探讨黄芩清热除痹胶囊(HQC)调控肿瘤抑制蛋白 53(tumor protein p53,p53)/细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,p21)通路延缓骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞衰老的机制.碘乙酸钠(MIA)联合外界风湿热环境刺激,诱导OA大鼠风湿热痹模型,分为正常(Con)组,OA 模型(MIA)组,OA 模型+风湿热刺激模型(MIA-M)组,MIA-M+HQC低(MIA-M+HQC-L)、中(MIA-M+HQC-M)、高(MIA-M+HQC-H)剂量组,MIA-M+氨基葡萄糖(MIA-M+GS)组,模型制备后灌胃 30 d,苏木素-伊红(HE)和番红O固绿(SO)染色观察软骨病理变化,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-1β和IL-6 的表达,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测基质降解酶 13(MMP13)、聚蛋白多糖酶5(ADAMTS-5)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA 的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测p53/p21 通路、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2A(p16)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2 关联X蛋白(Bax)蛋白的表达.Con组大鼠关节软骨表面光滑平整,潮线光滑平整;MIA组和MIA-M组软骨层破坏明显,软骨基质减少,MIA-M组情况更严重.HQC高剂量组和MIA-M+GS组软骨表面基本完整,分层清晰.与MIA-M+HQC-H组相比,低、中剂量Mankin's评分较高,MIA-M+GS组变化不明显.与Con组相比,MIA和MIA-M组软骨细胞G1 的比例升高,S期、G2 期比例下降,细胞凋亡率增加;与MIA-M组相比,HQC各剂量组以浓度依赖的方式抑制细胞凋亡,促进增殖;与MIA-M+HQC-H组相比,高剂量较中、低剂量作用更显著,与MIA-M+GS组相比差异无统计学意义.与Con组相比,MIA和MIA-M组IL-1β和IL-6 升高,MMP13 和AD-AMTS-5 mRNA水平升高,p53、p21、p16 和Bax蛋白升高,COLⅡ、TGF-β mRNA水平下降;与MIA-M组相比,HQC和GS药物干预后IL-1β和IL-6下降,MMP13 和ADAMTS-5 mRNA、p53、p21、Bax和p16 蛋白水平下降,Bcl-2 升高;与MIA-M+HQC-H组相比,这些指标改善优于HQC低、中剂量组,与MIA-M+GS组差异不明显.HQC延缓MIA诱导的OA大鼠软骨细胞衰老,抑制炎症反应和细胞外基质(ECM)降解,其机制可能与抑制p53/p21 通路有关.

研究黄芩清热除痹胶囊(Huangqin Qingre Chubi Capsules,HQC)治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用及机制.70 只雄性SPF级大鼠随机分为正常组,模型组,HQC低(0.18 g·kg-1)、中(0.36 g·kg-1)、高(0.72 g·kg-1)剂量组,甲氨蝶呤(MTX,0.75 mg·kg-1)组,阴性对照组(NC组,模型+生理盐水).佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(fibro-blast-like synoviocytes,FLS)分为正常组,模型组,HQC低(5%HQC含药血清+95%滑膜培养基)、中(10%HQC含药血清+90%滑膜培养基)、高(15%HQC含药血清+85%滑膜培养基)剂量组,阴性对照组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)检测甲基转移酶3(methyltransgerase like 3,METTL3)、分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白 D1(CCND1)、V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)、纤连蛋白(fibronectin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)mRNA和蛋白的表达.免疫荧光法进一步检测MMP3 和β-catenin蛋白表达.在AA-FLS上敲低METTL3 基因表达水平,进一步检测各基因表达情况.酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8 的水平.结果显示,与正常组相比,模型组大鼠四肢均发现红肿现象,关节肿胀程度明显增加;与模型组相比,各给药组关节肿胀度显著下降(P<0.05),后足撤退阈值和体质量指数均显著增加(P<0.05).METTL3 在AA大鼠高表达,且与SFRP4 的表达呈负相关.AA-FLS经给药后,METTL3、β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05).与模型组相比,敲低METTL3 后β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).同时HQC+敲低METTL3 组的β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达均明显低于METTL3 敲低组(P<0.05).HQC能不同程度降低IL-1β、IL-6、IL-8 水平(P<0.05).结果表明,HQC对AA大鼠有明显改善作用;METTL3 在AA大鼠滑膜组织和AA-FLS中表达显著升高,这可能是诊断和治疗RA的潜在靶点;HQC通过METTL3-SFRP4/Wnt/β-catenin信号通路改善RA,具有明显的抗炎和抗风湿作用.

目的 随访类风湿关节炎出院患者健脾化湿通络方药的应用情况,分析中医药治疗与终点事件发生的相关性.方法 采用队列研究设计.电话随访安徽省中医院2012年1月1日至2016年6月30日类风湿关节炎住院患者,记录出院后口服中成药、中药汤剂的种类和应用时间,以及全因死亡、手术治疗、再发入院、关节外病变的发生情况,终点事件x2检验、logistic回归分析中医药(刘健教授常用健脾代表药茯苓、薏苡仁、陈皮,祛风湿代表药威灵仙、川芎、桑寄生,活血通络代表药丹参、桃仁、红花以及院内制剂新风胶囊、黄芩清热除痹胶囊、颈椎活血胶囊)治疗与终点事件发生的相关性.结果 完成随访患者1468例,失访率18.98％.暴露组(出院后应用中成药和中药汤剂≥28 d)1292例,应用频次较多的口服中成药依次为新风胶囊、黄芩清热除痹胶囊、新癀片、雷公藤多苷片等;中药汤剂依次为四妙散、身痛逐瘀汤、宣痹汤、独活寄生汤等.各暴露组终点事件总发生80例,其中非暴露组37例(21.02％),低暴露组21例(12.96％),中暴露组14例(7.49％),高暴露组8例(0.85％),其发生率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 终点事件的发生与中医药应用时间存在相关性,新风胶囊、茯苓、川芎等为代表的健脾化湿通络方药可降低类风湿关节炎患者终点事件发生.

目的 通过随访强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)出院患者健脾化湿益肾通络方药的应用情况,分析中医药治疗与终点事件发生的相关性.方法 采用队列研究设计.电话随访安徽中医药大学第一附属医院201 2年1月1日-2016年6月30日AS住院患者399例,依据出院后服用中成药、中药汤剂的时间,将随访成功323例患者分为高暴露组(1 59例),中暴露组(38例),低暴露组(70例),非暴露组(56例),采用x2检验、Logistic回归分析(健脾化湿代表药:茯苓、薏苡仁、陈皮,祛风益肾代表药:威灵仙、川芎、桑寄生,活血通络代表药:丹参、桃仁、红花)治疗与终点事件(全因死亡、手术治疗、再发入院、关节外病变)发生的相关性.结果 失访率19.05％ (76/399);出院后应用中成药、中药汤剂≥28天的AS患者共267例,应用频次较高的口服中成药依次为杜仲壮骨丸、新风胶囊、黄芩清热除痹胶囊、雷公藤多苷片等,中药汤剂依次为四妙散、独活寄生汤、身痛逐瘀汤、桃红四物汤等.终点事件共发生6例,其中高暴露组发生O例,中暴露组1例(26.32％),低暴露组2例(28.57％),非暴露组3例(53.57％),发生率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 终点事件的发生与中医药治疗的强度相关,以陈皮、桑寄生等为代表的健脾化湿益肾方药能减少AS患者终点事件的发生.

目的:观察黄芩清热除痹胶囊(HQC)对强直性脊柱炎(AS)患者疗效及氧化应激的影响,并探讨其作用机制.方法:将60例AS患者随机分为治疗组和对照组各30例,治疗组予以黄芩清热除痹胶囊(HQC)口服,3次/d,3粒/次,对照组予以柳氮磺吡啶(SASP)口服,2次/d,4片/次,连服3个月,同时选择30名健康对照组.应用ELISA法检测血清SOD、TAOC、MDA、LPO、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10,仪器法测定红细胞沉降率(ESR),全自动生化仪分析仪检测超敏C-反应蛋白(hs-CRP),观察治疗前后VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G、BASMI,评价HQC对AS患者的临床疗效.结果:与正常组相比,AS组TAOC、SOD、IL-4、IL-10水平明显降低,MDA、LPO、TNF-α、IL-1β 明显升高(P<0.01);与治疗前相比,两组治疗后VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G、BASMI、ESR、hs-CRP明显下降(P<0.01),与SASP组相比,HQC组BASDAI、hs-CRP显著降低,BASDAI50显著升高(P<0.05);与治疗前相比,两组IL-4、IL-10、TAOC、SOD均明显上升,TNF-ɑ、IL-1β、MDA、LPO明显降低(P<0.01或P<0.05),与SASP组相比,HQC组IL-10、SOD显著升高,MDA显著降低(P<0.05).结论:HQC可有效改善AS患者临床症状及实验室指标,对AS有一定治疗作用,其机制可能与纠正细胞因子失衡、改善氧化应激状态、减轻氧化损伤有关.

目的 基于AMPK-FoxO3a-MnSOD信号通路研究黄芩清热除痹胶囊(HQC)改善类风湿关节炎患者氧化应激的机制.方法 将50例RA患者按随机数字表法分为2组:HQC组(3粒/次,每日3次)和来氟米特(LEF)组(10 mg/次,每日1次),每组25例,连续治疗3个月.评定2组中医证候临床疗效和脾虚症状评分;魏氏法测ESR;日立7060型全自动生化分析仪检测Hs-CRP、RF、CCP-AB;ELISA检测血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-35、SOD、TAOC、MDA、LPO;FCM法检测单个核细胞CD36水平;RT-PCR法检测PPAR-γ、AMPKα1、FoxO3a mRNA表达;Western blot法检测PPAR-γ、p-FoXO3a、FoXO3a、AMPKoα1、MnSOD蛋白表达.采用Spearman方法对RA患者氧化/抗氧化指标、信号通路指标与细胞因子、中医脾虚症状、CD36之间进行相关性分析.结果 HQC组总有效率为88％,LEF组总有效率为92％,2组总有效率比较差异无统计学意义(P＞0.05).与治疗前比较,2组中医脾虚各个症状评分均降低,Hs-CRP、RF、CCP-AB、IL-1β、TNF-α、IL-6等指标均显著下降,IL-4、IL-10显著升高,SOD、TAOC均显著升高,LPO显著降低,AMPK-α1、PPAR-γ、p-FoxO3a蛋白水平升高,CD36表达水平明显升高,PPAR-γ mRNA表达升高.且HQC组IL-35明显升高,MDA显著降低,FoxO3a、MnSOD蛋白水平显著升高,AMPK-α1 mRNA、FoxO3a mRNA表达明显升高.且HQC组食欲减退、少气懒言、食后腹胀、大便稀溏、关节重着等评分、LPO治疗后较LEF组降低明显,IL-35、FoxO3a、p-FoxO3a、MnSOD蛋白水平、CD36表达、AMPK-α1 mRNA、FoxO3a mRNA表达治疗后较LEF组升高明显.相关性分析显示,RA患者氧化航氧化指标、信号通路指标与细胞因子、中医脾虚症状、CD36存在一定相关性.结论 RA患者氧化应激的发生机制及黄芩清热除痹胶囊改善氧化应激状态可能是与AMPK-FoxO3a-MnSOD信号通路密切相关.

目的 通过随访风湿病出院患者健脾化湿通络方药的应用情况,观察中医药治疗风湿病的效应.方法 采用队列研究方法,电话随访风湿病住院患者出院后服用中成药和中药汤剂的时间(<28 d者定义为非暴露组,>28 d、且≤90 d者为低暴露组,>90 d、且<180 d者为中暴露组,≥180 d者为高暴露组).采用χ2检验、Logistic回归法分析健脾化湿通络方药治疗与终点事件发生的相关性.结果 3449例患者完成随访,失访率16.18％(666/4115).出院后应用中成药、中药汤剂时间≥28 d的风湿病患者共2877例,应用频次较高的中成药依次为新风胶囊、新癀片、黄芩清热除痹胶囊、雷公藤多苷片、杜仲壮骨丸、颈椎活血胶囊等.终点事件发生185例,其中高暴露组发生18例(9.73％),中暴露组31例(16.76％),低暴露组48例(25.95％),非暴露组88例(47.57％),终点事件发生率差异有统计学意义(P<0.05).Logistic回归分析结果表明,暴露强度、新风胶囊、雷公藤多苷片、黄芩清热除痹胶囊为终点事件的保护因素.结论 终点事件的发生与中医药治疗的强度相关,以新风胶囊为代表的健脾化湿通络方药能减少风湿病患者终点事件的发生.

目的 运用随机行走模型评价中医健脾单元疗法对痛风(Gout)患者代谢指标的影响.方法 利用安徽中医药大学第一附属医院住院病历数据处理系统采集患者信息,研究其代谢指标:同型半胱氨酸(Hcy)与尿酸(UA).收集并整理该院风湿免疫科2012年6月至2018年12月Gout住院患者.依据是否使用黄芩清热除痹胶囊分为单元疗法组和单纯中药组,利用随机行走模型和关联规则评价中医健脾单元疗法对Gout患者Hcy和UA影响.结果 ①共纳入274例Gout患者符合研究要求,单纯中药组为106例(38.69％),单元疗法组168例(61.31％).基于四性和五味的中医理论,其中寒性草药(出现110次,37.7％),温性(出现89次,30.5％)和凉性的(出现18次,6.2％)是使用频率排名前三的草药.②经关联规则分析:在同样使用黄芩清热除痹胶囊情况下,Hcy降低与蒲公英、泽兰、泽泻、黄柏、威灵仙、车前草升高呈关联,UA降低与山慈菇、川牛膝、泽泻、黄柏、车前草、桃仁、红花、丹参升高呈关联.③随机行走模型显示:单元疗法组UA临床意义在于UA每改善一步,需要行走7.53步;而单纯中药组UA临床意义在于UA每改善一步,需要行走2.06步.单元疗法组临床意义在于Hcy每改善一步,需要行走3.39步.④聚类分析共聚为3类,聚l类有桃仁、红花、丹参、茯苓、陈皮、甘草、蒲公英;聚2类山药、白术、薏苡仁、垂盆草、泽兰、山慈菇、黄柏、车前草、泽泻、土茯苓、川牛膝、威灵仙;聚3类郁金.结论 中医健脾单元疗法对患者炎性指标的改善效果优于单纯中药内服.中医健脾单元疗法治疗痛风有良好的效果.

探讨黄芩清热除痹胶囊(HQC)对强直性脊柱炎(AS)患者疗效及氧化应激的影响,探究其可能机制.选取58例AS患者随机分为HQC组与柳氮磺吡啶(SASP)组,另设30例健康对照组.采用ELISA检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAOC)、过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)、白介素(IL) 1β、IL-10、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK-α)、叉头转录因子O3a(FOXO3a)、锰超氧化物岐化酶(MnSOD)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ) mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AMPK-α,FOXO3a,p-FOXO3a,MnSOD,PPARγ蛋白表达;采用问卷调查评价疾病活动评分并观察HQC对AS患者临床疗效.AS患者外周血中MDA,LPO,TNF-α,IL-1β水平升高,SOD,TAOC,IL-4,IL-10水平降低;HQC治疗后疾病活动评分均显著降低,疗效显著高于SASP组;HQC治疗后TAOC,SOD,IL-4,IL-10显著升高,MDA,LPO,TNF-α,IL-1β显著下降;HQC治疗后AMPK-α,FOXO3a,MnSOD,PPARγmRNA及AMPK-α,FOXO3a,p-FOXO3a,MnSOD,PPARγ蛋白表达显著升高(P＜0.01或P＜0.05).结果 表明HQC可改善AS患者临床症状及氧化应激,其机制可能与激活PPARγ上调AMPK/FOXO3a信号通路有关.

研究黄芩清热除痹胶囊(HQC)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、叉头框蛋白O3a(FoxO3a)蛋白表达的影响,探讨其抗氧化作用机制.通过收集患者和正常人外周抗凝血,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离出单核细胞(PBMC),细胞培养取对数期细胞,并用SD大鼠给药灌胃制备含药血清,分为5组[正常组、模型组、AMPK阻断剂组(compound C 10 μmol·L-1)、HQC中剂量+AMPK阻断剂组、HQC中剂量组],根据MTT法检测细胞抑制率.采用ELISA检测IL-1β,IL-4,LPO,MDA,SOD,TAOC水平;Western blot检测AMPK,p-AMPK,p-FoxO3a,FoxO3a蛋白的表达.结果 显示,HQC含药血清对外周血人单核细胞有抑制作用,中剂量HQC为最佳浓度,24 h为最佳时间.HQC中剂量组在升高SOD,p-AMPK,p-FoxO3a,降低LPO方面优于模型组、AMPK阻断剂组、HQC中剂量+AMPK阻断剂组;在升高IL-4,TAOC,AMPK,FoxO3a,降低IL-1β,MDA方面优于模型组和AMPK阻断剂组,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结果 表明,HQC含药血清可能通过升高TAOC,SOD水平,降低MDA,LPO水平,激活AMPK,直接磷酸化FoxO3a增强其转录活性,改善RA患者氧化应激状态.