目的:建立藏药粗壮秦艽和麻花秦艽的UPLC-TOF-MS化学成分谱分析方法以及马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量测定方法.方法:依据高分辨质谱提供的分子式、二级质谱裂解碎片及相关文献记载鉴定化学成分.选择[M-H]-作为马钱苷酸的专属离子、[M+HCOO]-作为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷专属离子对其进行含量测定,对不同批次药材中化学成分谱进行比较分析.结果:建立了藏药粗壮秦艽和麻花秦艽药材的UPLC-TOF-MS成分图谱,指认 38 个成分,包括三萜类10 个、黄酮类4 个、环烯醚萜类21 个、其他类成分3 个.在2 种药材中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量分别为 0.51%～0.90%、1.63%～2.31%、0.08%～0.21%、0.09%～0.28%.结论:建立的藏药粗壮秦艽和中药麻花秦艽UPLC-TOF-MS成分谱能全面反映药材的化学成分组成以及不同基原药材的成分差异,含量测定方法稳定可行,可为藏药粗壮秦艽药材的质量评价提供参考.

目的 基于网络药理学从分子水平探讨麻花秦艽抗缺血性脑卒中的物质基础及作用机制.方法 中国知网、万方数据库相关文献收集麻花秦艽化学成分,通过TCMSP数据库进行筛选并搜素复制符合条件的化学成分对应靶点名,通过Uniprot数据库对靶点进行标准化,利用OMIM、TTD和GeneCards数据库收集脑缺血相关靶点,Venny数据库取其交集,Cytoscape软件构建"药物—活性成分—交集基因网络图",STRING数据库构建PPI靶点互作图,DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析.结果 麻花秦艽有效成分主要参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、基因表达的正调控、DNA转录的正调控等生物过程作用于TNF、IL-17、Relaxin、HIF-1等信号通路;对网络图分析得到齐墩果酸、草木犀苷、邻苯二甲酸二丁酯、槲皮素、落干酸等核心成分和STAT3、JUN、AKT1、TP53、RELA、IL-6、MAPK14等关键靶点.结论 麻花秦艽可能通过调控炎症反应、细胞凋亡和氧化应激等途径发挥抗脑缺血的作用.

降水格局改变和氮沉降增加是草地生态系统结构及功能演变的重要影响因素,其对高寒草甸土壤和植物的化学计量的影响存在很大变异,限制了对高寒草甸生态功能预测的准确性.该研究基于祁连山东段南麓高寒草甸降水改变(减雨50％和增雨50％)和氮添加(10g·m-2·a-1)的控制实验平台,分析了2017-2020年表层(0-10 cm)土壤有机碳、全氮、全磷含量和优势植物麻花艽(Gentiana straminea)、垂穗披碱草(Elymus nutans)、黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)和矮生嵩草(Kobresia humilis)的叶片碳(LC)、氮(LN)、磷(LP)和钾(LK)含量等变化,以明晰土壤和植物的化学计量特征对降水改变和氮添加的响应.结果表明,土壤化学计量特征的变异存在显著年际效应,与实验处理无显著关系.地上活体生物量(PB)存在显著的年际差异,并受到氮添加的显著影响.优势物种叶片化学计量特征的变异因物种而异.垂穗披碱草叶片化学计量特征的变化均不显著,属于资源保守型物种,而矮生嵩草的变化显著,敏感性较强.基于处理样地与对照样地每年指标相对变化(△)的分析表明,氮添加显著提高了△PB达15.6％.降水减少显著降低了黄花棘豆△LC达6.8％,增加了矮生嵩草△LP达19.8％.研究表明仅氮添加提高了PB,降水减少改变了部分物种LC和LP含量,土壤和植物叶片的化学计量特征变异的年际效应或物种效应大于实验处理效应,凸显了高寒草甸生态系统对降水改变和氮添加响应的复杂性.

目的 分离获得的麻花秦艽Gentiana straminea Maxim内生细菌,研究具有抑菌活性的菌株,分析其次级代谢产物.方法 采用平板对峙法,筛选具有抑菌活性的内生细菌;扩增具有抑菌活性菌株的16S rRNA基因,结合形态和生理生化实验,鉴定相应菌株;采用高效液相色谱法(HPLC)对具有抑菌活性菌株的发酵产物进行初步检测.结果 从分离得到的10株内生细菌中,筛选得到2株对沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌具有拮抗作用的菌株(Q J3和QJ9).菌株QJ3归属于黄单胞菌属(Xanthomonas),在根、茎、叶、花中均有分布,占总分离内生细菌数量的59.47％,对沙门氏菌具有较强的抑菌作用,抑菌圈直径为15 mm;菌株QJ9为成团泛菌Pantoea agglomerans,仅在茎中分布,占总分离内生细菌数量的0.047％,对志贺氏菌的抑菌能力最强,抑菌圈直径为16咖.通过对菌株QJ3和QJ9发酵液检测后发现,两株菌的次级代谢产物中均可能存在龙胆苦苷.结论 麻花秦艽具有丰富的内生细菌资源,在新型抑菌药物筛选的替代资源及活性物质的应用方面具有重要的潜力.

目的 建立藏药麻花秦艽花和线叶龙胆花中同时测定胞嘧啶、胞苷、尿嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、鸟苷、胸苷和腺苷10种核苷类成分含量的HPLC-DAD方法,并对产自青海的6批次麻花秦艽花和6批次线叶龙胆花的这10种核苷成分进行含量测定和比较分析.方法 Bonus RP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.04％乙酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长260 nm,进样量20 μL.结果 10种核苷类成分线性关系、精密度、稳定性、重复性均符合含量测定方法学的要求,加样回收率为95.1％～98.5％.不同产地线叶龙胆花中10种核苷类成分总含量849.38～1 014.37 μg·g-1,麻花秦艽花为256.27～822.52μg·g-1.腺苷、鸟苷、尿苷和胞苷在麻花秦艽花和线叶龙胆花中的含量均较高,是其主要核苷成分,而尿嘧啶、鸟嘌呤和胸苷在2种样品中含量均较低.结论 该法简便实用、重复性好,适用于藏药麻花秦艽花和线叶龙胆花中10种核苷类成分的测定.青海不同产地2种藏药中10种核苷类成分的分析数据可为其质量控制和品质评价提供参考.

目的:考察藏药麻花秦艽醇提物(GSM)对胶原诱导型关节炎(CIA)模型小鼠滑膜组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)表达的影响,为阐明其抗类风湿关节炎(RA)的作用机制提供参考.方法:将40只小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(阳性对照,0.25 mg/kg)和GSM低、高剂量组(25、50 mg/kg,以生药量计),每组8只.除正常组外,其余各组小鼠均于尾根部多点皮内注射鸡Ⅱ型胶原制备CIA模型.自造模当日起,给药组小鼠每天灌胃相应药物1次,正常组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水,连续给药28 d.给药后7、14、21、28、35 d,测定各组小鼠的关节炎指数(AI);给药结束后,测定各组小鼠的脾指数和胸腺指数,采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色后观察小鼠踝关节滑膜组织病理学变化,并采用Western blot法检测小鼠滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠在给药不同时间后的AI值、脾指数、胸腺指数、血清中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)以及滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);小鼠踝关节滑膜组织出现细胞排列密集且紊乱、滑膜细胞数量增加、充血等病理学变化.与模型组比较,除GSM低剂量组小鼠在给药7、14 d的AI值降低不显著外,各给药组小鼠其余指标水平均显著降低(P<0.05);各给药组小鼠踝关节滑膜组织的充血程度减轻、炎性细胞数量减少.结论:GSM可能通过降低血清中炎症因子水平,抑制滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达,进一步减轻滑膜炎症而发挥其抗RA的作用.

目的 建立麻花秦艽UPLC指纹图谱,并分析其指征性成分差异与遗传多样性.方法 应用超高效液相色谱法测定采集样本干燥根的主要化学成分,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析不同居群指征性成分共有峰的相对峰面积,应用SPSS19.0对其进行聚类分析;应用ISSR分子标记对所采集样本干燥叶片进行基因组DNA提取和扩增,利用Popgen32软件分析遗传多样性及遗传分化状况.结果18个居群麻花秦艽药材共标定了12个共有峰,可分为3个类群,张掖市山丹县麻花秦艽龙胆苦苷及5种化学成分总含量最高;6条ISSR引物共扩增出73个位点,PPB为98.63％,I平均值为0.366 3,H平均值为0.231 6,Gst为0.344 1,基因流Nm为0.953 0.结论 建立的麻花秦艽UPLC指纹图谱可作为其质量评价体系;麻花秦艽在种群水平上具有较高的遗传多样性,居群内遗传多样性水平明显高于居群间,遗传变异主要存在于居群内.

目的:观察藏药麻花秦艽不同部位醇提物的抗炎作用.方法:72只雄性SPF级昆明种小鼠随机分为模型组[等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液]、醋酸泼尼松组(10 mg/kg)及麻花秦艽地上部位醇提物低、高剂量组(10、30 g/kg)与麻花秦艽地下部位醇提物低、高剂量组(10、30 g/kg),每组12只;灌胃给药,每天2次,连续6次;末次给药40 min后于小鼠右耳廓正反两面均匀涂抹二甲苯(0.05 mL)以建立耳肿胀模型,考察各组小鼠的耳肿胀度,并计算耳肿胀抑制率.分组同上;灌胃给药,每天2次,连续5次;末次给药40 min后于小鼠右足皮下注射1％角叉菜胶0.9％氯化钠溶液(0.05 mL)以建立足肿胀模型,考察各组小鼠的足肿胀度,并计算足肿胀抑制率.无菌条件下将灭菌棉球植于小鼠鼠蹊部皮下以建立肉芽肿模型;分组同上,建模24 h后灌胃给药,每天1次,连续10次;末次给药24 h后剥离棉球,考察各组小鼠的肉芽肿胀度,并计算肉芽肿胀抑制率.84只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(等体积0.5％CMC-Na溶液)、模型组(等体积0.5％CMC-Na溶液)、醋酸泼尼松组(7 mg/kg)及麻花秦艽地上部位醇提物低、高剂量组(7、21 g/kg)与麻花秦艽地下部位醇提物低、高剂量组(7、21 g/kg),每组12只;灌胃给药,每天1次,连续30次;灌胃给药4次后于大鼠右后足皮下注射完全弗氏佐剂(0.1 mL)以建立关节炎模型;建模18 h后,考察各组大鼠的足肿胀度,并计算足肿胀抑制率,建模20 d后进行大鼠全身关节病变评分,末次给药24 h后称定大鼠胸腺、脾、肾上腺质量和体质量并计算相应脏器指数.结果:与模型组比较,醋酸泼尼松组、麻花秦艽地上部位醇提物高剂量组和麻花秦艽地下部位醇提物低、高剂量组小鼠耳肿胀度均显著降低(P<0.05或P<0.01),耳肿胀抑制率分别为67.12％、27.39％、19.86％、54.79％;麻花秦艽地下部位醇提物低、高剂量组小鼠足肿胀度均显著降低(P<0.01),足肿胀抑制率分别为34.63％、46.07％;醋酸泼尼松组、麻花秦艽地上、地下部位醇提物低、高剂量组小鼠肉芽肿胀度均显著降低(P<0.05或P<0.01),肉芽肿胀抑制率分别为42.52％、14.02％、23.36％、21.50％、35.58％;醋酸泼尼松组和麻花秦艽地上、地下部位醇提物高剂量组大鼠关节肿胀度均显著降低,全身关节病变评分均显著降低(P<0.05或P<0.01).与正常对照组比较,模型组大鼠胸腺、脾脏、肾上腺指数均显著降低(P<0.01);与模型组比较,麻花素艽地上、地下部位醇提物低、高剂量组各脏器指数差异均无统计学意义(P>0.05).结论:麻花秦艽地上、地下部位醇提物均具有一定的抗炎作用.

目的:建立胶束毛细管电泳法(M EKC)同时测定龙胆属藏药(白花龙胆、蓝玉簪龙胆、达乌里秦艽、麻花艽)中龙胆苦苷、獐牙菜苷、獐牙菜苦苷、落干酸4种环烯醚萜类成分的含量.方法:以40 mmol/L硼砂-55 mmoVL十二烷基磺酸钠(SDS)-10％乙腈(pH=9.51)为缓冲溶液,未涂渍标准熔融石英毛细管(64.5 cm×50 μm,有效长度56 cm)为分离通道,运行电压为18 kV,检测波长为254 nm,压力进样为50 mbar×5 s.结果:4种对照品的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.9986).结论:该方法简单、准确,重复性较好,可用于龙胆科药材白花龙胆、蓝玉簪龙胆、达乌里秦艽、麻花艽的质量评价和控制.

目的:研究麻花秦艽醇提物对高原低氧大鼠肺、脑组织损伤的保护作用及其可能机制.方法:将60只清洁级SD实验大鼠分成平原空白对照组、高原缺氧模型组、麻花秦艽1.67、3.33、6.66 g/kg组、红景天胶囊0.17 g/kg阳性对照组,给药15 d.第16 d除空白对照组外均置于低压氧舱,设置低压氧舱海拔为7000m,持续低压缺氧24h,造模结束后取出肺和脑组织,进行脑指数和肺含水量、各生化指标及HE染色做形态学病理检测.结果:与模型组比较,麻花秦艽醇提物各剂量组均可以明显改善高原低氧大鼠肺和脑组织的病理性损伤,明显升高缺氧大鼠脑组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,明显降低丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)水平;降低脑组织中乳酸脱氢酶(LDH)的活力和乳酸(LD)的含量,升高ATP酶含量和ATP酶活力;降低肺组织上清液中白介素IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量.结论:麻花秦艽醇提物对高原低氧大鼠肺和脑组织损伤具有良好的保护作用,其机制可能与其抗炎、清除氧自由基和调节能量代谢等作用有关.