目的:了解2015—2020年流感流行季北京市流感流行特征。方法:使用北京市2015—2020年流感样病例(influenza-like illness，ILI)和流感病原学监测数据，分析流感流行趋势和流感病毒流行特征。结果:2015年第27周至2020年第26周共涉及5个流感流行季，流感样病例百分比(percentage of influenza-like illness，ILI%)为1.58%。共检测ILI标本96 892件，流感病毒核酸阳性率为16.32%，其中A(H3N2)亚型6 474件(40.89%)、甲型H1N1 4 410件(27.86%)、乙型Victoria系3 290件(20.78%)、乙型Yamagata系1 597件(10.09%)。ILI周报告数、ILI%与流感病毒阳性率变化趋势基本一致( r＝0.796， P<0.001； r＝0.808， P<0.001)。2017—2018年和2018—2019年流行季活跃期较长。2017—2018、2018—2019年流行季ILI周报告数较高(49 628人次和71 555人次)，核酸阳性率峰值较高(58.51%和57.08%)。 结论:2015—2020年北京市流感流行符合北半球流行特征，其中2017—2018和2018—2019流行季活跃期较长、流行水平较高，且各流行季优势毒株不同。

目的:分析济宁市2017—2020年度乙型流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因变异情况及分子进化特征。方法:采集2017—2020年度济宁市哨点医院和流感暴发疫情病例咽拭子标本，进行核酸检测、病毒分离，选取20株乙型流感病毒代表毒株进行 HA和 NA基因测序，利用生物信息学软件构建进化树并分析分子进化特征。 结果:2017—2020年度共监测病例标本4 575例，流感病毒阳性842例，其中乙型流感病毒阳性398例，阳性率8.70%(398/4 575)，占比47.27%(398/842)。2017—2020年度济宁分离的BV系和BY系流感病毒与疫苗株比， HA基因同源性分别为98.7%～98.8%、98.5%～99.1%。2018—2020年度BV系流感归属于Victoria clade 1A分支，2017—2018年度BY系流感归属于Yamagata clade 3分支。对抗原表位和耐药位点的变异情况进行了分析，发现多处抗原表位发生了变异，但未发现神经氨酸酶抑制剂耐药位点的变异。 结论:2017—2020年度济宁市BV系和BY系乙型流感病毒均发生了数个抗原位点变异，出现了抗原转变，可能是引起乙型流感暴发的原因。

目的:分析上海市松江区2017—2020年乙型流感病毒流行情况及其血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)基因特征。方法:使用实时荧光逆转录-聚合酶链式反应检测流感病毒疑似病例的标本，乙型流感病毒阳性标本接种犬肾细胞和鸡胚培养病毒。对乙型流感毒株HA和NA基因测序，序列进行基因进化及氨基酸变异分析，采用神经氨酸酶抑制实验研究毒株对奥司他韦和扎那米韦的敏感性。结果:2017—2020年度松江区乙型流感病毒阳性率为14.24%(506/3 554)，主要流行季为冬春季，呈现B/Victoria和B/Yamagata亚型交替流行的特点。松江B/Victoria流行株主要位于1A(△3)B进化分支，少数位于1A及1A(△2)分支，与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比，流行株HA和NA核苷酸同源性分别在97.62%~98.19%、98.11%~98.78%，1A(△3)B分支HA蛋白抗原决定簇区突变主要发生在120环和160环。B/Yamagata流行株均位于3进化分支，与疫苗株B/Phuket/3073/2013相比，HA(NA)核苷酸同源性98.71%~99.04%(98.69%~99.27%)，未发现抗原决定簇区氨基酸改变。神经氨酸酶抑制实验显示，所测的乙型流感病毒对奥司他韦和扎那米韦均敏感。结论:2017—2020年乙型流感病毒流行株与疫苗株抗原性匹配度不佳，需持续做好乙型流感病毒监测及病原学特征分析，为流感疫苗筛选及药物研发提供科学依据。

目的:评价四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在小鼠模型中的免疫原性。方法:按照《中国药典》2020年版(三部)的方法对4种单价流感病毒亚单位疫苗原液进行鉴别试验。在研究配伍RFH01佐剂的四价流感病毒亚单位疫苗小鼠模型中，采用随机分组法将460只雌性6~8周龄BALB/c小鼠分为实验组、疫苗对照组、阴性对照组和空白组，共46组，每组10只。在研究四价流感病毒亚单位疫苗在老年和青年小鼠模型中，采用随机分组将80只雌性10月龄和80只雌性10周龄BALB/c小鼠同时分为单价流感病毒疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗+RFH01佐剂组、鸡胚四价流感病毒裂解疫苗对照组和PBS组，共16组，每组10只。均采用肌内注射免疫，初次免疫21 d后，采血分离血清，并用相同程序和剂量进行加强免疫，第42天采血分离血清。血凝抑制试验检测小鼠血清抗体水平。结果:两次免疫后，所有配伍RFH01的疫苗组阳转率均达到100%，且血清抗体效价几何平均滴度(geometric mean titer，GMT)显著高于不含佐剂的疫苗组。配伍RFH01佐剂的单价流感病毒疫苗和四价流感病毒亚单位疫苗组与不配伍RFH01佐剂的单价流感病毒疫苗和四价流感病毒亚单位疫苗组小鼠血清效价差异有统计学意义。两次免疫后，10周龄小鼠血清H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata抗体GMT明显高于10月龄小鼠。结论:单价流感病毒疫苗和四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在青年(6~10周龄)和老年(10月龄)小鼠中抗体效价均显著提高，具有良好的免疫原性。

目的:了解2010—2021年上海市闵行区流感样病例(ILI)的流行病学特征及流感病毒的病原学动态变化趋势。方法:利用上海市闵行区2010年第1周—2021年第52周共12个监测年度间的流感监测哨点医院和流感网络实验室的监测数据进行统计分析。结果:2010—2021年上海市闵行区国家级流感监测哨点医院共报告122 903例ILI，年平均流感样病例百分比(ILI%)为0.94%，总体呈现上升趋势( P<0.001)。ILI中，0~4岁、5~14岁、15~24岁、25~59岁、≥60岁年龄组病例分别占4.35%、13.30%、14.30%、54.32%、13.73%。ILI%呈现明显的周期性，12月—次年2月为冬季高峰，7—9月为夏季高峰，2013年初的冬季高峰有所推延，2021年未出现明显就诊高峰。2010—2021年闵行区共检测ILI标本11 625份，流感病毒阳性率为20.92%(2 432/11 625)，甲型流感病毒阳性率为12.83%(1 492/11 625)，乙型流感病毒阳性率为8.09%(940/11 625)，甲型流感的流行强度高于乙型流感。2010—2021年各型流感病毒的总体阳性率：甲型H3N2(1 051，9.04%)>甲型H1N1(441，3.79%)>乙型Victoria系(313，2.69%)>乙型Yamagata系(255，2.19%)，2010—2019年间上海市闵行区甲型流感与乙型流感交替流行，且每种流行株大概持续半年时间被新流行株所替代，2020、2021年没有明显的规律性。2010—2019年报告的ILI数量和流感病毒阳性率的变化趋势基本一致，2020、2021年的变化趋势有明显差别。 结论:上海市闵行区流感呈现季节性流行，且各亚型流感病毒交替或混合成优势毒株流行，发病集中在冬季和夏季。COVID-19疫情防控期间流感流行强度下降，但伴随疫情防控逐渐常态化，流感流行呈明显上升趋势，故应继续加强流感的防控与监测，并及时对病毒变异情况进行分析。

目的:了解贵州省乙型流感病毒BY系和BV系毒株 HA和 NA基因分子进化特征，为流感的科学防控提供依据。 方法:统计贵州省2017—2021年流感各型别阳性比例，提取乙型流感病毒核酸，RT-PCR扩增 HA和 NA基因，进行序列测定14株，并从GISAID获取83株序列，对合计97株乙型流感病毒的序列进行同源性、遗传进化和氨基酸位点变异分析。 结果:贵州省存在甲型、BY系和BV系流感病毒的流行，BV系为优势流行型别；BY系流感病毒 HA和 NA基因与参考疫苗株B/PHUKET/3073/2013相比同源性分别为98.7%~99.4%和98.4%~99.6%，BV系毒株与参考疫苗株B/Colorado/06/2017相比分别为98.3%~99.3%和98.9%~99.6%；贵州省BY系毒株主要属于Y3遗传群， HA基因处于Y3-H1~2两个分支， NA基因处于Y3-N1~3三个分支，发现3株Y3系内重配株；BV系毒株主要属于V1A-2遗传群， HA基因处于V1A-2 H1~4四个分支， NA基因处于V1A-2 N1~5五个分支，发现20株V1A-2系内重配株，未发现系间重配株；关键氨基酸位点变异分析显示抗原决定簇区域位点Y3遗传群无突变，V1A-2遗传群4个主要的抗原决定簇均存在点突变且190螺旋存在移码突变，耐药位点均未发生突变。 结论:贵州省流感流行型别多样，乙型流感病毒与疫苗株同源性差异在增大， HA和 NA基因已进化出不同分支，基因序列存在多种形式的突变，存在系内重配株和新的变种，应持续加强乙型流感病毒的监测研究。

目的:分析2011-2019年中国B型流感的季节性、年龄分布以及与疫苗的匹配程度，为今后B型流感的监测和疾病负担评价、四价流感疫苗应用、免疫策略制定提供证据。方法:利用全国流感监测网络2011年第14周至2019年第13周的流行病学和病原学监测数据，绘制热图、进行描述性统计，分析B型流感季节性和年龄分布特征。利用流感周报公布的抗原性分析结果，分析B型流感流行株与疫苗毒株的匹配情况。结果:2011-2019年中国B型流感呈现明显的季节性特征，在6个冬春季和A型共同流行，且B/Victoria和B/Yamagata系交替流行，部分南方地区在个别年度出现B型2个系共同流行。B型流感的年龄分布呈双峰，2个系的病毒均在5~15岁组阳性率最高，10岁为峰值；B/Victoria系病毒在25~35岁组为次高峰；B/Yamagata系病毒在55~65岁组为次高峰。B型流感流行株在2015-2016、2017-2018年度与三价流感疫苗所含B型系别不匹配，在2011-2012、2012-2013、2013-2014、2014-2015、2016-2017年度与疫苗所含B型系别匹配，2018-2019年度与疫苗所含B型系别匹配但抗原性中等程度匹配，交叉反应性低。结论:中国B型流感主要在冬春季流行，强度低于A型流感，不同系病毒的年龄分布存在差异，B型流感流行株与疫苗株多个季节不匹配，需持续开展B型流感的监测和疾病负担评价，完善疫苗免疫策略，提高流感疫苗接种率，降低流感对高危人群的危害。

目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白.方法:以B/Singapore/IN-FTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFast-Bac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达.表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性.突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性IgG抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平.结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在.三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的IgG抗体和HAI抗体.结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体.研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考.

目的:制备Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白（hemagglutinin，HA）的特异性单克隆抗体，建立检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法:用Yamagata系乙型流感病毒（B/Phuket/3073/2013）抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体，建立一种检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果:该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔，检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔；该方法仅能与Yamagata系乙型流感病毒发生反应，具有较强特异性。灵敏度分析显示，该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2 -1 HAU/100 μL和1.22 ng/mL，具有较高灵敏度。重复性试验表明，该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。 结论:本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为Yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。

目的:评价四价流感病毒亚单位疫苗在3~64岁健康人群中接种后的免疫原性。方法:选择3~64岁的健康人群为研究对象，采用随机、盲法、阳性对照的非劣效试验，招募受试者后按1∶1随机接种相对应的实验疫苗或对照疫苗，受试者全程接种1剂。采集所有受试者免疫前和全程免疫后28 d的血样，血凝抑制(hemagglutination inhibition，HI)试验检测流感病毒H1N1、H3N2、B/Victoria(BV)和B/Yamagata(BY)血清抗体水平，分析抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)增长倍数、抗体阳转率和抗体保护率。结果:符合方案分析集的共有3~64岁受试者2 157例，其中实验组1 074例，对照组1 083例。两组受试者免疫前H1N1、H3N2、BV和BY型抗体GMT和抗体保护率差异均无统计学意义( P>0.05)，两组基线均衡。全程免疫后，实验组各型别抗体GMT增长倍数分别为11.16、17.77、9.61和15.13，抗体阳转率分别为84.08%(903/1 074)、92.46%(993/1 074)、86.03%(924/1 074)和91.71%(985/1 074)，抗体保护率分别为96.74%(1 039/1 074)、97.58%(1 048/1 074)、88.08%(946/1 074)和94.97%(1 020/1 074)。实验组4个型别抗体GMT均较免疫前增长2.5倍以上，抗体阳转率95%CI下限均>40%，抗体保护率95%CI下限均>70%；实验疫苗与对照疫苗4个型别抗体的阳转率率差的95%CI下限均>－10%，GMT 实验组/GMT 对照组的95%CI下限均>2/3。 结论:在3~64岁人群中，实验疫苗具有较好的免疫原性，且非劣效于对照疫苗。