目的 探讨儿童自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型(APS-Ⅰ)临床特征及AIRE基因变异.方法 回顾分析河南省儿童医院2019年5—10月收治的2例APS-Ⅰ病儿临床资料,并复习相关文献,对已报道中国儿童APS-Ⅰ临床表型及基因型进行总结.结果 2例男性APS-Ⅰ病儿,病例1,12岁,3岁慢性念珠菌感染,12岁重度贫血;病例2,15岁,7岁甲状旁腺功能减退,8岁慢性念珠菌感染,15岁肾上腺皮质功能减退症和重度贫血.高通量测序提示AIRE基因变异,病例1为c.44G>A(p.R15H)和c.1036C>T(p.Q346*)杂合突变,病例2为c.38T>C(p.L13P)和c.1400+2T>C杂合突变,其中c.1036C>T(p.Q346*)和c.1400+2T>C为HGMD及ClinVar数据库未报道过的变异位点,经美国人类遗传学和基因组学医学学会(ACMG)指南评估分别为疑似致病及致病变异.2例病儿给予药物治疗后临床症状缓解.分别检索PubMed、万方和CNKI数据库,共检索到22例确诊为APS-Ⅰ中国病儿,包括本研究2例,共24例,其中15例基因诊断,有14种基因变异,无热点变异,9例临床诊断.结论 新的变异位点扩大了AIRE基因变异谱,APS-Ⅰ临床表现多样,且出现时间跨度大,相关抗体及AIRE基因检测有助于疾病早期诊断,多学科诊疗提供个体化的治疗策略.

本文报道一例中年起病的女性患者，先后出现肾上腺皮质功能减退症、甲状旁腺功能减退症和亚临床甲状腺功能减退症，在内分泌科疑诊为自身免疫性多内分泌腺病1型（APS1），给予对症治疗。同时伴有皮肤多发血管瘤，进行性加重的多浆膜腔积液、肝脾大、周围神经病变，影像学提示肋骨、椎体骨质密度增高，后查外周血血管内皮生长因子（VEGF）水平升高，AIRE基因阴性，在血液科诊断为POEMS综合征。应用全身化疗后多系统损害得到缓解，肾上腺皮质功能和甲状旁腺功能有所恢复，对症治疗药物可减量或停用。本例提示中年起病的类APS1表现需考虑到其他疾病的可能，POEMS综合征患者出现的内分泌系统损害需长期随访，有病情缓解药物减量的可能。

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知.目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系.方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化.结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低.综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程.

目的 探索γ射线照射诱导胸腺损伤后胸腺内IL-22表达水平的变化趋势,并研究IL-22在胸腺损伤后T细胞免疫重建中的作用.方法 建立非致死剂量γ射线照射诱导的小鼠胸腺损伤模型,分别设置正常对照组和全身照射(TBI)组,ELISA法检测小鼠胸腺及血浆中IL-22的含量;分别给予TBI组小鼠PBS或重组小鼠IL-22腹腔注射处理,设为TBI+PBS组和TBI+IL-22组,计数胸腺内总细胞和外周血白细胞含量,同时使用流式细胞术分析胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TEC)、各阶段胸腺细胞以及外周血T细胞的含量,实时定量PCR分析胸腺中与TEC功能相关的基因Foxn1、Ccl25、Aire和Dll4的mRNA表达水平.结果 ①照射后小鼠胸腺内IL-22表达水平高于未经照射处理的正常对照小鼠(P值均＜ 0.05);②给予TBI组小鼠IL-22腹腔注射后,TBI+IL-22组小鼠胸腺内IL-22含量高于TBI+PBS组(P值均＜0.05);③照射后第14天,TBI+IL-22组胸腺内Foxn1、Ccl25、Aire和Dll4mRNA表达水平均高于TBI+PBS组(P值均＜0.05),同时,TBI+IL-22组胸腺总细胞计数[(5.93±3.19)×106/ml对(1.42±0.46)×106/ml,t=3.128,P=0.033]和外周白细胞计数[(3.08±0.94)×106/ml对(1.43±0.30)×106/ml,t=3.730,P=0.015]均高于TBI+PBS组.流式细胞术分析示,照射后第14天TBI+IL-22组小鼠胸腺内TEC和各胸腺细胞亚群含量均高TBI+PBS组(P值均＜0.05),照射后第7天和14天TBI+IL-22组外周血T细胞含量均高于TBI+PBS组(P值均＜0.05).结论 γ射线照射处理可导致小鼠胸腺内IL-22的含量升高,注射外源性IL-22可增加胸腺内IL-22含量.输注外源性IL-22可促进受损胸腺内TEC功能的修复,并增加各胸腺细胞亚群以及外周血中T细胞的数量.

自身免疫性多发性内分泌腺病综合征(APS)是免疫耐受机制破坏导致多个内分泌腺体功能受损的一组临床综合征.根据遗传学特征等差异,APS被分为三类:APS-1型,APS-2型以及X连锁多内分泌腺功能障碍IPEX.APS-1型是由于自身免疫调节基因(AIRE)突变导致的常染色体单基因遗传病,APS-2型是一组多基因(HLA及非HLA基因)遗传相关器官特异性自身免疫性疾病,而IPEX则与FOXP3基因突变相关.APS患者相关自身抗体的出现往往预示器官功能的损伤,诊断时测定自身抗体较基因检测具有更高的性价比.及早精确诊断并采用免疫调节治疗有可能阻止器官发生不可逆免疫损伤.

自身免疫性多内分泌腺病综合征 1 型( polyglandular autoimmune syndrome type 1, PAS1) , 亦被称为自身免疫性多内分泌腺病-念珠菌病-外胚层营养不良( autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectoderm dystrophy, APECED)综合征,是一种罕见的常染色体隐性遗传病,由自身免疫调节基因(autoimmune regulator AIRE)突变导致[1-2]. 该基因编码的蛋白在调节组织限制性外周抗原的表达和随后的自身反应性T细胞的阴性选择方面发挥重要作用[3]. PAS1型通常在儿童期或青春期早期发病,典型临床表现为慢性皮肤黏膜念珠菌病、甲状旁腺功能减退和原发性肾上腺皮质功能减退症( Addison病) [2,4].

目的 分析1例自身免疫性多内分泌腺病综合征I型家系的自身免疫调节因子(autoimmune regulator,AIRE)基因突变.方法 采集家系成员外周血标本,PCR扩增和Sanger测序筛查AIRE上的突变位点,采用构建酶切位点PCR(created restriction site PCR,CRS-PCR)和PCR-限制性片段长度多态性法(PCR restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)在100例健康人群中筛查验证,应用SIFT、PolyPhen-2、Mutation Taster、Antheprot Editor软件分析突变对蛋白质结构和功能的影响,使用Alternative Splice Site Predictor、FruitFly Splice Predictor、SplicePort软件预测突变对mRNA剪切位点的影响,并以Sanger测序验证.结果 在先证者AIRE基因上筛选出新的复合性杂合突变c.47 C>G T16R和c.1631-2 A>T.c.47位点在不同物种中高度保守和同源性,c.47C>G的错义突变改变蛋白质的二级结构和疏水性,影响蛋白质的功能.c.1631-2 A>T突变会引起剪切位点消失,造成靶mRNA上13号外显子缺失.结论 在自身免疫性多分泌腺病综合征Ⅰ型的家系中发现2个新的致病突变位点,分别为c.47C>G T16R和c.1631-2 A>T.

目的 自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型(APS-Ⅰ)是由自身免疫调节因子(AIRE)基因突变导致的罕见遗传病.本研究对2例APS-Ⅰ患者进行临床特征及AIRE基因分析,以提高对此病的认识.方法 采集2例APS-Ⅰ患者及家属外周血并提取DNA,应用PCR扩增AIRE基因,通过生物信息学进行功能预测,并选取100名健康对照,对新突变位点进行检测.结果 病例1为31岁女性,10岁出现手足指甲念珠菌样改变,后诊断为原发性甲状旁腺功能减退症、Addison病、桥本甲状腺炎及卵巢功能早衰.AIRE基因检测发现该患者为c.483484insC纯合突变,其父母、弟弟均为c.483484insC杂合突变,符合常染色体隐性遗传.病例2为34岁男性,幼时出现手足指甲念珠菌病样改变,后诊断为Addison病、原发性甲状旁腺功能减退症及桥本甲状腺炎.AIRE基因检测发现该患者有c.179A>G及c.463+2T>C复合杂合突变,其父有c.179A>G杂合突变,其母有c.463+2T>C杂合突变,符合常染色体隐性遗传.AIRE基因c.483484insC突变可造成AIRE蛋白截短,c.463+2T>C突变位于内含子3的5'端高度保守剪切位点,这2个突变均曾报道为致病突变,而c.179A>G突变经SIFT及PolyPhen-2生物信息学预测为致病性突变,在100名健康人群中未检出,人类基因突变数据库(HGMD)未见报道,认为是新发突变.结论 本研究发现了1个新的AIRE基因突变c.179A>G,拓宽了对APS-Ⅰ发病机制的认识.APS-Ⅰ临床表现多样,易误诊及漏诊,早期识别APS-I相关症状,加强基因筛查及随访有助于本病的早期诊断及治疗.

背景:自身免疫性疾病主要是由于胸腺内自身组织特异性抗原持续表达缺失而引起强烈免疫应答的一类疾病,而胸腺功能减退和胸腺内组织特异性抗原的不稳定表达会限制治疗效果.胸腺组织主要由胸腺上皮细胞组成,但胸腺内成熟胸腺上皮细胞和胸腺上皮祖细胞有限的数量来源极大限制了相关研究.目的:研究小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化过程中自身免疫调节因子的表达变化.方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,分别收集定向诱导分化第0,3,13天细胞,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time PCR检测相关基因及蛋白的表达变化.结果与结论:①诱导分化第0天,免疫荧光检测OCT4、SSEA1表达阳性;诱导分化第3天,免疫荧光检测SOX17、FoxA2呈双阳性表达;诱导分化第13天,流式细胞术检测EpCAM1、K5、K8表达阳性;②Real-time PCR检测小鼠胚胎干细胞定向分化过程中PAX1、PAX9、FOXN1、PLET1基因表达逐渐增高;③Real-time PCR检测分化第0,3,13天AIRE基因表达升高,INS2、GAD67基因表达也升高;④Western blot检测分化第0,3,13天AIRE蛋白表达降低,胰岛素蛋白、GAD67蛋白均无表达;⑤结果表明,小鼠胚胎干细胞成功分化为胸腺上皮祖细胞,且分化而来的胸腺上皮祖细胞中AIRE基因表达很高,促进了INS2、GAD67基因的表达,为细胞移植治疗自身免疫性疾病提供评价依据.

自身免疫增多内分泌病变—念珠菌病—外胚层营养不良（APECED）是唯一一个单基因背景且位于MHC外的自身免疫病。APECED病的生化缺陷目前还不清楚。芬兰和日本的二个研究小组几乎同时完成了APECED基因的定位克隆，认为AIRE基因突变是APECED的致病原因，他们的研究为探索自身免疫病的分子基础提供了工具。