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电子烟呼吸系统毒性作用及空气净化器的干预效果研究
编辑人员丨2天前
评价电子烟暴露对呼吸系统毒性作用以及空气净化器的干预效果。于2022年1至12月东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室开展经呼吸道染毒电子烟的随机对照实验研究。采用随机数字表法,利用8周龄雄性C57BL/6JGpt小鼠建立不同周期(0 d、3 d、7 d或14 d)的电子烟暴露模型以及清洁空气对照组。采用普通加热电子烟(200 ℃)和高温加热电子烟(280 ℃)对小鼠进行暴露。提取对照组和电子烟暴露组小鼠的肺总RNA进行转录组测序分析。利用流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。酶标仪检测总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、超氧化物(superoxide,O 2-)水平。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测基因表达。利用过滤型净化器和负离子净化器干预电子烟暴露。数据以( xˉ±s)表示,采用单因素方差分析或双因素方差分析对多组之间的差异进行比较。结果显示,RNA测序分析表明电子烟暴露诱导的差异表达基因显著富集在氧化应激(Fold enrichment=3.18)和线粒体氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)(Fold enrichment=5.74)通路。两种加热电子烟暴露均导致小鼠肺部肺泡炎评分显著升高( F=10.8, P<0.001),内源性ROS水平显著增加( F=16.8, P<0.001),MMP水平明显下降( F=13.6, P<0.01)以及线粒体复合物I的编码基因的表达紊乱。与普通加热电子烟相比,高温加热电子烟的毒性作用更强( F=2.9, P<0.05)。在缓解电子烟急性暴露导致的肺泡炎症方面,过滤型净化器的干预效果优于负离子净化器( F=7.4, P<0.01)。空气净化器可部分缓解肺部氧化应激和线粒体功能障碍。综上,本研究提示电子烟的使用存在潜在的健康风险。空气净化器可部分逆转线粒体功能紊乱,但不能完全阻断电子烟的毒性作用,有效的干预措施仍有待研究。
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编辑人员丨2天前
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角质形成细胞表达的S100A8/A9在3种常见皮肤炎症损伤模式中调控效应差异的研究
编辑人员丨2天前
目的:研究皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病这3种常见皮肤炎症损伤模式中角质形成细胞S100A8/A9表达的调控效应差异。方法:选取6 ~ 8周龄野生型C57BL/6JGpt小鼠分别进行以下几组实验:①使用单次中波紫外线(UVB)照射小鼠脱毛背部,构建皮肤光损伤模型(UVB组, n = 4),对照组不照射( n = 4);②使用2,4-二硝基氯苯(DNCB)涂抹小鼠右耳构建变应性接触性皮炎模型(DNCB组, n = 4),小鼠左耳涂抹基质对照(对照组, n = 4);③小鼠脱毛背部外用咪喹莫特乳膏构建银屑病样皮炎模型(咪喹莫特组, n = 4),对照组小鼠涂抹凡士林( n = 4)。使用苏木精-伊红(HE)染色检测各组小鼠皮肤样本组织病理变化,免疫组化及Western印迹法检测小鼠背部表皮或耳部皮损中S100A8和S100A9的表达。体外培养的HaCaT细胞分别进行以下几组实验:①UVB组细胞接受单次50 mJ/cm 2 UVB照射,对照组不照射;②采用模拟变应性接触性皮炎中炎症环境的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)(两者简称为TI)处理HaCaT细胞(TI组),对照组加入相应溶媒处理;③采用模拟银屑病样炎症环境的5种细胞因子[白细胞介素17A(IL-17A)、IL-22、IL-1α、抑瘤素M和TNF-α,简称为M5]处理HaCaT细胞(M5组),对照组加入相应溶媒。采用实时荧光定量PCR、Western印迹法和酶联免疫吸附试验分别测定S100A8和S100A9的转录、表达和胞外分泌水平。 结果:免疫组化及Western印迹检测显示,在皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病这3种炎症小鼠模型皮损组织中,S100A8、S100A9表达量均明显高于相应的对照组,且免疫组化结果显示,这两种蛋白在银屑病样皮炎模型中增多更为显著。体外细胞实验中,单次UVB、TI和M5分别处理HaCaT细胞12 h后S100A8、S100A9转录水平明显高于相应对照组,处理24 h后亦均高于相应对照组[S100A8、S100A9 mRNA表达水平:UVB组比对照组分别为6.14 ± 0.60比1.00 ± 0.08,2.58 ± 0.06比1.02 ± 0.22,均 P < 0.01;TI组比对照组分别为3.90 ± 0.75比1.00 ± 0.02,2.42 ± 0.30比1.01 ± 0.13,均 P < 0.05;M5组比对照组分别为157.59 ± 9.30比1.00 ± 0.11,251.37 ± 6.63比1.00 ± 0.03,均 P < 0.001];24、48 h,UVB组、TI组和M5组的S100A8/A9分泌蛋白水平均显著高于相应的对照组(均 P < 0.001),但其响应模式存在一些差异,在银屑病样皮炎模型中响应更为显著;同时,M5组HaCaT细胞中S100A8、S100A9胞内蛋白表达水平显著高于对照组( t = 4.66、4.63,均 P < 0.01),而UVB组和TI组HaCaT细胞中S100A8、S100A9胞内蛋白表达水平低于对照组(UVB组比对照组: t = -3.75、-3.34, P = 0.020、0.029;TI组比对照组: t = -3.30、-4.50, P = 0.030、0.011)。 结论:角质形成细胞在3种常见皮肤炎症损伤后响应活跃,其效应分子S100A8、S100A9作为机体的损伤相关分子密切参与UVB诱导的皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病中炎症反应,尤其在银屑病样皮炎中响应可能更为显著。
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编辑人员丨2天前
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不同颗粒饲料硬度对实验小鼠生长繁殖、饲料利用率及环境粉尘量的影响
编辑人员丨2024/8/10
目的 研究不同颗粒饲料硬度对实验小鼠生长繁殖性能、饲料利用率和笼内环境粉尘的影响.方法 选用3周龄的SPF级C57BL/6JGpt和ICR实验小鼠各150只,随机平均分成3组,雌雄各半,分别饲喂饲料硬度为18.62 kg(1kg=9.8N)、23.15 kg和27.89 kg的日粮,记录并计算3~10周龄小鼠体重增加量、饲料利用率和笼盒内粉尘量.另外,两个品系各选取45只6周龄雄鼠和90只4周龄雌鼠,随机平均分为3组,分别饲喂3种不同硬度的颗粒饲料.饲喂同一种硬度饲料的同品系小鼠适应2周后,以1:2的比例雄雌合笼饲养,3个月内每周统计每个繁殖笼内动物繁殖信息.结果 C57BL/6JGpt小鼠4周龄时,饲料硬度23.15 kg组的雄鼠体重显著高于饲料硬度为18.62 kg和27.89 kg组(P<0.01),饲料硬度18.62 kg组的雌鼠体重显著高于27.89 kg组(P<0.05);不同饲料硬度组间3~10周龄ICR小鼠的体重无显著差异(P>0.05).饲喂不同硬度饲料组中,两个品系各周龄雄鼠的饲料利用率均高于雌鼠(P<0.01).与饲料硬度27.89 kg组相比,饲料硬度18.62 kg组和饲料硬度23.15 kg组4~8周龄(除7周龄C57BL/6JGpt小鼠外)两品系笼盒内50目粉尘量均显著增加(P<0.05).C57BL/6JGpt和ICR小鼠在实验周期内初产胎间隔及月生产指数等基本繁育性能在3种不同硬度饲料组间均无显著差异(P>0.05);但C57BL/6JGpt小鼠月生产指数随饲料硬度升高先增加后降低,ICR小鼠月生产指数则随饲料硬度升高而增加,但差异尚无统计学意义(P>0.05).结论 不同品系、不同性别的实验小鼠对饲料硬度的耐受性不同,其中C57BL/6JGpt小鼠适合选择较低硬度的饲料,而ICR小鼠适合选择略高硬度的饲料.
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编辑人员丨2024/8/10
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探究三种筑巢材料及放置量对小鼠筑巢与繁育性能的影响
编辑人员丨2024/6/15
目的 探究三种筑巢材料及放置量对小鼠筑巢与繁育性能的影响.方法 C57BL/6JGpt(B6)小鼠、BALB/c Nj-Foxn1nu/Gpt(BALB/c-nu)小鼠随机各分为 12 组,每组 36 只(雄雌 1∶2 配繁),分别添加 2、4、6、8 g 4 种克重的拉菲草、纸棉、擦手纸筑巢材料,合笼后一周进行筑巢评分,每周统计总活产仔数、总离乳数、小鼠离乳体质量,持续统计 5 个月.结果 (1)两种品系小鼠拉菲草组、擦手纸组筑巢评分均显著优于纸棉组(P<0.05),筑巢评分与筑巢材料放置量无显著关联(P>0.05).(2)两种品系小鼠总活产仔数、总离乳数与筑巢材料种类均无显著关联(P>0.05);B6 小鼠 6 g擦手纸组总活产仔数、总离乳数显著优于 2 g擦手纸组(P<0.05);BALB/c-nu小鼠 2 g擦手纸组总活产仔数显著优于 6 g擦手纸组(P<0.05),2 g筑巢材料组总离乳数均显著优于 8 g筑巢材料组(P<0.05);两种品系小鼠离乳体质量与筑巢材料种类、放置量均无显著关联(P>0.05).结论 两种品系对不同筑巢材料及放置量存在差异.
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编辑人员丨2024/6/15
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六神丸对口腔溃疡小鼠IL-6、IL-8水平及MAPK/ERK通路的影响
编辑人员丨2023/11/11
目的 研究六神丸对小鼠口腔溃疡的疗效及可能的作用机制.方法 将 32 只 C57BL/6JGpt 级小鼠随机分成对照组、模型组、六神丸组、桂林西瓜霜组,每组 8 只.于小鼠口腔左侧颊部黏膜上使用氢氧化钠片状晶体灼烧构建口腔溃疡模型.对口腔溃疡造模成功的小鼠分别外敷涂抹给予六神丸和桂林西瓜霜粉末 0.375 g,连续5 d.观察小鼠口腔溃疡的恢复状态,用 ELISA 试剂盒检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-8 水平.取口腔溃疡部位组织,将溃疡组织制备匀浆,用二喹啉酸(BCA)法测定总蛋白浓度,并用Western blotting方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平.结果 与模型组比较,六神丸组小鼠口腔溃疡部位组织恢复情况较好,IL-6、IL-8 水平显著降低(P<0.05),局部组织中ERK磷酸化水平降低.结论 六神丸对氢氧化钠灼烧的口腔溃疡小鼠模型具有一定治疗作用,且可能的机制是通过降低血液中IL-6 和IL-8 水平,进而导致局部组织中ERK磷酸化水平降低改善病理状态.
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编辑人员丨2023/11/11
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小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体的构建
编辑人员丨2023/8/19
目的 构建小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为建立 TDO2 基因条件性敲除小鼠奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9 技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor 载体,以 TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子 3 作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2 第3 号外显子的条件性基因打靶载体.将CRISPR/Cas9 复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6 小鼠的受精卵中,获得阳性F0 小鼠,再将阳性F0 代小鼠与 C57BL/6 小鼠交配获得 F1 代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1 代小鼠基因型.结果 结果证实所构建的TDO2 基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2em1Cflox/Gpt小鼠.结论 成功构建了小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2 基因条件敲除小鼠奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/19
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利用Cre-LoxP技术构建标记GABA能神经元的转基因小鼠
编辑人员丨2023/8/5
目的:通过Cre-LoxP技术构建转基因小鼠,示踪全脑γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分布及形态.方法:使用C57BL/6J-Gad2em1 (IRES-iCre-pA)Smoc小鼠(Gad2-ires-cre小鼠)与B6/JGpt-H11em1Cin(CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)/Gpt小鼠(B6-G/R小鼠)杂交产生Gad2 tdTomato/non-Gad2ZsGreen子代小鼠,使用CatWalk步态分析系统分析子代小鼠完成全程时间、行走速度和协调指数的差异性;使用激光共聚焦显微镜观察小鼠全脑GABA能神经元的分布情况,并用Imaris软件对GABA能神经元进行3D重塑.结果:CatWalk步态分析结果显示,完成全程时间、行走速度和协调指数在G ad2tdTomato/non-Gad2ZsGreen小鼠与野生型小鼠组间无统计学差异.GABA能神经元主要分布在纹状体(ST)、嗅结节(TU)、大脑脚(CP)、黑质网状部(SNr)及小脑皮层(CbC).ST中GABA能神经元呈椭圆形,并有角状凸起;小脑浦肯野细胞(PC)树突伸入分子层,胞体排列整齐,形成浦肯野细胞层(PCL),轴突穿过颗粒细胞层(GCL),投射到小脑核(CBN).结论:Gad2tdTomato/non-Gad2ZsGreen小鼠运动正常,并可示踪全脑GABA能神经元的分布及形态.
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编辑人员丨2023/8/5
