目的 探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制.方法 通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10).低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50 μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼.激动剂组小鼠用50μL浓度为20g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃.对照组和模型组小鼠分别用50 μL生理盐水滴眼.各组小鼠均给药1周.治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分.采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1 β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子 88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65 的 mRNA 水平;采用 Western blot分析角膜 TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤.

患者为66岁男性，右眼被木板崩伤后眼红伴视物不清、畏光、流泪，抗炎治疗效果不佳。右眼角膜中央可见4 mm×4 mm大小浸润灶伴表面白色苔被附着。角膜刮片显微镜检查、真菌培养及活体共聚焦显微镜检查均提示真菌感染。分离菌株经过镜下形态鉴定为尖端赛多孢霉，通过基因测序鉴定为刚毛黑孢壳菌。门诊给予角膜清创联合常规抗炎抗真菌治疗，随访期间病情持续好转，初诊40 d后复诊时裂隙灯显微镜检查发现角膜基质变薄，上皮基本愈合，裸眼视力由0.3提高到0.6。

目的:探讨国产吸入变应原提取液在儿童过敏性疾病诊断中应用的安全性和与血清检测结果的一致性。方法:选取2018年9月至2020年6月在首都儿科研究所附属儿童医院诊断为过敏性疾病的9 563例患儿为研究对象，对所有患儿进行皮肤点刺试验(SPT)，并对其中415例进行血清特异性IgE(sIgE)检测。记录并分析SPT操作过程中的不良事件，比较SPT与血清sIgE检测结果的一致性。结果:9 563例患儿中14例发生不良事件，不良事件发生率为0.15%。其中1～5岁组发生率为0.07%(2/2 581例)，6～11岁组为0.19%(12/6 197例)，12～17岁组为0。严重程度分级均为Ⅰ级。14例发生不良事件的患儿中，仅1例为与变应原制剂相关的不良反应，其发生率为0.01%(1/9 563例)。Kappa指数显示，屋尘螨、粉尘螨、链格孢霉和艾蒿采用SPT和sIgE的检测结果几乎完全一致；树木花粉和豚草具有高度一致性( P<0.01)；烟曲霉具有中等一致性( P<0.01)。以血清sIgE检测结果为诊断标准，SPT检测结果的约登指数为0.76～0.89，烟曲霉(0.76)和树木花粉混筛(0.79)最低；阳性似然比除树木花粉混筛(7.12)和粉尘螨(9.10)较低外，其余均>10；阴性似然比除烟曲霉最高(0.19)外，其余均≤0.1。 结论:国产吸入变应原提取液制剂在过敏性疾病患儿的SPT临床应用中安全性高，且与血清sIgE检测一致性好，有助于儿童过敏性疾病的诊断与评估。

目的:分析儿童真菌致敏性哮喘的临床和炎症特征。方法:本研究为横断面研究，采用非随机抽样的方法选取2019年6月至2022年6月于山东第一医科大学附属省立医院小儿呼吸综合科门诊和病房就诊的2 902例支气管哮喘(哮喘)患儿为研究对象。根据血清吸入过敏原特异性免疫球蛋白E和血清总免疫球蛋白E(tIgE)检测结果将患儿分为单纯真菌致敏组、真菌多重致敏组、非真菌致敏组和非致敏组。观察真菌致敏哮喘患儿的分布情况和真菌致敏哮喘患儿合并其他吸入过敏原致敏分布情况，比较4组哮喘患儿的一般资料(性别、年龄、就诊季节)、血常规指标[嗜酸性粒细胞(EOS)绝对值、中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值、血红蛋白(Hb)、嗜酸性粒细胞/淋巴细胞比值(ELR)和嗜酸性粒细胞/中性粒细胞比值(ENR)]和tIgE，观察4组哮喘患儿不同就诊季节血常规指标和tIgE变化情况。结果:本研究中2 902例哮喘患儿分为单纯真菌致敏组331例(11.41%)、真菌多重致敏组898例(30.94%)、非真菌致敏组1 067例(36.77%)和非致敏组606例(20.88%)。真菌致敏哮喘患儿共1 229例(42.35%)，其中男851例(69.24%)，女378例(30.76%)。不同年龄段真菌致敏哮喘患儿占比总体差异有统计学意义( χ2＝63.31， P<0.001)，以6～8岁、9～11岁占比较高。不同就诊季节真菌致敏哮喘患儿占比总体差异有统计学意义( χ2＝34.51， P<0.001)，以夏季占比最高。链格孢致敏哮喘患儿1 115例(38.42%)，以3级(37.22%)、4级(32.29%)致敏较多；烟曲霉致敏哮喘患儿610例(21.02%)，以2级(45.90%)、3级(30.33%)致敏较多。真菌多重致敏组中合并1种其他吸入过敏原者占比为54.23%(487/898)，以真菌＋尘螨占比最高33.63%(302/898)；合并2种其他吸入过敏原者占比为32.18%(289/898)，以真菌＋尘螨＋花草树木占比最高25.84%(232/898)；合并3种其他吸入过敏原者占比为13.59%(122/898)。4组哮喘患儿性别、年龄、就诊季节比较总体差异均有统计学意义(均 P<0.001)。对于EOS绝对值、ELR和ENR，真菌多重致敏组高于单纯真菌致敏组，其次高于非真菌致敏组，高于非致敏组(均 P<0.05)。对于Hb，真菌多重致敏组高于单纯真菌致敏组、非真菌致敏组，真菌多重致敏组和非真菌致敏组高于非致敏组(均 P<0.05)。对于tIgE，真菌多重致敏组高于非真菌致敏组，其次高于单纯真菌致敏组，高于非致敏组(均 P<0.05)。EOS绝对值、ELR、ENR和tIgE在单纯真菌致敏组、真菌多重致敏组和非真菌致敏组各组内均呈现季节性变化(均 P<0.05)。单纯真菌致敏组中EOS绝对值、ELR、ENR和tIgE在夏季升高；真菌多重致敏组中EOS绝对值、ELR、ENR和tIgE在冬季降低；非真菌致敏组中EOS绝对值和tIgE在秋季升高，ELR和ENR在冬季降低，Hb在夏季降低。 结论:真菌致敏性哮喘是重要的哮喘类型，男童、6～11岁儿童发病居多，发病季节以夏季为主。真菌致敏性哮喘2型炎症突出，EOS绝对值、ELR、ENR和tIgE均升高，并且呈现季节性变化。

目的:分析3例链格孢霉致播散型皮肤链格孢病临床表现、组织病理、真菌病原学特征及治疗。方法:回顾分析2019—2021年西京皮肤医院诊断的3例链格孢霉致播散型皮肤链格孢病的临床特征、组织病理、真菌培养和菌株鉴定结果及治疗。结果:3例患者年龄分别为55、41和46岁，男1例、女2例。2例患有肾病综合征，1例患有系统性红斑狼疮，均有不同时间糖皮质激素及他克莫司治疗史，均为慢性病程。皮损HE染色可见双轮廓厚壁孢子及木节状厚壁有隔菌丝，均未见黑素。内转录间隔区测序显示，2例致病真菌为互隔链格孢霉，1例为侵染链格孢霉。不同温度培养显示，链格孢霉在35 ℃以上生长能力明显下降。3例患者均将他克莫司减量至标准剂量的1/3以下或改用其他免疫抑制剂，并同时给予系统抗真菌治疗，均取得较好疗效。结论:播散型皮肤链格孢病具有双侧分布的血行播散及单侧肢体的淋巴管分布特点，皮损以覆盖痂皮的疣状斑块、结节和/或窦道为特点。

目的:探讨脾脏源性髓源性抑制细胞（MDSCs）在脓毒症诱导肾上腺损伤（SAI）中的作用及其机制。方法:采用随机数字表法将30只6～8周龄C57雄性小鼠分为正常对照组（ n＝5）、假手术组（Sham组， n＝5）、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术（CLP）组， n＝10〕和脓毒症+脾切除组（CLPS组， n＝10）。采用CLP法制备小鼠脓毒症模型；Sham组仅开腹分离盲肠后关腹，不给予盲肠结扎穿孔；CLPS组于CLP前切除脾脏；正常对照组不给予任何处理。各组于制模后24 h处死小鼠，收集外周血、脾脏、骨髓及双侧肾上腺；采用苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肾上腺组织病理学改变，采用流式细胞仪测定外周血、脾脏和骨髓中MDSCs细胞比例，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（PCR）检测肾上腺组织中MDSCs表面抗原CD11b、Gr-1和白细胞介素（IL-6、IL-1β）的mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肾上腺组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白总mTOR（T-mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达。 结果:光镜下显示，正常对照组和Sham组肾上腺皮质、髓质完整，结构清晰；CLP组肾上腺皮质肿胀、出血，可见细胞水肿；CLPS组上述肾上腺组织损伤较CLP组明显减轻。与正常对照组和Sham组相比，CLP组外周血中MDSCs细胞比例明显增加，脾脏中MDSCs细胞比例明显降低，骨髓中MDSCs细胞比例差异无统计学意义，肾上腺组织中CD11b、Gr-1、IL-6、IL-1β的mRNA和caspase-3蛋白表达均明显增加，p-mTOR蛋白表达明显降低，T-mTOR蛋白表达差异无统计学意义；与CLP组相比，CLPS组外周血中MDSCs细胞比例明显降低（0.143±0.011比0.324±0.023， P<0.01），肾上腺组织中CD11b、Gr-1、IL-6和IL-1β的mRNA以及caspase-3的蛋白表达均明显降低〔CD11b mRNA（2 -ΔΔCt）：2.90±0.56比5.74±0.13，Gr-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.71±0.14比4.59±0.46，IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.44±0.64比5.17±1.04，IL-1β mRNA（2 -ΔΔCt）：3.58±0.52比4.44±0.26，caspase-3蛋白（caspase-3/GAPDH）：0.05±0.01比0.13±0.02，均 P<0.01〕，p-mTOR蛋白表达明显增加（p-mTOR/GAPDH：0.61±0.11比0.27±0.04， P<0.01）。 结论:脾脏是SAI中MDSCs细胞的主要来源；脾切除可减少MDSCs细胞动员，激活mTOR信号通路，从而减轻SAI。

目的:探究竹节参总皂苷(TSPJ)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞铁死亡的作用及调控机制。方法:实验1：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组、二甲双胍组(Met)，每组各10只。实验2：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C组、TSPJ＋AMPK激动剂AICAR组，每组各10只。除对照组外，其余各组大鼠均采取腹腔注射链脲佐菌素构建DCM模型。各组大鼠给予对应药物干预8周后，检测各组大鼠体重及糖脂代谢水平；超声心动图检测大鼠心功能指标；酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平；苏木精-伊红(HE)染色和电镜观察心肌组织病理变化；试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛、活性氧簇(ROS)及Fe 2＋水平；Western印迹法检测心肌组织铁死亡、铁自噬以及AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/UNC-51样激酶1(mTOR/ULK1)信号通路相关蛋白表达。 结果:与对照组相比，DCM组大鼠左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与晚期血流速度峰值比值(E/A)均显著降低，舒张末期左心室内径(LVEDd)增加，血清LDH、cTnI、CK-MB升高，心肌组织SOD、GSH降低，丙二醛、ROS和Fe 2＋增加，转铁蛋白受体1(TFR1)、核受体共激活因子4(NCOA4)、LC3-II/LC3-I、Beclin-1、磷酸化AMPK及磷酸化ULK1表达水平升高，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、磷酸化mTOR表达水平降低。与DCM组相比，各治疗组大鼠上述指标均得到显著改善。与TSPJ组相比，AMPK激动剂AICAR能够逆转TSPJ对DCM大鼠心肌细胞铁死亡及AMPK/mTOR/ULK1通路介导的铁自噬作用。 结论:TSPJ能够通过调控AMPK/mTOR/ULK1介导的铁自噬抑制DCM大鼠心肌细胞铁死亡，改善心肌损伤。

目的:探讨一氧化氮（NO）对屏障功能破坏的小鼠表皮增生的影响。方法:将15只SKH1无毛小鼠按随机数字表法分为正常对照组（3只）、S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）处理组（4只）、屏障破坏组（4只）、屏障破坏+SNAP处理组（4只）；将15只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、屏障破坏组、屏障破坏+硝普钠（SNP）处理组，每组5只。正常对照组小鼠背部涂抹丙二醇-乙醇混合溶剂；SNAP处理组仅涂抹SNAP溶液；屏障破坏组采用胶带反复粘贴背部皮肤并涂抹丙二醇-乙醇混合溶剂，每天2次；屏障破坏+SNAP或SNP处理组小鼠经胶带处理后涂抹10 mmol/L SNAP或SNP溶液。各组均连续处理4 d，第5天处死小鼠并取皮肤组织，制作石蜡切片，苏木精-伊红（HE）染色，检测表皮厚度，增殖细胞核抗原（PCNA）染色检测表皮增殖细胞。多组间比较采用双因素方差分析和单因素方差分析，两组间多重比较采用LSD- t检验。 结果:SNAP处理组SKH1小鼠表皮厚度及PCNA阳性细胞数与正常对照组相比差异均无统计学意义（ t值分别为0.33、1.25， P值分别为0.748、0.246）。与正常对照组相比，屏障破坏组SKH1和C57BL/6J小鼠表皮厚度均明显增加，PCNA阳性细胞数均明显增多（均 P < 0.01）。屏障破坏组SKH1小鼠表皮厚度为（50.4 ± 5.4）μm，PCNA阳性细胞数为（87.3 ± 3.8）个/mm，而C57BL/6J小鼠分别为（45.9 ± 3.7）μm和（232.0 ± 19.3）个/mm，与之相比，屏障破坏+SNAP处理组SKH1小鼠及C57BL/6J小鼠表皮均显著增厚[（127.5 ± 12.0）μm，（78.1 ± 7.6）μm，均 P < 0.001]，且PCNA阳性细胞数均明显增多[（120.0 ± 5.0）个/mm，（285.0 ± 15.0）个/mm，均 P < 0.01]。 结论:局部NO供体处理不影响正常表皮增生，但在表皮屏障功能破坏状态下，NO供体促进表皮增生，提示皮肤状态影响局部NO供体对表皮增生的作用。

目的:探讨外源性左旋肉碱对过度内质网应激介导的严重烫伤大鼠肝细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:采用实验研究方法。将15只6~8周龄雌性SD大鼠按随机数字表法（分组方法下同）分为假伤组、单纯烫伤组、烫伤+肉碱组，每组5只，单纯烫伤组和烫伤+肉碱组大鼠背部制作30%体表总面积的Ⅲ度烫伤，其中烫伤+肉碱组大鼠另外给予腹腔注射左旋肉碱。伤后72 h，采用全自动生化仪检测肝损伤生物化学指标天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）水平，样本数为5。伤后72 h，采用苏木精-伊红染色观察肝组织损伤情况。伤后72 h，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-qPCR）法检测肝组织中细胞焦亡相关标志物核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶1（caspase-1）、消皮素D和白细胞介素1β（IL-1β）以及内质网应激相关标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA水平；采用蛋白质印迹法检测肝组织中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为5。取人肝癌细胞HepG2，分为二甲基亚砜（DMSO）组、0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组，分别作相应处理。培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力并筛选衣霉素干预浓度（样本数为5）。取HepG2人肝癌细胞，分为DMSO组、单纯衣霉素组和衣霉素+肉碱组，分别作相应处理。培养24 h后，采用蛋白质印迹法检测细胞中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为3。对数据行单因素方差分析和LSD- t检验。 结果:伤后72 h，单纯烫伤组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（640±22）、（157±8）U/L，均分别明显高于假伤组的（106±13）、（42±6）U/L（ t值分别为-46.78、-25.98， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（519±50）、（121±10）U/L，均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为4.93、6.06， P<0.01）。伤后72 h，假伤组大鼠肝组织形态基本正常，未见明显的炎症细胞浸润；与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织可见大量的炎症细胞浸润，细胞排列紊乱；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织可见少量的炎症细胞浸润。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为34.42、41.93、30.17、15.68， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为34.40、37.20、19.95、7.88， P<0.01）。伤后72 h，与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为12.28、26.92、5.20、10.02、24.78， P<0.01）；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为10.99、27.96、12.69、8.96、12.27， P<0.01）。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显高于假伤组（ t值分别为21.00、16.52， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为8.92、8.21， P<0.01）；单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为22.50、14.29， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为14.29、5.33， P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组细胞存活率均明显下降（ t值分别为4.90、9.35、18.64、25.09， P<0.01）；选择0.8 μmol/L作为后续衣霉素的干预浓度。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为10.48、17.67， P<0.01）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为8.08、13.23， P<0.05或 P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为13.44、27.51， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为20.49、21.95， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）。 结论:在严重烫伤大鼠中，外源性左旋肉碱可能通过抑制过度内质网应激介导的细胞焦亡相关通路发挥对肝损伤的保护作用。

目的:通过体内实验和体外实验探讨地高辛对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠的作用及其可能机制。方法:①体内实验：将60只C57/BL6J小鼠按随机数字表法分为对照组、肺纤维化模型组（模型组）、吡非尼酮（300 mg/kg）组及地高辛1.0 mg/kg、0.2 mg/kg组，每组12只。一次性气管内滴注博莱霉素5 mg/kg制备小鼠肺纤维化模型；对照组给予等量无菌生理盐水。制模后次日起各组灌胃相应药物，每日1次，持续28 d；对照组及模型组给予等量生理盐水。处死小鼠取肺组织，检测肺系数；苏木素-伊红（HE）及Masson染色后，光镜下观察肺组织形态学和胶原变化；采用免疫组化法检测肺组织中肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及细胞外基质（ECM）胶原蛋白（COL-Ⅰ、COL-Ⅲ）阳性表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织中ECM纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）及磷酸化Smad3（p-Smad3）的蛋白表达。②体外实验：体外培养人胚肺成纤维细胞（HFL-1），当细胞密度达到70%~90%时分为空白对照组、细胞活化模型组（模型组）、吡非尼酮（2.5 mmol/L）组及地高辛100 nmol/L、50 nmol/L组。给予相应药物处理3 h后，除空白对照组外，其余各组加入诱导剂TGF-β处理48 h制备细胞活化模型。Western blotting检测细胞中α-SMA、FN、p-Smad3蛋白表达及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路蛋白PI3K、Akt的磷酸化（p-PI3K、p-Akt）水平。结果:①体内实验结果：与对照组比较，模型组小鼠肺泡结构破坏明显，大量炎症细胞浸润，肺间质内胶原沉积，且肺组织中ECM沉积增加，α-SMA、FN、TGF-β、p-Smad3的蛋白表达水平均显著升高，说明博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型制备成功。与模型组比较，地高辛可以显著抑制气道炎症、胶原纤维沉积，减少ECM沉积，降低α-SMA、FN、TGF-β、p-Smad3的蛋白表达，且效果优于吡非尼酮组，除FN外以地高辛1.0 mg/kg组效果更好〔α-SMA（ A值）：5.37±1.10比9.51±1.66，TGF-β蛋白（TGF-β/GAPDH）：0.09±0.04比0.33±0.23，p-Smad3蛋白（p-Smad3/GAPDH）：0.05±0.01比0.20±0.07，均 P<0.01〕。②体外实验结果：与空白对照组比较，模型组细胞FN、α-SMA、p-Smad3及PI3K/Akt信号蛋白表达均增加，表明TGF-β诱导的成纤维细胞活化模型建立成功。与模型组比较，地高辛可以显著抑制成纤维细胞活化，明显降低FN、α-SMA、p-Smad3及PI3K/Akt通路蛋白表达，且效果优于吡非尼酮组，其中以地高辛100 nmo/L组FN、α-SMA及p-Akt表达降低更为明显〔FN蛋白（FN/GAPDH）：0.21±0.15比0.88±0.22，α-SMA蛋白（α-SMA/GAPDH）：0.20±0.01比0.50±0.08，p-Akt蛋白（p-Akt/GAPDH）：0.30±0.01比0.65±0.10，均 P<0.01〕。 结论:地高辛对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化具有保护作用，其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路抑制成纤维细胞活化有关，并呈一定剂量依赖性。