目的:建立超高效液相色谱法同时测定小儿肝炎颗粒中7种环烯醚萜苷类和4种黄酮类成分的含量测定方法。方法:采用Agilent Ecilipse C18(2.1 mm×100 mm，1.6 μm)色谱柱，柱温30 ℃，流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速0.3 ml/min，检测波长240、278 nm。结果:獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、山栀苷甲酯、羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素线性范围分别为19.16～306.56 μg( r＝0.999 4)、3.34～53.28 μg( r＝0.999 1)、5.30～84.64 μg ( r＝0.999 5)、0.80～12.80 μg( r＝0.999 4)、0.46～7.20 μg( r＝0.999 2)、2.78～44.48 μg( r＝0.999 6)、6.02～96.16 μg( r＝0.999 9)、33.22～531.36 μg( r＝0.999 9)、3.92～62.72 μg( r＝0.999 2)、2.38～37.92 μg( r＝0.999 7)、1.32～20.96 μg( r＝0.999 9)；平均加样回收率( n＝9)均在94.62%～107.53%之间， RSD均小于3.0%。 结论:经方法学验证，该法可同时测定小儿肝炎颗粒中11种成分含量，可为其质量控制提供参考。

小儿腹痛草是我国云南彝族习用草药，广泛用于治疗小儿痉挛性腹痛、胆囊炎等疾病，主要含有环烯醚萜苷及 酮类化合物，其中以獐牙菜苦苷含量最高、药理作用最显著，具有解痉、镇痛、镇静、抗炎、保肝、保胃等作用，与其疏肝清热、和胃止痛的功效密切相关。作为特色显著的儿科民族药，小儿腹痛草相关质量标准尚未健全、应用开发较少。

车前子为我国临床常用的传统中药材,具有清热利尿通淋、渗湿止泻、明目、祛痰的功效.车前子炮制历史悠久,早在汉代就有炒制的记载,其后出现了酒制、盐制、米泔水制等多种炮制方法,车前子炮制加工后可减弱药物寒性,利于临床应用.现代研究表明,车前子的主要化学成分有苯乙醇苷类、环烯醚萜类、多糖类、黄酮类等,具有利尿、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化等药理作用.该文查阅历代本草、医药典籍和相关文献资料,从车前子的炮制历史沿革、化学成分及药理作用等方面进行论述,以期为车前子的相关研究提供参考.

目的 考察炮制、配伍对栀子豉汤有效成分的影响.方法 取生品、炒制品、焦制品及三者与淡豆豉的配伍适量,HPLC法同时测定京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、染料木苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、大豆苷元、染料木素的含量,计算溶出率.结果 7 种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.999 4),平均加样回收率 95.22%～104.94%,RSD≤3.36%.炮制后,生品中栀子苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ含量降低;配伍后,生品、炮制品水提物中环烯醚萜苷类、二萜色素类成分溶出率降低;乙醇提取时有利于环烯醚萜苷类成分溶出,提取溶剂对西红花苷类成分溶出的影响更大.结论 该方法简便、重复性好,可为栀子豉汤质量标准建立提供理论依据.

三物黄芩汤(Sanwu Huangqin Decoction,SHD)始载于《金匮要略》,由黄芩、苦参、地黄3味药组成,为滋阴清热之经典方剂.主要含有黄酮类、生物碱类、环烯醚萜苷类及苯乙醇苷类等化合物,具有抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗过敏、抗白塞病等药理作用,临床多用于发热性疾病、红斑性肢痛症、自身免疫性肝病、皮肤性疾病等.通过对SHD的处方考证与历史沿革、化学成分、药理作用及现代临床应用等进行系统分析,并在此基础之上,依据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的五原则对SHD的Q-Marker进行预测,黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A,苦参中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱、三叶豆紫檀苷、苦参酮,地黄中梓醇、地黄苷D可初步确定为SHD的Q-Marker,为完善SHD的制剂过程中质量溯源体系及其质量评价与控制体系奠定一定的基础.

基于网络药理学、组分结构理论剖析独一味抗炎有效成分(环烯醚萜苷类:山栀子苷甲酯、8-O-乙酰山栀子苷甲酯;黄酮苷类:木犀草苷;苯乙醇苷类:连翘酯苷B)的协同作用与配伍结构.网络药理学:利用CTD、SwissTargetPrediction、Pharm-Mapper数据库收集并筛选了各有效成分抗炎靶点;通过CTD、GeneCards数据库获得炎症相关靶点;利用Venny 2.1、STRING和Cytoscape 3.9.1得到核心靶点;通过DAVID数据库对核心靶点进行GO功能注释及KEGG通路富集分析.组分结构:基于二甲苯致小鼠耳肿胀模型和均匀设计法,以炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleu-kin-6,IL-6)为因变量,通过二次多项式逐步回归,探究独一味抗炎成分间的配伍关系,并进行体内药效实验验证.网络药理学研究表明,与单一组分相比,3类组分共同作用可通过更多生物过程、通路、靶点协同发挥抗炎作用.组分结构研究表明,环烯醚萜苷组分内(山栀子苷甲酯∶8-O-乙酰山栀子苷甲酯)最佳结构比例为1.21∶1;3类组分间(环烯醚萜苷∶苯乙醇苷∶黄酮苷类)最佳结构比例为4.8∶1.6∶1.综上,独一味各抗炎成分可协同增效,且成分间存在最优配伍比例关系,为独一味内在质量控制提供了新的实验依据.

该研究采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q/Orbitrap HRMS)结合分子网络技术快速分析了经典名方清骨散基准样品中化学成分.首先采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm× 100 mm,1.7 μm),以乙腈-0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4mL·min-1,柱温30 ℃条件下,在加热电喷雾离子源正、负离子2种模式下采集质谱数据.随后将采集的清骨散基准样品质谱数据上传至全球天然产物社会分子网络(GNPS)平台进行计算分析,并运用Cytoscape 3.8.2软件构建可视化分子网络.在此基础上,根据对照品的裂解规律,结合保留时间、高分辨质谱精确相对分子质量、特征碎片离子、文献报道及数据库匹配等信息鉴定清骨散基准样品中的化学成分.最终从清骨散基准样品中共鉴定和推测出105个化学成分,包括19个环烯醚萜苷类、23个黄酮类、15个苯丙素类、11个三萜皂苷类和37个其他类化合物,其中2个成分为潜在的新化合物.该研究采用的方法不仅实现了清骨散基准样品中化学成分的快速、准确鉴定,为清骨散复方制剂的药效物质研究和质量控制提供科学依据,也为中药复方制剂中化学成分的快速鉴定提供参考.

地黄为我国传统的常用大宗中药材,具有清热凉血、养阴生津之功效.环烯醚萜苷是地黄药材的主要活性成分,环烯醚萜氧化酶是环烯醚萜苷生物合成途径的关键限速酶.该研究基于转录组数据,筛选到 1 条环烯醚萜氧化酶基因RgIO,对其进行了系统的生物信息学、表达特性和亚细胞定位分析.结果表明,RgIO的编码区为 1 536 bp,编码 511 个氨基酸,相对分子质量 58 258.01.RgIO的蛋白序列包含细胞色素P450 氧化酶的保守结构域和基序,与列当科 3 个植物独脚金、黄独脚金和大花胡麻草的同源蛋白序列一致性最高,与长春花CrIO的序列一致性也高达 77.28%.RgIO在地黄的叶中特异性高表达,而且响应茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导,MeJA处理3、6 h,在叶和块根中其表达量分别增加了 3.15、1.3 倍.亚细胞定位结果显示RgIO分布在内质网上.利用根癌农杆菌介导法在地黄叶片中瞬时表达RgIO,梓醇的含量较瞬时表达空载体的对照增加了 0.82倍.该研究为地黄梓醇的分子调控和生物合成提供了关键的靶基因,也为完整解析地黄梓醇的生物合成途径奠定了基础.

目的 研究草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对TGF-β1诱导肝癌HepG2细胞上皮间质转化(EMT)的影响作用.方法 用10 μg/L TGF-β1诱导HepG2肝癌细胞株构建肝癌细胞EMT模型.实验分为对照组、模型组与IGBR组3组,对照组用无血清DMEM处理,模型组用10 μg/L TGF-β1处理,IGBR组用10 μg/L TGF-β1和500 mg/L IGBR联合处理,培养48 h.利用细胞黏附实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力.RT-PCR法和Western Blot法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白的mRNA和蛋白表达,Western Blot法检测Slug、Twist1、ZEB1、p-STAT3、STAT3的蛋白表达.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;两组间比较采用成组t检验.结果 TGF-β1诱导后,模型组HepG2细胞呈现长梭形改变;与模型组比较,IGBR组细胞黏附率降低,抑制细胞迁移、侵袭能力(P值均＜0.05),E-钙黏蛋白的mRNA表达和蛋白表达均增高(P值均＜0.05),N-钙黏蛋白和波形蛋白的mRNA表达和蛋白表达均降低(P值均＜0.05),Slug、Twist1、ZEB1蛋白表达和p-STAT3蛋白表达均降低(P值均＜0.05).结论 IGBR可抑制TGF-β1诱导的HepG2细胞EMT过程,从而减弱HepG2细胞黏附力和细胞迁移、侵袭能力,上调E-钙黏蛋白,下调N-钙黏蛋白和波形蛋白,上调Slug、Twist1、ZEB1、STAT3的蛋白表达,其作用可能通过抑制STAT3通路下调Slug、Twist1、ZEB1等EMT转录因子来实现.

目的 研究清热凉血方的化学成分.方法 查阅中国知网、PubChem等数据库,检索清热凉血方药材化学成分的相关文献,建立化学成分数据库.采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法分析该方剂的图谱数据,并以Xcalibur 4.0 软件拟合分子式,与自建数据库信息进行匹配,初步推测分子式信息,并结合相关化学成分数据和文献信息对目标化学成分进行鉴定和确证.结果 共鉴定出 66 个化学成分,包括单萜苷类 20 个,酚酸类 10 个,环烯醚萜苷类 8 个,糖苷类、没食子酰葡萄糖类各 4 个,有机酸类、苯乙醇苷类、香豆素类各 2 个,苯丙素类、生物碱类、黄酮类、环肽类、萘醌类、糠醛类各 1 个,其他类 8 个.结论 所建立的方法可系统地对清热凉血方中的化学成分进行定性分析.