黄病毒属病毒是一类主要通过节肢动物媒介传播的正链RNA病毒，在世界范围内可引起高死亡率和高发病率。目前，尚无特效疗法。黄病毒治疗性抗体为治疗黄病毒感染带来了希望，但与此同时，通过感染而引发的抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应可导致黄病毒感染患者疾病恶化。理想的黄病毒治疗性抗体既能治疗黄病毒感染，又可以避免ADE带来的危害。因此，研究者们将已发现的一些抗体进行优化以寻求最佳治疗抗体。本综述简单阐述了黄病毒治疗性抗体的研究进展、作用机制，以及降低ADE效应的相关策略。

登革热是世界范围内流行最为广泛的虫媒病毒感染性疾病之一，由登革病毒(dengue virus, DENV)感染引起。每年约有3.9亿人感染DENV，其中大约有9 600万人会出现临床症状，且每20例患者中就有1例患者可能出现严重的登革热并导致休克、内脏出血和死亡。DENV包括4种血清型(1～4)，均可以引起不同程度的疾病。目前，没有特定的针对登革热的治疗药物，只有2种疫苗在一些国家获批使用：CYD-TDV和TAK-003。其中适用于9～45岁人群的疫苗CYD-TDV受到抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应的影响，可能导致更严重的感染。因此，如何减缓或消除ADE的影响成为当前登革热疫苗研究的一个重要问题。除此之外，DENV非结构蛋白对免疫系统的影响也不可忽视。目前，至少有7种登革热疫苗处于不同的研发和临床试验阶段。本综述将主要介绍3种取得重大进展的候选疫苗，并总结规避ADE效应的方法和以非结构蛋白为免疫原的登革热疫苗研发进展。

目的:建立降低抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应的抗体表达系统，以期降低目标抗体的ADE效应。方法:对哺乳细胞抗体表达载体Fc区进行L234A和L235A点突变，建立抗体表达载体pFRT-IgG1κ-FcM。选取前期工作中获得的1株具有显著ADE效应的抗体Wt-WNV利用pFRT-IgG1κ-FcM系统进行表达，获得突变后抗体FcM-WNV。ELISA检测FcM-WNV与靶抗原西尼罗病毒包膜蛋白DⅢ(West Nile virus envelope protein-DⅢ，WNV E-DⅢ)的结合，流式细胞术分析FcM-WNV与人高亲和力IgG Fc受体hFcγRⅠ(hCD64)的结合。假病毒感染宿主细胞(BHK21和K562)试验检测FcM-WNV的体外中和活性。结果:FcM-WNV与Wt-WNV表达水平相当，能识别结合WNV E-DⅢ，且呈浓度依赖效应；与Wt-WNV相比，FcM-WNV与hCD64的结合力明显减弱，表现为荧光强度明显降低；与前期实验结果一致，Wt-WNV在5 μg/ml的浓度下具有明显增强WNV假病毒感染K562细胞的作用，而FcM-WNV在5 μg/ml浓度下，能有效阻断假病毒感染K562和BHK21细胞。结论:本研究建立的抗体表达系统可有效降低目标抗体的ADE效应。

目的:探寻SARS-CoV-2膜蛋白(membrane protein, M protein)引起的免疫特征，尤其是其引发抗体依赖性增强效应(antibody-dependent enhancement, ADE)的可能性。方法:利用原核表达系统制备纯化的SARS-CoV-2全长M蛋白，并经皮下途径3次(第1、14和21天)免疫BALB/c小鼠，获得血清。Western blot鉴定血清特异性，ELISA法和中和试验对血清抗体的效价进行验证。体外培养检测在抗M蛋白血清存在的情况下SARS-CoV-2在树突状细胞、自然杀伤细胞、T和B细胞中的增殖情况。结果:SARS-CoV-2全长M蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的免疫血清能够特异地识别病毒M蛋白，且免疫血清中抗全病毒抗体效价约为1∶400，但该抗体没有中和活病毒的能力。此外，这种抗体不能够辅助病毒感染各种类型具有Fc受体(Fc receptor，FcR)的免疫细胞并在其中增殖。结论:由M蛋白诱导的非中和抗体不能以FcR途径诱导ADE效应。

目的:探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应。方法:真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer，NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果:成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc，HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。此外，HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的效应，HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%，IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%，IFN-γ的分泌可达43.10%，与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性，蛋白低浓度0.5 μg/mL时，赫赛汀的ADCC效应降低，且组间差异有统计学意义( t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42， P值均<0.05)。 结论:验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。

为进一步提高口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗的免疫效果,本研究采用仿生矿化方法,将 Zn2+和 2-甲基咪唑按照不同浓度配比制备了不同粒径的FMDV VLPs-沸石咪唑骨架-8(zeolitic imidazolate framework-8,ZIF-8)复合物,以探究尺寸效应对免疫效果的影响.结果显示,成功制备出 3 种不同粒径的 FMDV VLPs-ZIF-8,粒径分别约为 70、100、1 000 nm.细胞毒性和组织病理学试验表明,3 种复合物均具有良好的生物安全性.小鼠免疫试验表明,3 种复合物均能明显提高中和抗体和特异性抗体水平,并且随着复合物体积的减小,其免疫效果也随之增强.本研究表明,ZIF-8 包封 FMDV VLPs可显著增强其免疫效果,且具有尺寸依赖性.

目的 探究靶向西妥昔单抗和雷莫芦单抗联合用药对非小细胞肺癌细胞A549的治疗效果及其机制.方法 检测表皮生长因子受体(EGFR)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在A549细胞表面的表达;检测西妥昔单抗与雷莫芦单抗联合给药对A549细胞的增殖抑制、横向迁移、抗体依赖的细胞毒作用(ADCC)及相关信号通路的影响.结果 西妥昔单抗与A549细胞的结合率为90.5％,雷莫芦单抗结合率为27.0％.西妥昔单抗、雷莫芦单抗、联合给药对A549细胞均有抑制作用,且呈浓度依赖性;西妥昔单抗、雷莫芦单抗组细胞迁移相对较慢,联合给药组的细胞迁移最慢;联合给药可以很好介导效应细胞杀伤,优于西妥昔单抗组和雷莫芦单抗组;联合给药能同时阻断EGFR和KDR的磷酸化,最终导致p38、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路被强烈抑制.结论 在共靶向EGFR和VEGFR2靶点的抗体联合治疗后,A549细胞的增殖抑制、迁移能力降低,ADCC作用增强,联合给药显著提高了单独用药的抗肿瘤效果.

目的 随着单克隆抗体在临床的广泛应用和新型抗体的不断问世,引发了人们对其疗效和作用机制的进一步探讨.近年来研究发现,肿瘤免疫微环境中的免疫细胞可以通过介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-de-pendent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)在单克隆抗体杀伤肿瘤细胞的诸多环节中发挥重要作用.本研究总结国内外报道的ADCC相关的不同免疫细胞水平与单克隆抗体疗效的相关性的研究进展.方法 以"免疫细胞、单克隆抗体、ADCC和肿瘤"等为关键词,检索PubMed、CNKI数据库和百链数据库2011-05-2017-05的相关文献.纳入标准:ADCC效应,具有ADCC作用的单克隆抗体,可以预测单克隆抗体疗效的ADCC相关免疫细胞.排除标准:2011-05之前的文献,目前没有证据表明具有ADCC作用的单克隆抗体.根据纳入和排除标准,最终纳入36篇文献.结果 研究表明,多种单克隆抗体可以凭借ADCC效应在靶向治疗的基础上进一步对肿瘤细胞进行免疫杀伤.ADCC在机体的免疫微环境中发生.与ADCC相关的免疫细胞包括自然杀伤胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞和髓样抑制性细胞等.其中自然杀伤细胞、M1型巨噬细胞、CD8+T细胞、Vγ9Vδ2T细胞和中性粒细胞为具有正向免疫调节作用的生物标志物,所以相应水平升高可以预测单克隆抗体有好的疗效.M2型巨噬细胞、肿瘤相关巨噬细胞、调节性T细胞及髓样抑制性细胞为具有负向免疫调控作用的细胞,这些细胞可以相互协作抑制肿瘤微环境中正常免疫反应的进行,导致肿瘤的进展和免疫逃逸.所以抑制相应负调控免疫细胞的水平或功能可能会预测单克隆抗体有好的疗效.结论 对于具有ADCC作用的单克隆抗体,推荐通过调节机体相关免疫细胞的水平或将单克隆抗体与ADCC增强免疫细胞调节剂相结合来增强单克隆抗体的疗效.

目的 探究靶向EGFR抗体融合UL16结合蛋白2激活NK细胞治疗结直肠癌的体内外活性.方法 通过重叠延伸PCR技术并利用柔性肽G4S将靶向EGFR的抗体(西妥昔单抗)基因与UL16结合蛋白2基因连接起来,建立重组载体,再利用毕赤酵母表达系统进行表达;利用流式细胞仪测定目标融合蛋白对HCT116细胞的结合力;利用MTT法检测目标融合蛋白在体外对HCT116细胞的增殖抑制作用;通过ADCC法测定目标融合蛋白激活NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果 通过基因工程法以及毕赤酵母表达,成功地获得本研究的目标融合蛋白,通过Western blot实验结果表明目标融合蛋白Cetuximab-ULBP正确表达以及成功装配.通过流式细胞仪实验结果表明Cetuximab-ULBP和结直肠癌细胞HCT116的结合率为79.21％,和西妥昔单抗的结合率(73.53％)相当,目标抗体仍然保持了母体抗体结合HCT116细胞的活性.MTT实验结果表明,西妥昔单抗组和目标融合蛋白组对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,并且呈浓度依赖性.西妥昔单抗组的抑制HCT116细胞增殖率为73.76％,目标融合蛋白组抑制HCT116细胞增殖率为71.98％,两者活性相当,并且增殖抑制作用呈浓度依赖性.目标融合蛋白能显著增强结直肠癌HCT116细胞的杀伤作用.选用NK92细胞作为效应细胞,当效靶比为100∶1时,西妥昔单抗和目标融合蛋白都能够增强NK92的杀伤HCT116肿瘤细胞的作用,其中目标融合蛋白组的细胞裂解率是(45.34±7.14)％,而西妥昔单抗组的细胞裂解率是(38.24±6.11)％,两者比较,具有统计学差异(P＜0.05).结论 与单一西妥昔单抗相比,靶向EGFR抗体融合UL16结合蛋白2通过介导免疫细胞杀伤肿瘤细胞而增强其抗肿瘤活性,在临床上可作为一种结直肠癌治疗的新方法.

作者采用MTT比色法观察了本室自制免疫抑制酸性蛋白单克隆抗体MI₂的体外抗肿瘤作用。结果表明：MI₂在浓度为7.81mg/L时即可明显抑制胃癌细胞株SGC7901的生长（抑制率7.5％±2.4％，P＜0.01），并见剂量依赖性表现；在LAK细胞与SGC7901胃癌细胞的效靶比为10∶1时，加入1.95mg/L的MI₂即可明显增强LAK细胞的细胞毒作用（增强效应为206.3％，P＜0.01），其作用也呈剂量依赖性表现。作者还发现MI2的这种抗肿瘤作用与补体无关。