目的 了解西藏自治区亚东县西藏血蜱携带微生物群落的情况及主要病原体无形体的分型.方法 2022年5月在亚东县采集寄生于牦牛身上的蜱虫样本141只.根据硬蜱线粒体16SrDNA基因扩增序列进行分子鉴定以确定蜱种.采用IlluminaNovaseq6000平台对西藏血蜱进行高通量测序,将测序得到的原始数据处理后对其进行组装、基因预测、丰度分析和分类学预测.利用巢式PCR扩增无形体的16SrDNA基因片段并测序及进行序列的遗传进化分析.结果 121只成蜱样本鉴定为西藏血蜱.非冗余数据集经NCBI-NR数据库比对进行物种注释后,最常见的微生物种类是真核生物(19.78％)和细菌(13.54％).在细菌中,优势门分别是变形杆菌门、拟杆菌门和厚壁菌门;优势属分别是无形体属、锥虫属、冷杆菌属和立克次体属;优势种分别是嗜吞噬细胞无形体、泰勒虫和斑点热群立克次体.无形体的系统发育树与绵羊无形体遗传距离最近,具有较高的同源性.结论 西藏自治区亚东县地区优势蜱种为西藏血蜱.无形体的主要分型为绵羊无形体.当地人畜暴露在多种蜱传病原体中,存在潜在蜱传疾病的威胁,应针对性加强对蜱的监测和预防控制工作.

采用传统培养法分离内蒙古黄土丘陵区生物结皮的藓类植物优势种——短叶对齿藓(Didymodon tectorum)的内生细菌,并观察代表菌株的发酵产物对宿主植物孢子萌发及原丝体生长的影响.共分离出68株内生细菌,基于16SrDNA序列同源性分析及构建的系统发育树显示,它们分属于芽孢杆菌属(Bacillus)下的7个种,其中优势种为枯草芽孢杆菌(B.subtilis).枯草芽孢杆菌菌株DT-1和蜡样芽孢杆菌菌株DT-9的石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物在1 μg/mL、10 μg/mL及100 μg/mL三种浓度下对孢子萌发均无显著影响;石油醚相萃取物在3种浓度下不同程度地抑制原丝体生长;而乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物则促进原丝体的生长.本研究表明苔藓植物原丝体阶段的生长发育与内生细菌的次生代谢物密切相关,可为干旱、半干旱区藓类生物结皮人工促建提供参考资料和实验依据.

对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行形态学和分子生物学鉴定,对其抑菌活性进行初步研究,并从基因水平分析微杆菌产生卤化次级代谢产物的潜力.利用平板划线法对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行分离和纯化,革兰氏染色后进行光学显微镜观察,并利用16S rDNA PCR、BLAST同源性比对和构建系统发育树等方法对分离菌株进行分子生物学鉴定以及部分抗生素合成关键酶基因的筛选.在此基础上,以8株常见致病菌为指示菌,利用牛津杯法对分离菌株的抑菌活性进行初步研究.分离得到的8株微杆菌其菌落颜色呈淡黄色或白色;16S rDNA基因测序和BLAST比对结果表明,该8株微杆菌与已知微杆菌同源性均达到98％以上,系统发育树结果表明8株微杆菌与土壤、海洋来源的微杆菌同源性较高.部分抗生素合成关键酶基因筛选结果表明8株微杆菌中有6株至少对FADH2-依赖性卤化酶、非核糖体多肽合成酶(NRPS)及I型聚酮合酶(PKSI)3种基因中的2种呈阳性表达.抑菌实验显示,8株微杆菌中有6株微杆菌对受试真菌和细菌的生长表现出了不同程度的选择性抑制作用,表明美洲大蠊肠道存在具有抑菌活性的内生微杆菌.

[目的]本文从分子水平对双工土白蚁Odontotermes dimorphus Li et Xiao、中华钩扭白蚁Pseudocapritermes sinensis Ping et Xu、商城奇象白蚁Mironasutitermes shangchengensis Wang et Li 3种白蚁科高等白蚁进行鉴定和系统发育分析.[方法]利用PCR方法对上述3种高等白蚁线粒体16S rDNA和Cytochrome oxidase Ⅱ(COⅡ)基因进行扩增、测序,经比对和碱基分析后上传至GeneBank,并在数据库中选取白蚁相应基因进行遗传距离和差异碱基数目计算及系统发育研究.[结果]16S rDNA和CO Ⅱ基因片段长度分别约385 bp和720bp,两个基因的AT碱基含量均远远大于GC,16S rDNA基因与3种高等白蚁遗传距离和差异碱基数目最少的是0.102和35,CO Ⅱ基因为0.024和16,由16SrDNA和CO Ⅱ两个基因构建的的系统发育树不一致,CO Ⅱ基因构建的系统发育树比16S rDNA基因更符合科、属的关系.[结论]通过16S rDNA和CO Ⅱ基因序列均可将上述3种高等白蚁与其它白蚁区别开,CO Ⅱ基因比16S rDNA基因更适合研究白蚁的系统发育研究,与3种白蚁亲缘关系最近的分别是黑翅土白蚁Odontotermes formosanus、台湾华扭白蚁Sinocapritermes mushae和高山象白蚁Nasutitermes takasagoensis.

目的 对β溶血表型摩根摩根菌进行准确的鉴定和系统发育分析.方法 常规方法分离培养菌株;先后采用VITEK?2 Compact全自动微生物鉴定仪、机制辅助激光解析离子?飞行时间质谱仪(MALDI?TOF?MS)、16S rDNA测序3种方法对菌株进行鉴定并验证其结果的正确性;基于16S rDNA的同源性分析和系统发育树构建;并对溶血基因的检测.结果 采用16S rDNA序列同源性分析结合构建系统发育树分析,鉴定菌株(标本编号:U1901)与摩根摩根菌摩根亚种NBRC 3848形成一个分支,同源性和可信度均达99.99％,同时验证了MALDI?TOF?MS的鉴定结果比VITEK?2 Compact全自动微生物鉴定仪准确及时.检测出新表型摩根摩根菌(β溶血表型).结论 16S rDNA序列同源性分析与系统发育树构建相结合,准确鉴定出新型表型的摩根摩根菌(β溶血表型).MALDI?TOF?MS在病原微生物检测和鉴定中具有快速、准确等优点,可为临床治疗提供快速的诊断依据.

为了获得邻苯二甲酸酯(PAEs)生物降解菌,从农田土壤筛选出一株能够以PAEs为唯一碳源和能源生长的微生物,命名为SD2.采用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到其16S rDNA并构建分子系统发育树,可鉴定出其为冢村菌(Tsukamurella).研究该菌株在不同的温度、pH值和转速条件下对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的降解情况,同时采用高效液相色谱(HPLC)测定该菌株对DBP的降解能力.结果表明,SD2对DBP的最佳降解条件为:温度为30℃,pH值为9,转速为150 r/min.在该最佳条件下,SD2在72 h内可以完全降解500 mg/L的DBP.底物广谱试验表明,该菌能够降解长短链的PAEs化合物及常见的代谢产物.同时采用气相质谱联用仪(GC-MS)检测发现,DBP在降解的过程中产生了中间代谢产物邻苯二甲酸丁基甲酯和邻苯二甲酸(PA),预示着该菌具备完全降解DBP的能力.这是首次关于冢村菌降解PAEs污染物的报道,能够为PAEs污染环境的生物降解及修复提供新的微生物资源.

目的 筛选和鉴定淡豆豉炮制过程中产纤溶酶的优势菌株.方法 按《中国药典》2020年版制备淡豆豉;采用酪蛋白平板法和纤维蛋白平板法分别对淡豆豉炮制不同时间点样本中产纤溶酶的微生物进行初筛和复筛;将产纤溶酶微生物分别接种在特定的液体培养基中培养,获得纯种发酵液,用纤维蛋白平板法测定发酵液的纤溶酶活力;应用16SrDNA和18S rDNA通用引物分别对产纤溶酶细菌和真菌进行PCR扩增、对扩增产物进行测序,测序结果通过NCBI同源性比对、MEGA 4.1软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定.结果 筛选获得3种产纤溶酶细菌,分别为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia、微球菌Micrococcus.纤维蛋白平板法测定纯种发酵液纤溶酶活力的结果显示,嗜麦芽窄食单胞菌所产纤溶酶活力最高,达527.49 IU/mL.结论 淡豆豉炮制过程中存在高产纤溶酶的优势菌株,淡豆豉的溶栓作用值得进一步研究.为揭示淡豆豉炮制中纤溶酶形成机制奠定基础.

为实现生活污水中磷的生物降解和有效处理,从兰州市某生活污水处理厂分离出一株除磷菌开展强化生物除磷的研究.(1)结合生理生化特性鉴定、16SrDNA测序分析和系统发育树构建,结果显示该菌株与产酸克雷伯氏菌株(Klebsiella oxytoca strain)具有很高的同源性.(2)按5％(V/V)的接种量将该菌接种到复筛培养基中,在30℃,150 r/min的恒温振荡培养箱中进行培养,每隔12 h测定TP浓度,对其降解特性进行初步研究发现该菌在72 h内对TP的降解率为58.52％.(3)考察碳源、氮源和C/N最优条件,得出此菌株最适碳源为葡萄糖、最适氮源为硫酸铵、最佳C/N为5∶1.(4)考察接种量、pH、温度、初始NaCl浓度和初始磷酸盐浓度等因素适应性,得出当接种量8％(V/V)、pH 9、温度30℃、初始NaCl浓度2.5 g/L、初始磷酸盐浓度70mg/L时该菌株对TP的降解率最佳,分别为75.94％、90.19％、65.48％、57.02％、52.26％;同时,当接种量2％-14％(V/V)、pH 4.0-9.0、温度15-40℃、初始NaCl浓度0-15g/L、初始磷酸盐浓度45-90 mg/L时该菌株对TP均具有不同程度降解能力,且相关性分析显示,菌株TP降解率与接种量、pH、初始NaCl浓度和初始磷酸盐浓度相关性显著.(5)考察该菌株与其他菌株相互作用,将该菌株与一株铜绿假单胞菌进行复配,发现两者能协同增强除磷,两者比例4∶1时,TP降解率能达到99.43％.本实验为除磷菌株下一阶段的实际应用奠定了基础,并为生物强化除磷技术提供了更多的菌种选择.