目的:尿集聚蛋白羧基片段（uCAF）酶促化学发光免疫检测方法性能评估并探讨其在早期2型糖尿病肾病进展监测中的价值。方法:收集2018年10月至2020年3月就诊于温州医科大学附属第二医院的2型糖尿病患者251例进行回顾性分析，将2021年2月浙江大学医学院附属第二医院的健康体检者156例作为对照。记录患者临床基础信息、糖化血红蛋白和血清肌酐值等，收集尿液标本进行尿肌酐、尿α 1微球蛋白（uα 1M）、尿免疫球蛋白G（uIgG）、尿白蛋白、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（uNAG）和uCAF检测。评估uCAF酶促化学发光免疫测定方法最佳反应条件、线性范围、检测限和批内批间变异系数。根据估算的肾小球滤过率（eGFR）将251例患者分为G1~G5期，分别为116、22、28、55和30例；再将166例早期糖尿病肾病（G1~G3期）患者按尿白蛋白/肌酐比值（UACR）分为A1亚组（79例）、A2亚组（48例）和A3亚组（39例），根据uα 1M水平分为uα 1M 亚组1（83例）、uα 1M 亚组2（42例）、uα 1M 亚组3（41例），根据uIgG水平分为uIgG 亚组1（83例）、uIgG 亚组2（42例）、uIgG 亚组3（41例）。采用Spearman法分析uCAF水平与eGFR、UACR、uα 1M和uIgG水平的相关性。 结果:（1）uCAF酶促化学发光免疫测定方法的线性范围为3.97~2 000.00 ng/ml，检出限为2.28 ng/ml，批内变异系数为1.15%、1.57%，批间变异系数为1.63%、5.78%，生物参考区间<95.35 μg/g Cr；（2）G1~G3期uCAF水平和阳性率（UACR≥30 mg/g）随着eGFR下降而升高，uCAF水平与eGFR值呈负相关（ r=-0.543， P<0.000 1），阳性率由24.14%（28/116）升高至85.71%（24/28）。G4~G5期uCAF水平和阳性率随着eGFR下降而下降，uCAF水平与eGFR值呈正相关（ r=0.495， P<0.001），阳性率由30.91%（17/55）降至23.33%（7/30）；（3）早期糖尿病肾病患者随着UACR的升高，uCAF水平和阳性率也逐渐升高，uCAF水平与UACR值呈正相关（ r=0.602， P<0.001），A1亚组中uCAF阳性率达21.52%（17/79）；（4）早期糖尿病肾病患者uCAF水平与uα 1M、uIgG水平均呈正相关（ r=0.757、0.596， P均<0.001）。 结论:酶促化学发光免疫分析用于检测CAF有良好的分析性能，是监测早期2型糖尿病肾病损伤和进展的生物标志物。

目的:探索衰弱、血清C-末端聚集蛋白(CAF)与老年急性冠脉综合征(ACS)患者预后的相关性。方法:前瞻性队列，连续收集2020年1月至2022年5月北京博爱医院经急诊收入老年ACS患者207例的临床资料；入组后24 h内留取血清标本检测CAF水平；进行心肌梗死溶栓治疗临床试验(TIMI)评分、衰弱筛查问卷(FSQ)评分；随访患者90 d内发生主要不良心脑血管事件(MACCE)的情况。采用多因素Logistic回归方程分析MACCE的影响因素；采用受试者工作特征(ROC)曲线评价FSQ评分、血清CAF及二者联合对MACCE的预测能力。根据90 d生存情况分为存活组(176例)和死亡组(31例)，采用Cox比例风险回归模型进行生存分析。结果:发生MACCE组FSQ评分( Z＝4.412， P<0.001)、血清CAF( Z＝6.702， P<0.001)均高于未发生MACCE组；Logistic回归分析显示，调整年龄、性别、TIMI评分、完全血运重建4个因素后，FSQ定义的衰弱( OR＝1.714；95% CI：1.059～2.775； P＝0.028)、血清CAF升高( OR＝1.230；95% CI：1.122～1.350； P<0.05)均是ACS后发生MACCE的独立危险因素。FSQ评分预测MACCE的ROC曲线下面积(AUC)为0.797(95% CI：0.735～0.850； P<0.001)，预测切点为>2分，约登指数(YI)＝0.419，敏感度0.708，特异度0.711；CAF预测MACCE的AUC为0.766(95% CI：0.701～0.822； P<0.001)，预测切点为>6.01 μg/L，YI＝0.460，敏感度0.750，特异度0.710；二者联合的预测效能高于单独应用FSQ评分( Z＝2.294， P＝0.022)或CAF( Z＝2.545， P＝0.011)。Cox回归分析显示，FSQ定义的衰弱( HR＝3.487；95% CI：1.329～9.153； P＝0.011)与ACS发生90 d全因死亡独立相关。 结论:开展衰弱筛查、检测血清CAF水平可能改善老年ACS患者的危险分层。

创面愈合的实现涉及集体性的表皮细胞增殖和迁移，创面愈合的组织微环境中的分子因素的作用仍不明确。研究人员观察到蛋白聚糖聚集蛋白（Agrin），在早期创面微环境中富集，是创面发生有效愈合不可或缺的因素。Agrin在对抗基质刚度的过程中，通过增强KC的刚度、牵引应力和流体速度场来增强KC的机械感知，Agrin一旦感知到损伤引起的几何应力的变化，即会通过增强肌动球蛋白索全面检查细胞骨架结构。此外，研究人员还观察到基质金属蛋白酶12(MMP-12)是Agrin机械感知的下游效应物。该研究进一步揭示了重组Agrin片段作为生物添加材料的巨大潜力，该材料融合了最佳的机械生物学和促血管生成效能，通过调控MMP-12加速创面愈合。该研究提出Agrin-MMP-12通路整合了广泛的机械刺激，促成了高效的创面愈合环境。

Amyotrophic lateral sclerosis(ALS)is a devastating motoneuron disease,in which lower motoneurons lose control of skeletal muscles.Degeneration of neuromuscular junctions(NMJs)occurs at the initial stage of ALS.Dipeptide repeat proteins(DPRs)from G4C2 repeat-associated non-ATG(RAN)translation are known to cause C9orf72-associated ALS(C9-ALS).However,DPR inclusion burdens are weakly correlated with neurodegenerative areas in C9-ALS patients,indicating that DPRs may exert cell non-autonomous effects,in addition to the known intracellular pathological mechanisms.Here,we report that poly-GA,the most abundant form of DPR in C9-ALS,is released from cells.Local administration of poly-GA proteins in peripheral synaptic regions causes muscle weakness and impaired neuromuscular transmission in vivo.The NMJ structure cannot be maintained,as evidenced by the fragmentation of postsynaptic acetylcholine receptor(AChR)clusters and distortion of presynaptic nerve terminals.Mechanistic study demonstrated that extracellular poly-GA sequesters soluble Agrin ligands and inhibits Agrin-MuSK signaling.Our findings provide a novel cell non-autonomous mechanism by which poly-GA impairs NMJs in C9-ALS.Thus,targeting NMJs could be an early therapeutic intervention for C9-ALS.

目的:运动神经源性聚集蛋白诱导骨骼肌表面乙酰胆碱受体(AChR)聚集簇的形成是神经肌肉接头(NMJ)的关键步骤.本研究旨在利用高通量深度测序技术,筛选调控成肌分化和AChR聚集簇形成相关的关键信号通路和潜在的重要靶基因.方法:建立小鼠成肌细胞系C2C 12成肌分化和聚集蛋白诱导肌细胞表面AChR聚集簇形成的细胞模型,通过高通量深度测序技术检测C2C12成肌分化前后,以及聚集蛋白刺激分化肌管形成AChR聚集簇前后转录水平差异表达基因,并对测序结果进行Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析.结果:GO分析发现,成肌分化前后与聚集蛋白刺激肌管形成AChR聚集簇前后差异基因表达分子的分布、参与的生物学过程及其发挥的分子作用较为相似,均主要存在于细胞器和细胞膜,参与细胞基础代谢过程,主要发挥蛋白结合和催化反应功能.KEGGpathway分析发现,C2C12细胞成肌分化前后差异基因主要富集于聚集蛋白骨架蛋白调控信号和细胞黏附作用等,而聚集蛋白诱导肌管表面AChR聚集簇形成前后差异表达基因则主要集中于轴突导向信号、Wnt信号和肿瘤相关信号等.结论:挖掘出一批可能参与成肌分化和聚集蛋白依赖的AChR聚集簇调控的候选基因,相关分子在成肌分化和AChR聚集簇形成过程中的功能及其调控机制有待进一步深入验证.

低密度脂蛋白受体相关蛋白4 (low-density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)在2010年被报道确认为CLS型并指综合征(Cenani-Lenz syndactyly syndrome)的致病基因,相继有文献报道了LRP4的突变会造成17型先天性肌无力症(myasthenic syndrome,congenial 17)和二型硬化性骨病(sclerosteosis 2).LRP4参与调节经典WNT信号通路和MAPK/JNK信号通路,在神经肌肉接头中与MUSK/AGRIN组成复合物,调节突触后转化.LRP4参与肢端、神经肌肉接头、肾脏、乳腺和牙齿的发育形成,参与骨代谢进程.现将重点介绍LRP4在人类中所引起的3种单基因疾病和从遗传发育角度综述目前关于LRP4的研究进展,对未来深入研究LRP4在脊椎动物早期发育中的功能机制提供一定的参考.

Agrin是一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan ,HSPG) ,作为一种重要的细胞外基质(extracellular matrix ,ECM )成分 ,在骨骼肌发育[1 ] 、神经-肌接头形成[2 ] 、造血[3 ] 、炎症[4 ]等过程中发挥重要作用.人 A g rin由位于1 号染色体的AGRN基因编码 ,含有9个卵泡抑制素样结构域、4个表皮细胞生长因子(epidermal grow th factor , EG F )样结构域、1个层粘连蛋白B样结构域和3个层粘连蛋白G样结构域 ,还含有2个富含丝苏氨酸的区域[2] .AGRN基因通过不同的剪切模式,可产生长与短2种具有组织表达特异性的不同亚型.2种亚型氨基端起始长度不同 ,稍短的亚型有氨基端跨膜区域 ,为膜蛋白,主要表达于大脑中 ;稍长的亚型无氨基端跨膜区域 ,为存在于细胞外基质的分泌蛋白 ,广泛表达于大脑以外的多种组织中 ,如神经-肌接头、心脏等[2 ] .

目的 探讨聚集蛋白(agrin)对脓毒症大鼠骨骼肌烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)亚型异化表达的作用.方法 采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型.48只2月龄健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、假手术+agrin组(ShamA组)、脓毒症组(CLP组)和脓毒症+agrin组(CLPA组),每组12只.假手术组仅暴露腹腔不进行盲肠结扎穿孔手术,ShamA组和CLPA组在建模后胫前肌内注射100 μg/mL agrin溶液0.1 mL.建模后第48小时取大鼠血液样品,检测血浆中炎症因子IL-6水平.行复合肌动作电位(compound muscle action potential,CMAP)检测其振幅、时程、潜伏期及神经传导速度.Western blot和免疫荧光检测大鼠胫前肌组织γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达.结果 Sham组和ShamA组血浆IL-6水平明显低于CLP组和CLPA组(P＜0.05).与Sham组和ShamA组比较,CLP组与CLPA组CMAP时程、潜伏期延长(P＜0.05),γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达升高(P＜0.05),而CMAP振幅及传导速度降低(P＜0.05).与CLP组比较,CLPA组的CMAP时程、潜伏期缩短(P＜0.05),γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达降低(P＜0.05),而CMAP振幅及传导速度升高(P＜0.05).结论 Agrin可以减轻脓毒症导致的神经肌肉功能障碍并减少异质化烟碱型乙酰胆碱受体的表达.

目的 检测老年心力衰竭(简称心衰)患者血清集聚蛋白C末端片段(C-terminal agrin-fragment,CAF)水平,分析其与心衰并发肾损伤的相关性.方法 收集2013年12月至2014年12月在皖南医学院弋矶山医院住院的NYHA分级3～4级的老年心衰患者180例;根据是否eGFR＜ 60 mL/(min·1.73 m2),将入选的心衰患者分为肾损伤组和非肾损伤组.比较两组间临床特征、实验室检查指标及血清CAF水平.结果 心衰患者中有71例患者并发肾损伤,肾损伤组血清CAF水平显著高于非肾损伤组(ng/L:975±369 vs.712±350,P=0.028).相关性分析显示,心衰并发肾损伤与CAF水平密切相关(r=0.249,P=0.001),在校正年龄、性别、血肌酐、胱抑素C等因素后,CAF升高仍是肾损伤的危险因素之一(OR=1.102,95％CI 1.008～1.118,P＜0.045).受试者工作特征曲线(ROC)分析显示,CAF＞ 760.7 ng/L判断肾损伤的AUC为0.690,预测敏感度0.842,特异度为0.423.结论 部分心衰患者并发肾损伤,其血清CAF水平升高,并与肾功能密切相关,异常升高的血清CAF对判断心衰并发肾损伤有重要的临床意义.

转移、侵袭和免疫逃避是肿瘤的重要生物学特性,聚集蛋白Agrin结合低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low density density lipoprotein receptor related protein 4,Lrp4),参与肿瘤的侵袭与迁移.此外,Agrin还促进血管形成,并通过 α-肌萎缩蛋白聚糖(α-dystroglycan)促进T细胞免疫应答,稳定免疫突触,在肿瘤的免疫微环境中扮演着重要的角色.深入研究恶性肿瘤以及免疫细胞中的Agrin,探索其作用机制,可能为肿瘤的免疫治疗提供新方向.现就Agrin的研究现状,特别是其在恶性肿瘤与免疫作用的相关方面研究进行总结与分析.