目的 从红豆杉内生木霉属真菌MPT-009的次生代谢产物中发现具有抗菌活性的单体化合物.方法 采用硅胶、ODS、Sephadex-LH20柱层析和半制备高效液相等方法进行分离,利用高分辨率质谱、NMR波谱数据和电子圆二色谱(ECD)计算等方法确定化合物结构,通过二倍稀释法评价化合物对8种临床耐药性细菌和7种植物病原真菌的抗菌活性.结果 从木霉属真菌MPT-009大米发酵产物中共分离得到了一个新的聚酮化合物trichoketide F(1)和6个已知化合物10-deacetylkoningiopisin D(2)、koninginin A(3)、koninginin B(4)、koninginin D(5)、koninginin E(6)、isoharziandione(7).化合物 1 对马铃薯黄萎病菌、水稻纹枯病菌、油菜菌核菌、棉花枯萎病菌、草莓黑斑病菌、玉米小斑病菌显示一定的抑制活性,MIC值为12.5～50 μg/mL.结论 本文对红豆杉内生真菌Trichoderma sp.的次生代谢产物进行了深入研究,分离得到1个新化合物,丰富了木霉属真菌代谢产物,且该化合物对油菜菌核病菌具有较好的抑制活性,MIC值为12.5 μg/mL.

蝙蝠蛾幼虫的饲养是冬虫夏草培植的先决条件,粉棒束孢作为蝙蝠蛾幼虫饲养过程中的一种常见和主要致病菌,具有极强的致病性和流行性.结合形态学观察和组织切片技术,本文研究了蝙蝠蛾幼虫感染病原菌粉棒束孢后的症状、主要组织病理变化及粉棒束孢侵染蝙蝠蛾幼虫的途径.结果表明,用浓度为1x105个/mL的粉棒束孢分生孢子悬液处理蝙蝠蛾5龄幼虫,4d后在腹部气门处有黑斑出现,气门变黑,虫体随后瘫痪死亡、体色改变、收缩化僵、菌丝层包裹、形成众多孢梗束等症状.幼虫被粉棒束孢感染后,菌丝体首先利用血淋巴进行增殖,脂肪体、肌肉、消化道、丝腺和马氏管等主要组织器官先后出现不同程度的破坏,虫体体腔被大量菌丝充斥并最终僵化.组织切片观察结果表明,粉棒束孢可以通过气门侵入蝙蝠蛾幼虫体内并造成虫体死亡,菌丝穿透气管进入血淋巴后断裂成许多长短不一的短菌丝段,目前尚未观察到菌丝直接穿透幼虫体壁和从消化道侵入的现象.本研究为蝙蝠蛾幼虫饲养过程中的病害防治提供信息参考.

目的:明确12种市售微生物菌剂产品中分离菌株对人参黑斑病菌和人参灰霉菌的抑菌效果,为人参病害绿色防控提供参考依据.方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株;对峙培养法评价分离菌株的抑菌活性;十字交叉法测量菌落直径.结果:5种木霉菌剂产品中仅有1种分离到活体菌株,尽管该菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性较高(抑菌率分别为65.18％和76.82％),但菌剂中活菌的分离数偏低.7种芽孢杆菌菌剂中均能分离到活体菌株,除微囊粒剂和水剂外,其他菌剂产品中活体菌株分离数均较高;上述分离菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性低于木霉菌,抑菌率分别为27.21％ ～33.04％和10.74％ ～29.40％.结论:芽孢杆菌和木霉杀菌剂均具有防治人参病害的生防潜力,考虑菌剂产品的稳定性和环境耐受力,芽孢杆菌类微生物菌剂更适合人参病害的田间防控.

目的:筛选对人参黑斑菌、人参菌核菌、人参立枯丝核菌等有抑菌活性的微生物菌剂产品,有效解决人参生产过程中的农残超标问题,为人参病害绿色防控提供参考依据.方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株,室内对峙培养验证菌株的抑菌活性;根据菌落形态特征、显微结构及gyrA、gyrB基因序列鉴定菌株的归属.结果:从"KDL"复合微生物菌剂中分离出12株细菌(编号:Y1～Y12),除Y12外,其余菌株对七种人参致病菌均有抑菌活性.其中,Y4对人参菌核菌的抑菌率最高(68.42％),Y9对人参立枯丝核菌的抑菌率最高(54.07％),Y2对人参疫病菌、人参黑斑菌、人参灰霉菌和人参锈腐菌的抑菌率最高(分别为68.25％、52.58％、49.46％和40.65％),Y3对人参根腐菌的抑菌率最高(47.37％).经鉴定,Y1、Y2和Y8为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,Y3～Y7、Y9～Y11为解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens.结论:分离自"KDL"复合微生物菌剂的绝大部分菌株对七种人参致病菌均有较好的抑菌活性,推测该菌剂可能对人参病害具有生防潜力,可尝试用于人参病害防控.

目的:为明确拮抗真菌zjts7分类地位和对肿节风黑斑病菌Colletotrichum dematiu的抑菌率以及对病原菌的菌丝形态的影响.方法:本研究采用平板稀释法和平板对峙法,从健康肿节风的根系土壤里分离筛选到一株对肿节风黑斑病菌具有抑菌作用的真菌zjts7.结果:结果表明,真菌zjts7对肿节风黑斑病菌的抑菌率达到81.82％ ～100％.经显微镜观察,真菌zjts7可造成肿节风黑斑病菌的菌丝断裂、膨大和畸形.结论:结合形态特征和ITS rDNA序列分析,将该拮抗真菌zjts7鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum.

目的:分离和鉴定三七黑斑病病原菌,并对其生物学特性进行研究,为该病的防治提供理论依据.方法:结合形态学和分子鉴定的方法对病原菌进行鉴定,确定三七黑斑病的病原菌为Alternaria alternata Keissl..根据致病性测定,选择强致病力菌株A和B用于生物学特性研究.结果:菌株A和B菌丝生长的温度范围为8～32℃,pH值范围为2～11,在燕麦培养基、有机氮作为氮源、12 h光暗交替等条件下生长最好,生长最适温度分别为25℃和28℃,最适pH分别为11和10,最适碳源分别为马铃薯淀粉和麦芽糖.菌株A产孢最适碳、氮源分别为可溶性淀粉和硝酸铵,产孢最适培养基为燕麦培养基,最适温度为28℃,最适pH为11,12 h光暗交替更有利于孢子产生;菌株B几乎不产孢.1％葡萄糖溶液可促进菌株A分生孢子的萌发生长,孢子在25℃,相对湿度达93％,pH为4,光暗交替等条件下萌发率最高.结论:明确了三七黑斑病病原菌Alternaria alternata Keissl.的生物学特性,采用燕麦培养基,25 ～ 28℃,12h光暗交替下培养有利病菌生长、产孢及其萌发,高湿度下分生孢子大量萌发.

为获取优良人参黑斑病菌生防内生真菌,该文采用平板对峙培养法,对健康人参叶片分离的1株优势内生真菌进行了筛选评价,并结合形态学观察及ITS序列分析对筛选出的生防内生真菌进行了鉴定.结果表明,对峙培养发现这株菌株对人参黑斑病菌具有较好的抑制作用,抑菌率为(60.21±0.12)％,标记为FS-01菌株;FS-01菌株与人参黑斑病菌对峙培养的菌丝交界处,人参黑斑病菌菌丝出现了溶解、断裂和缠绕.未灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(41.62±0.17)％;灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(13.94±0.21)％.经鉴定,FS-01菌株为毛壳菌属Chaetomium中的球毛壳菌C.globosum.

芸薹生链格孢(Alternaria brassicicola (Schwein.) Wiltshire)引起的黑斑病是十字花科蔬菜生产上的重要病害之一,在全球主产区都有报道.目前关于该病菌的致病机理的研究还较少.因此,查找和鉴定芸薹生链格孢致病相关基因,不仅有助于认识该类病原真菌致病的分子机制,还有助于发现病害防治新靶标.本研究从本实验室己构建的芸薹生链格孢转化子库中筛选得到了7株致病性缺陷的突变菌株.进一步利用HiTAIL-PCR技术对插入位点的侧翼序列进行了扩增,并通过生物学分析方法进行了初步分析.相关研究结果将有助于对芸薹生链格孢致病机理的认识,为发现病害防治新靶标提供理论基础.

[背景]农业生产中,发掘和利用具有生防功能的微生物资源是保障粮食安全和提高作物产量的重要举措.[目的]明确土壤中芽孢杆菌SK007的分类地位,验证其对多种植物病原菌的拮抗作用,挖掘潜在的生防功能.[方法]通过16S rRNA基因和基因组分析方法确定分离菌株SK007的分类地位;采用平板对峙法研究该菌株对番茄灰霉病菌、白菜黑斑病菌、烟草赤星病菌、小麦赤霉病菌、马铃薯干腐病菌等植物病原菌的拮抗作用;采用AntiSMASH分析和预测菌株SK007的抗生素相关基因.[结果]基于16S rRNA基因、全基因组序列、平均核苷酸一致性和DNA同源性分析,结果表明菌株SK007属于Bacillus velezensis,并且具有产生脂肽类抗生素和聚酮类抗生素的基因,对多种植物病原真菌有较强的抗性.此外,菌株SK007基因组中抗生素基因簇数目较多,丰富度高.[结论]芽孢杆菌SK007在拮抗植物病原菌方面有许多优良性状,具有促进作物抗病和增产的潜力.

克隆梨抗病相关基因,并对其在梨黑斑病抗病防御中的作用进行初步分析.基于同源基因克隆方法从"黄冠梨"中克隆获得一个预测为受体样蛋白激"酶EMS1的基因,暂命名为PpEMS1.利用生物信息学、Southern Blot、亚细胞定位和实时荧光定量PCR技术对该基因进行分析.结果表明,该基因CDS全长3894 bp,编码1296个氨基酸,开放阅读框3891 bp.Southern Blot分析表明,在"黄冠梨"、"黄花梨"、"翠玉梨"中,该基因都以单拷贝形式存在,在"爱宕梨"中以多拷贝形式存在.亚细胞定位结果显示,融合蛋白在细胞膜和细胞核均有表达.荧光定量PCR分析表明,接种黑斑病菌1、2、3、4、5、6、7和8 d后,在"黄花梨"和"爱宕梨"中该基因表达均呈现先上升后下降的趋势.推测该基因可能与梨黑斑病抗性相关.