒组；辛伐他汀干预组AKT/mTOR通路被抑制，使用通路特异性抑制剂雷帕霉素处理后进一步验证了通路的准确性。体内试验，辛伐他汀干预组病毒滴度低于病毒组，但自噬表达水平两组无明显差异，辛伐他汀干预组AKT/mTOR通路下调；HE染色病毒组病理改变明显，辛伐他汀干预后病理情况改善。结论:辛伐他汀在人偏肺病毒感染后可以抑制其复制，该过程与AKT/mTOR通路诱导的自噬反应相关。

目的:探讨 K-ras基因对PM 2.5染毒人支气管上皮（HBE）细胞部分癌基因和抑癌基因表达的影响。 方法:于2019年9月，根据 K-ras基因mRNA序列，设计合成干扰序列，转染HBE细胞构建 K-ras基因沉默细胞。用10、50 μg/ml PM 2.5混悬液及10 μmol/L Cr 6+分别染毒HBE细胞和 K-ras基因沉默细胞，实时荧光定量PCR检测 c-myc、 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1、 p16、 p53基因的mRNA表达水平，Western blot检测c-myc和p53蛋白表达水平。 结果:K-ras基因沉默细胞中 K-ras基因mRNA表达水平下降（80.5%±3.6%），K-ras蛋白表达水平下降（58.9%±4.7%）（ P<0.01）。各浓度PM 2.5染毒HBE细胞组、 K-ras沉默细胞组及10 μmol/L Cr 6+染毒HBE细胞组、 K-ras沉默细胞组 c-myc、 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1基因mRNA表达水平均高于未染毒相应细胞对照组， p16和 p53基因mRNA表达水平低于未染毒相应细胞对照组（ P<0.01）；10 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组 c-myc、 c-fos、 p16基因mRNA表达水平低于10 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组， p53基因mRNA表达水平高于10 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组（ P<0.01）；50 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1、 p16和 p53基因mRNA表达水平均低于50 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组（ P<0.01）。50 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒HBE细胞组，p53蛋白表达水平低于未染毒HBE细胞组（ P<0.05）；50 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒 K-ras沉默细胞组（ P<0.05）。 结论:PM 2.5可引起HBE细胞癌基因表达升高， K-ras基因沉默能抑制PM 2.5诱导HBE细胞癌基因的表达。

目的:本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16，CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine, m 6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达，以及在细胞中的定位。 方法:病毒分别以感染复数(MOI)＝0.1感染16HBE和10 7 CCID 50/ml感染小鼠，Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化，免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。 结果:研究结果发现，随着CVA16病毒感染时间的增加，m 6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调，在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化；病毒感染后，m 6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布，甚至发生降解。 结论:CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m 6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m 6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。

目的:探讨微小核糖核酸-589-5p(miR-589-5p)对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:喉癌细胞系(TU177、TU686和AMC-HN-8)及人正常支气管上皮细胞(16HBE)购自美国典型培养物保藏中心。将miR-NC、miR-589-5p、si-NC和si-FGD4转染至TU686细胞(分别标记为miR-NC组、miR-589-5p组、si-NC组和si-FGD4组)；miR-589-5p与pcDNA、miR-589-5p与pcDNA-FGD4共转染至TU686细胞(分别标记为miR-589-5p+pcDNA组和miR-589-5p+pcDNA-FGD4组)。溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-589-5p和FYVE、RhoGEF和PH域包含4(FYVE，RhoGEF And PH domain containing 4，FGD4)基因信使核糖核酸(mRNA)表达水平；蛋白质印迹法检测FGD4、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、p21、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)蛋白表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。 结果:miR-589-5p组喉癌细胞凋亡率[(31.77±3.26)%比(18.82±1.27)%、miR-589-5p(0.74±0.06比0.31±0.02)、p21(0.78±0.05比0.37±0.02)和bax(0.68±0.04比0.31±0.03)表达水平显著高于miR-NC组，细胞活性(0.47±0.03比0.79±0.06)、Cyclin D1(0.25±0.02比0.66±0.04)及bcl-2(0.18±0.02比0.59±0.03)表达水平显著低于miR-NC组，差异有统计学意义( t＝18.891、8.276、12.452、21.439、11.766、19.231、10.545， P<0.05)。转染miR-589-5p组喉癌细胞FGD4基因mRNA(0.41±0.03比0.72±0.05)及蛋白表达(0.25±0.02比0.45±0.03)显著低于miR-NC组细胞，差异有统计学意义( t＝21.133、15.509， P<0.05)；转染anti-miR-589-5p组喉癌细胞FGD4基因mRNA(0.81±0.07比0.56±0.05)及蛋白表达(0.51±0.04比0.32±0.03)显著高于anti-miR-NC组细胞，差异有统计学意义( t＝15.024、20.235， P<0.05)。miR-589-5p+pcDNA-FGD4组细胞活性(0.79±0.06比0.62±0.04)、FGD4(0.68±0.04比0.31±0.03)、Cyclin D1(0.66±0.04比0.28±0.03)和bcl-2(0.61±0.04比0.34±0.03)表达水平显著高于miR-589-5p+pcDNA组细胞，细胞凋亡率[(20.17±2.44)%比(33.14±3.02)%]、p21(0.41±0.03比0.67±0.5)和bax(0.38±0.06比0.59±0.04)表达水平显著低于miR-589-5p+pcDNA组细胞，差异有统计学意义( t＝9.465、15.133、12.307、11.731、18.235、15.133、21.347， P<0.05)。 结论:miR-589-5p通过下调FGD4基因表达调控喉癌细胞的增殖和凋亡。

目的:探讨烟曲霉提取物(AFE)对人支气管上皮细胞(16HBE)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其可能的信号转导通路。方法:本研究为实验研究。将16HBE分为4组：正常溶剂对照组、AFE处理组、AFE+选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)作用组和AFE+MAPK激酶抑制剂(PD98059)作用组。用免疫荧光、免疫组织化学、RT-PCR、Western blot及ELISA等方法测定EGFR、ERK1/2、磷酸化EGFR、磷酸化ERK1/2及MUC5AC的表达。结果:8~24 mg/L AFE与16HBE共孵育24 h，各组细胞EGFR相对灰度值分别为0.4±0.1、1.0±0.4、1.3±0.3、1.8±0.8，ERK1/2相对灰度值分别为1.2±0.4、2.4±0.5、3.2±0.7、4.3±0.8，可剂量依赖性上调EGFR和ERK1/2表达；16 mg/L AFE与16HBE共孵育1 h，磷酸化EGFR的相对灰度值为1.2±0.2，磷酸化ERK1/2的相对灰度值为2.23±0.50，可诱导EGFR和ERK1/2磷酸化；16HBE与10 μmol/L的AG1478作用可抑制AFE诱导的EGFR和ERK1/2的磷酸化，与30 μmol/L的MAPK激酶抑制剂PD98059作用可抑制ERK1/2的磷酸化，而不影响EGFR的磷酸化。16 mg/L的AFE可上调16HBE MUC5AC的表达，MUC5AC mRNA光密度比值为2.2±0.2，与AG1478或PD98059作用可抑制AFE诱导MUC5AC表达。结论:烟曲霉可上调16HBE细胞MUC5AC的表达，激活EGFR-ERK1/2信号通路是烟曲霉上调16HBE细胞MUC5AC的表达机制之一。

目的:探讨神经激肽1受体(neurokinin 1 receptor，NK-1R)拮抗剂WIN 62，577是否对白细胞介素(interleukin，IL)-13诱导的支气管上皮细胞氧化应激损伤有保护作用。方法:培养人支气管上皮细胞(16HBE)，分为4组：对照组，IL-13组，IL-13＋SP组[IL-13＋感觉神经肽P物质(SP)]，IL-13＋WIN 62，577组。IL-13组给予IL-13(25 ng/ml)处理48 h，48 h后IL-13＋SP组给予感觉神经肽SP(10 nmol/L)处理1 h，IL-13＋WIN 62，577组给予WIN 62，577 (10 nmol/L) 处理1 h。检测各组细胞增殖活性，活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性。结果:与对照组比较，IL-13组细胞增殖活力减低( P<0.001)、ROS水平增高( P＝0.001)、MDA含量增高( P<0.001)、SOD活性降低( P<0.001)，差异均有统计学意义；与IL-13组比较，给予感觉神经肽SP刺激后，细胞增殖活力减低( P＝0.016)、ROS水平增高( P＝0.031)、MDA含量增高( P<0.001)、SOD活性降低( P＝0.011)；而给予WIN 62，577干预可抑制IL-13诱导的人支气管上皮细胞增殖活力降低( P＝0.018)、ROS水平增高( P＝0.018)、MDA含量增高( P<0.001)、SOD活性降低( P＝0.001)。 结论:感觉神经肽SP可加重IL-13诱导人支气管上皮细胞氧化应激损伤，NK-1R拮抗剂WIN 62，577可抑制IL-13诱导人支气管上皮细胞氧化应激损伤。

目的:探讨钙周期素结合蛋白(CacyBP)对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法:选取2016年于济南市中心医院行手术治疗的非小细胞肺癌患的肺癌组织和正常癌旁组织标本各6例，采用Western blot法检测肺癌和正常癌旁组织中CacyBP蛋白的表达水平，Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常支气管上皮细胞16HBE和不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)中CacyBP蛋白和mRNA的表达水平。将siRNA、siCacyBP-1、siCacyBP-2、慢病毒包装质粒shNC和shCacyBP转染至A549细胞(分别记为siNC组、siCacyBP-1组、siCacyBP-2组、shNC组和shCacyBP组)，将对照质粒和Flag-CacyBP质粒转染至A549细胞(分别记为NC组和Flag-CacyBP组)。采用细胞计数试剂盒8法、平板克隆实验以及流式细胞术检测细胞增殖能力以及细胞周期情况，细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot法检测敲低或过表达CacyBP A549细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail1、Vimentin和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达。结果:CacyBP蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达水平为0.41±0.23，高于正常癌旁组织(0.11±0.04， P<0.05)。不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)CacyBP蛋白的表达水平分别为0.35±0.01、0.38±0.01、0.32±0.01和0.41±0.01，均高于16HBE细胞(0.03±0.01，均 P<0.05)；RT-PCR结果与Western blot结果一致。与siNC组[吸光度( A)值为1.54±0.03]比较，siCacyBP-1组和siCacyBP-2组细胞增殖能力降低(分别为1.38±0.04和1.34±0.03，均 P<0.05)。shNC组细胞克隆形成数为(41.33±3.21)个，高于shCacyBP组[(22.00±3.61)个， P<0.05]。shCacyBP组细胞G 1期占比为(61.35±5.45)%，高于shNC组[(49.61±1.54)%， P<0.05]；S期占比为(25.41±3.21)%，低于shNC组[(38.68±0.46)%， P<0.05]。shCacyBP组细胞迁移率为(12.67±0.71)%，低于shNC组[(35.50±2.07)%， P<0.05]。shNC组细胞迁移和侵袭的数量分别为(406.33±7.37)个和(92.33±8.50)个，高于shCacyBP组[分别为(224.67±10.01)个和(66.00±7.94)个，均 P<0.05]。与siNC组相比，敲低CacyBP的表达，E-cadherin的表达水平升高，N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平降低(均 P<0.05)。与NC组相比，Flag-CacyBP组E-cadherin的表达水平降低，N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平升高(均 P<0.05)，PI3K/Akt通路抑制剂LY294002可逆转上述结果。 结论:CacyBP通过调控Akt通路的活性促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。

目的:阐明鲜冬虫夏草冷水提取物对香烟提取物(CSE)单一刺激以及复合流感病毒感染的体外抗炎作用。方法:用紫外高效液相色谱法分析鲜冬虫夏草冷水提取物核苷类成分，硫酸-苯酚法检测样品总糖含量，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测样品SOD活力。细胞活力检测试剂盒检测CSE和鲜冬虫夏草冷水提取物对人支气管上皮细胞(16HBE)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)的细胞毒性；以CSE刺激16HBE细胞48 h和THP-1细胞8 h建立炎症模型，加入不同浓度(1 000、500、250 mg/L)鲜冬虫夏草冷水提取物，用定量聚合酶链反应方法检测炎症因子mRNA的表达水平。在此基础上，构建CSE刺激48 h后感染甲型流感病毒24 h的16HBE细胞模型，以相同的方法评价药物对炎症因子mRNA表达的影响。最后，利用免疫荧光技术观察鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE致黏液蛋白5AC(MUC5AC)高分泌的抑制作用。结果:(1)鲜冬虫夏草冷水提取物总核苷含量为0.423%，总糖含量为18.69%，SOD活力为14 736.5 U/ml。(2)高、中浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE细胞的白细胞介素6(IL-6)mRNA表达有明显抑制活性( t值分别为6.514、5.156， P值均<0.05)，高浓度可显著抑制MUC5AC的mRNA表达( t＝8.922， P<0.05)。(3)高、中、低浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激THP-1细胞的肿瘤坏死因子α的mRNA表达均有明显抑制作用( t值分别为9.549、9.616、8.573， P值均<0.05)，对IL-6的mRNA的表达也均有抑制作用( t值分别为4.458、5.399、4.151， P值均<0.05)。(4)高浓度药物干预后，MUC5AC荧光在16HBE细胞胞浆的表达明显减少。 结论:鲜冬虫夏草冷水提取物在16HBE和THP-1细胞的炎症模型中显示出较好的抗炎活性，并且可抑制16HBE气道上皮细胞MUC5AC高分泌。本研究揭示了冬虫夏草兼具潜在治疗慢性阻塞性肺疾病炎症和黏液高分泌两大病理生理特征的药用特色。