黄病毒属病毒是一类主要通过节肢动物媒介传播的正链RNA病毒，在世界范围内可引起高死亡率和高发病率。目前，尚无特效疗法。黄病毒治疗性抗体为治疗黄病毒感染带来了希望，但与此同时，通过感染而引发的抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应可导致黄病毒感染患者疾病恶化。理想的黄病毒治疗性抗体既能治疗黄病毒感染，又可以避免ADE带来的危害。因此，研究者们将已发现的一些抗体进行优化以寻求最佳治疗抗体。本综述简单阐述了黄病毒治疗性抗体的研究进展、作用机制，以及降低ADE效应的相关策略。

目的 阐明重组表达乙脑病毒非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)与包括乙脑病毒在内的多种蚊传黄病毒的抗原抗体反应,以及对乙脑病毒感染患者急性期血清标本的抗原抗体反应.方法 本研究使用大肠杆菌原核表达载体(prokaryotic expression vector,pET)系统,重组表达乙脑病毒NS1基因.使用Western Blot实验方法检测重组表达蛋白质与多种,包括乙脑病毒在内的蚊传黄病毒抗体的反应,以及乙脑病毒感染患者急性期血清的抗原抗体反应.结果 乙脑病毒(P3株)NS1基因表达产物以包涵体形式存在,经过变性和复性的表达产物在聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE,简称变性胶)显示为单一条带,分子量约为45 000.进一步的抗原抗体分析结果表明,表达产物与乙脑病毒(蚊虫分离株,脑炎患者分离株)多克隆或者单克隆抗体以及乙脑病毒感染病人急性期血清标本可以获得完全一致的抗原/抗体杂交反应.重组表达产物与蚊传黄病毒,如登革病毒和黄热病毒多克隆抗体之间抗原/抗体杂交反应为阴性,但与西尼罗病毒和墨累谷脑炎病毒多克隆抗体呈现抗原/抗体阳性杂交反应.结论 本文成功获得乙脑病毒NS1蛋白的重组表达并分析了重组蛋白对多种蚊传黄病毒及乙脑病毒感染患者标本之间的抗原/抗体反应,研究结果对于阐明乙脑病毒NS1蛋白与蚊传黄病毒之间抗原抗体反应提供了重要的基础数据.本研究所获得重组表达蛋白为进一步研究乙脑病毒NS1蛋白质功能等提供了重要的物质基础.

目的 比较登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒四种商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,并用健康人血清对商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒进行效果评价.方法 登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒感染病例(各3例)的恢复期血清,采用ELISA方法检测四种黄病毒IgG抗体,评估商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,从此前出现过输入性寨卡病毒感染确诊病例的江门市采集健康人群血清,检测上述四种黄病毒IgG抗体,最后通过蚀斑减少中和实验验证ELISA方法检测的寨卡病毒IgG抗体阳性结果.结果 通过确诊登革热、寨卡和乙脑病例恢复期血清检测发现,已有商品化试剂盒在检测登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒阳性血清时存在交叉反应.IgG抗体ELISA检测试剂盒检测发现,78例健康人血清样本中登革病毒抗体阳性样本数为0例;寨卡病毒抗体阳性样本数为8例(阳性率10.25％);日本脑炎病毒抗体阳性样本数37例(阳性率47.43％);33例健康人血清样本中西尼罗病毒抗体阳性样本数为0例.蚀斑减少中和实验结果显示,8例寨卡病毒IgG抗体阳性样本均未检测到中和抗体.结论 商品化黄病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒存在交叉反应,单纯运用ELISA试剂盒检测会出现假阳性结果,因此在进行血清学方法检测时应联合其他检测方法.

目的 了解健康人群和丙型肝炎病毒(HCV)-RNA阳性患者血清标本中病毒群落的组成;比较健康组与 HCV感染组血清标本中病毒群落组的差异性;挖掘新型HCV及其他新病毒.方法 提取血浆样品中的全部核酸,反转录后采用Illumina index primers进行扩增构建病毒文库,随后进行Miseq深度测序,通过生物信息学分析筛选出与病毒相关的序列.结果 HCV01文库中总病毒序列数为1 514条,主要由黄病毒科(48％)、指环病毒科(29％)、反转录病毒科(7％)、微小噬菌体科(2％)构成;HCV02文库中总病毒序列数为2 820条,主要由指环病毒科(61％)、黄病毒科(18％)、反转录病毒科(8％)、微小噬菌体科(1％)构成;HCV03文库中总病毒序列数为3 534条,主要由指环病毒科(78％)、黄病毒科(4％)、反转录病毒科(4％)、人类内源性反转录病毒科(2％)、微小噬菌体科(1％)构成;HCV04文库中总病毒序列数为3 549条,主要由指环病毒科(90％)、反转录病毒科(2％)构成.结论 血液中存在多种病毒,HCV感染患者血液中主要存在指环病毒科、黄病毒科、反转录病毒科病毒,而健康人群血液中主要为指环病毒科、反转录病毒科病毒;血清中 HCV水平可能对指环病毒科病毒的复制有抑制作用,即HCV水平越高则指环病毒科病毒水平越低.

目的 调查云南省保山市蚊虫及其自然感染虫媒病毒状况,为蚊媒病毒病防控提供参考依据.方法2015年9月采用诱蚊灯法在保山市隆阳区农村人房和畜圈采集蚊虫标本,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于检测蚊虫标本中黄病毒属、甲病毒属、布尼亚病毒属和流行性乙型脑炎病毒(乙脑病毒)等相关病毒核酸,阳性者进行C/prM基因序列测定、同源性和系统进化分析.结果 共捕获蚊虫3种8 202只,三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)、中华按蚊(Anopheles sinensis)和骚扰阿蚊(Armigeres subalbatus)构成比依次为88.50％(7 259只)、11.43％(937只)和0.07％(6只).蚊虫标本分30批进行RT-PCR检测,14批三带喙库蚊中检测到乙脑病毒核酸,并获得14株乙脑病毒C/prM基因核苷酸序列.同源性和进化分析表明,14株乙脑病毒与基因I型乙脑病毒同在一个进化分支,并与2007年保山市腾冲县和2010年德宏傣族景颇族自治州(芒市和瑞丽市)的基因I型乙脑病毒具有较近的进化关系.结论 三带喙库蚊为保山市的优势蚊种和乙脑病毒主要传播媒介,当地存在基因I型乙脑病毒流行,此为近10年保山市首次检测到基因I型乙脑病毒.

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染对乙酰胆碱酯酶(AchE)表达水平的影响以及细胞内AchE活性的变化对HCV感染的影响.方法 以细胞培养来源的HCV(HCVcc)感染人肝癌细胞系Huh7细胞,用蛋白质印迹法以及实时荧光定量PCR(qPCR)进一步验证HCV感染对AchE表达水平的影响,AchE活性检测试剂盒检测细胞内AchE活性的变化.以AchE抑制剂多奈哌齐和伊托必利处理Huh7细胞,同时用HCVcc感染,通过蛋白质印迹法以及免疫荧光法检测Huh7细胞的HCV感染情况.用针对AchE基因的小干扰RNA(siRNA)转染Huh7细胞,随后用HCVcc感染Huh7细胞,通过蛋白质印迹法和免疫荧光法检测AchE的表达以及HCV感染情况.结果 HCVcc感染Huh7细胞60 h后,AchE蛋白表达水平升高,同时酶活性也增强(P均<0.01).AchE抑制剂呈浓度依赖性抑制HCV对Huh7细胞的感染(P<0.01).用siRNA敲低AchE的表达后,HCV对Huh7细胞的感染降低(P<0.01).结论 HCV感染Huh7细胞能上调AchE的表达并增强AchE活性,AchE表达增加和活性增强都能促进HCV的感染,表明AchE在HCV感染Huh7细胞的过程中起着正反馈增强感染的作用.

黄病毒属虫媒病毒多为新发突发传染病的病原体,已在全球引发多起突发公共卫生事件,对人类健康构成严重威胁.减毒疫苗是黄病毒属虫媒病毒最有效的疫苗类型,通过连续细胞传代筛选的黄热病病毒和乙型脑炎病毒减毒疫苗对预防这两种黄病毒感染发挥了重要作用.近年来,利用病毒反向遗传学技术对黄病毒基因组进行定点改造以获得减毒表型,在黄病毒属虫媒病毒疫苗研制中取得重要进展.本文就黄病毒属虫媒病毒减毒疫苗的历史和研究现状进行综述.

蚊虫传播的黄病毒造成的传染病是人类健康的重要威胁,有效的早期精确诊断对预防与控制黄病毒感染并及时有效开展病患救治至关重要.然而由于黄病毒在血液中核酸可检测窗口短,核酸检测手段难以发挥优势,必须要通过血清学的诊断与病毒分离予以佐证,而血清学检测也要面对黄病毒之间存在的交叉反应问题.本文介绍了基于黄病毒非结构蛋白1(NS1)建立的检测手段.NS1蛋白在病人血清中含量很高是良好早期诊断靶标,基于NS1蛋白的黄病毒血清学诊断的检测窗口较长、灵敏度高、特异性强,具有独特的优势.尤其是2016年寨卡病毒暴发以来基于NS1的检测技术在灵敏度与特异性上得到快速与多元的发展,为黄病毒的精确检测带开启了新的局面.

[目的]圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒.黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子.因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标.本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂.[方法]通过PCR扩增SLEV NS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropy1β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台.[结果]SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95％以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行.对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEV NS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性.[结论]本研究为SLEV NS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物.

黄病毒能引起严重的人类疾病,但是并无特定药物来治疗病毒感染.黄病毒非结构蛋白NS3的N端区域及其辅因子NS2B构成蛋白酶,该酶切割病毒的多聚蛋白形成成熟的结构蛋白和非结构蛋白来帮助病毒完成增殖过程.NS2B-NS3pro蛋白酶在黄病毒生命周期中起关键的作用,使之成为抗病毒药物研发的重要靶标.本文综述了黄病毒属中寨卡病毒、登革热病毒、西尼罗病毒的NS2B-NS3pro蛋白酶结构的研究进展,并介绍了相关抑制剂与蛋白酶形成的复合物结构,以期为研发抗黄病毒药物提供必要的参考.