The uterus is transiently receptive for embryo implantation. It remains to be understood why the uterus does not reject a semi-allogeneic embryo (to the biological mother) or an allogeneic embryo (to a surrogate) for implantation. To gain insights, we examined uterine early response genes approaching embryo attachment on day 3 post coitum (D3) at 22 hours when blue dye reaction, an indication of embryo attachment, had not manifested in mice. C57BL/6 pseudo-pregnant (control) and pregnant mouse uteri were collected on D3 at 22 hours for microarray analysis. The self-assembling-manifold ( SAM) algorithm identified 21,858 unique probesets. Principal component analysis indicated a clear separation between the pseudo-pregnant and pregnant groups. There were 106 upregulated and five downregulated protein-coding genes in the pregnant uterus with fold change (fc) >1.5 and q value <5%. Gene ontology (GO) analysis of the 106 upregulated genes revealed 38 significant GO biological process (GOBP) terms ( P <0.05), and 32 (84%) of them were associated with immune responses, with a dominant natural killer (NK) cell activation signature. Among the top eight upregulated protein-coding genes, Cyp26a1 inactivates retinoic acid (RA) while Lrat promotes vitamin A storage, both of which are expected to attenuate RA bioavailability; Atp6v0d2 and Gjb2 play roles in ion transport and transmembrane transport; Gzmb, Gzmc, and Il2rb are involved in immune responses; and Tdo2 is important for kynurenine pathway. Most of these genes or their related pathways have functions in immune regulations. RA signaling has been implicated in immune tolerance and immune homeostasis, and uterine NK cells have been implicated in immunotolerance at the maternal-fetal interface in the placenta. The mechanisms of immune responses approaching embryo attachment remain to be elucidated. The coordinated effects of the early response genes may hold the keys to the question of why the uterus does not reject an implanting embryo.

目的 构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠,为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型.方法 基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2flox/flox Lyz2-iCre+)小鼠.采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型;采用Western blot和免疫荧光验证小鼠巨噬细胞中TDO2敲除效果;通过苏木精-伊红(HE)染色,观察主要组织器官是否存在自发病变.结果 基因型鉴定结果表明,flox扩增产物长度在407 bp或408 bp处仅有一条条带且 Cre扩增产物长度在543 bp处有一条条带的小鼠即为TDO2flox/flox Lyz2-iCre+小鼠.Western blot结果显示,与TDO2flox/flox小鼠相比,TDO2flox/flox Lyz2-iCre+小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)中TDO2表达降低(P＜0.01).免疫荧光结果显示,与TDO2flox/flox小鼠相比,TDO2flox/flox Lyz2-iCre+小鼠腹腔巨噬细胞和BMDMs中TDO2表达降低.HE染色结果显示,与TDO2flox/flox小鼠相比,TDO2flox/flox Lyz2-iCre+小鼠肝脏、脑、肾脏和脾脏组织内细胞形态无明显差异.结论 成功构建TDO2flox/flox Lyz2-iCre+小鼠,为后续深入研究TDO2调控巨噬细胞活化在疾病中的作用和机制提供更加精准的实验动物模型.

目的 探究色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO2)在胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠中的表达以及前列腺素E2(PGE2)抑制TDO2表达和活性调控巨噬细胞功能的机制.方法 Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠制备CIA模型.X射线检测CIA小鼠踝关节损伤变化;免疫组化检测小鼠踝关节、脾脏中TDO2表达;qPCR和免疫荧光检测小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2表达变化.通过在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予不同浓度PGE2(0.1、1、10 μmol/L)刺激和给予前列腺素受体4(EP4)激动剂 CAY10598 后,qPCR 和 Western blot 检测 TDO2 表达;流式细胞术检测巨噬细胞吞噬和极化功能;比色法检测TDO2活性.结果 与正常组小鼠比较,CIA小鼠踝关节软组织肿胀变大,关节滑膜、脾脏及腹腔巨噬细胞中TDO2表达增加.在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予PGE2刺激、给予EP4受体激动剂CAY10598后TDO2表达明显被抑制,巨噬细胞吞噬功能下降,M1/M2比值下降(P＜0.05);比色法结果显示RAW264.7细胞中分别给予PGE2刺激以及EP4激动剂CAY10598后TDO2的活性被抑制(P＜0.05).结论 巨噬细胞TDO2表达升高可能促进了 CIA小鼠关节滑膜损伤,PGE2通过激活EP4受体抑制TDO2表达和活性从而调节巨噬细胞功能.

目的 构建小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为建立 TDO2 基因条件性敲除小鼠奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9 技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor 载体,以 TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子 3 作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2 第3 号外显子的条件性基因打靶载体.将CRISPR/Cas9 复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6 小鼠的受精卵中,获得阳性F0 小鼠,再将阳性F0 代小鼠与 C57BL/6 小鼠交配获得 F1 代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1 代小鼠基因型.结果 结果证实所构建的TDO2 基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2em1Cflox/Gpt小鼠.结论 成功构建了小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2 基因条件敲除小鼠奠定了基础.

目的 探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(TDO2)在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜组织中的表达及临床意义.方法 选取40 例RA患者作为RA组,另选取同期36 例健康人作为正常对照组.流式细胞术检测RA组和正常对照组PBMC中TDO2 表达;免疫荧光法检测RA组和正常对照组滑膜组织中TDO2 表达;分析RA组PB-MC中TDO2 表达与其炎症指标之间的相关性.结果 与正常对照组相比,RA组PBMC和滑膜组织中TDO2 表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);RA 组 PBMC 中TDO2 表达与红细胞沉降率(ESR)呈正相关(r =0.405,P = 0.045).结论 TDO2 在RA患者PBMC和滑膜组织中表达增加,并与炎症指标ESR呈正相关,提示TDO2 可能参与了RA的疾病进展.

目的 芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)是配体激活型的转录因子,是在研究致癌物二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)的毒性和致癌作用过程中发现的一种蛋白.本文总结AhR在肿瘤发生、进展等过程的作用以及调控IDO1/TDO2-KYN-AhR信号转导通路在肿瘤治疗中的潜力.方法 应用澳大利亚昆士兰大学图书馆英文数据库、PubMed数据库及CNKI中文期刊全文数据库,以“aryl hydrocarbon receptor”、“tryptophan 2,3 dioxy-genase”、“indoleamine 2,3 dioxygenase 1”和“tumor therapy”等作为英文关键词,以“芳香烃受体”、“犬尿氨酸”、“色氨酸2,3-二加氧酶”、“吲哚胺2,3-二加氧酶1”和“肿瘤治疗”等作为中文关键词,检索2000-01-01-2018-1-01的相关文献.纳入标准:(1)芳香烃受体与肿瘤发生、进展关系的研究性文献;(2) IDO1/TDO2-KYN-AhR通路与肿瘤治疗的文献.排除标准:(1)中文非核心期刊的文献和英文非SCI收录的文献;(2)结果重复且相对陈旧的实验研究.最终选择47篇文献纳入分析.结果 AhR可以被内源性激活促进肿瘤的发生和进展;临床试验和动物试验结果表明,以IDO1/TDO1-KYN-AhR信号通路为靶点,通过应用IDO1抑制剂和犬尿氨酸酶可以激活免疫应答、抑制肿瘤的生长,通过应用拮抗剂可以抑制AhR的激活发挥抗癌作用.结论 AhR在肿瘤发生、进展过程中具有重要的作用,调控AHR通路可能成为肿瘤治疗的新靶点.

目的 探讨皮肤镜下甲真菌病的特征性表现及模式.方法 对2017年2-7月在安徽宣城市人民医院内分泌皮肤科病区住院的患者进行甲真菌直接镜检,阳性者诊断为甲真菌病,对病甲拍摄皮肤镜照片,分析甲真菌病的皮肤镜下特征及皮肤镜模式.结果 共调查205例患者634个病甲.甲板特征中大理石样浑浊区300个(47.3％)、色素沉着196个(30.9％)、出血碎片116个(18.3％)、甲剥离84个(13.2％).远端侧位型和全甲毁损型病甲大理石样浑浊区、色素沉着、甲剥离的出现频率差异均有统计学意义(X2值分别为42.09、31.23、18.19,均P＜0.01).210个(33.1％)甲增厚,168个(26.5％)甲下角蛋白及碎屑沉积.全甲毁损型病甲甲增厚和甲下角蛋白及碎屑沉积的比例均显著高于远端侧位型病甲(X2值分别为44.3和18.52,均P＜0.01).甲周皮肤干燥脱屑在全甲毁损型病甲中的比例高于远端侧位型(X2=16.07,P＜ 0.01).634个病甲中,短刺状模式141个(22.2％)、纵向条纹模式210个(33.1％)、线状边缘模式202个(31.9％)、远端不规则中断模式193个(30.4％).结论 大理石样混浊区、甲下角蛋白及碎屑沉积、甲周皮肤干燥脱屑是甲真菌病皮肤镜下主要特征性表现,短刺状模式、纵向条纹模式、线状边缘模式、远端不规则中断模式是甲真菌病皮肤镜下特征性模式.

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族成员之一,主要参与植物次生代谢调控、激素和环境因子的应答,在植物的生长发育中起着至关重要的作用.已有研究发现,E-box的核心序列为CANNTG(N :A/G/C/T),是一类与光响应和苯丙氨酸生物合成途径相关的元件.在前期研究中,先构建顺式作用元件库,然后以转录因子为中心的酵母单杂交技术筛选发现,白桦的BplMYB46转录因子能够与核心序列为CAAATG 的E-box顺式作用元件结合.但是,是否能与E-box的其他核心序列结合还不清楚.本研究将每一种E-box顺式作用元件的核心序列分别进行双链DNA的复性并连接到pHIS2载体上,然后通过酵母单杂交技术筛选与BplMYB46转录因子能够特异结合的E-box顺式作用元件.结果显示,当E-box的核心序列第3个碱基为A/T/C、第四个碱基为A/G/C时,酵母单菌落能在三缺培养基TDO/3AT上生长,表明与BplMYB46转录因子结合的E-box顺式作用元件的特异性序列为CA(A/T/C)(A/G/C)TG.为后续通过BplMYB46转录因子与E-box顺式作用元件的结合来分析BplMYB46转录因子对下游基因的调控,以及为筛选优良下游基因改良白桦的遗传性状奠定数据基础.

目的 以深海链霉菌Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66为研究对象,通过阻断其色氨酸分解代谢途径,探究代谢产物与生长的变化.方法 通过Blastp分析寻找S.somaliensis SCSIO ZH66基因组上编码色氨酸双加氧酶基因tdo(ORF0630和ORF6017),在前期阻断ORF0630的基础上采用PCR-targeting的策略阻断ORF60 17,通过HPLC检测发酵产物的变化,并观察用不同培养基培养时突变株与野生株生长的差别.结果 与野生株相比,突变株ZH66Atdo不产生antimycins,但无其他次级代谢产物的变化.与此同时,ZH66△tdo在MS平板上开始产生气生菌丝与孢子的时间均提前了12 h,在ISP-2液体培养基中生长对数期开始时间同样提前12h.结论 链霉菌S.somaliensis SCSIO ZH66中色氨酸分解代谢途径的阻断未促进其他可能以色氨酸为前体次级代谢产物的合成,而是促进了菌株的生长,为其他链霉菌中色氨酸分解代谢调控提供了借鉴.

目的 分析甲真菌病和甲银屑病的皮肤镜特征.方法 2017年3月至2018年3月在湖北襄阳市中心医院皮肤科收集就诊的甲真菌病和甲银屑病患者各128例,对病甲皮肤镜图像进行比较.计数资料比较采用x2检验和Fisher精确检验分析.结果 甲真菌病出现7种皮肤镜模式,分别为锯齿状边缘69例(53.91％)、纵行条纹72例(56.25％)、锥形甲角化30例(23.44％)、甲板增厚21例(16.41％)、甲黑点5例(3.91％)、甲剥离26例(20.31％)和甲变色23例(17.97％).其中,锯齿状边缘和纵行条纹在远端侧位甲下型甲真菌病中出现的频率明显高于其他3种亚型,差异有统计学意义(均P＜ 0.001),锥形甲角化在全甲毁损型甲真菌病中出现的频率明显高于其他3种亚型,差异有统计学意义(x2=42.020,P＜0.001),甲板增厚、甲黑点、甲剥离和甲变色在4种甲真菌病临床亚型中的分布差异无统计学意义(均P＞ 0.05).甲银屑病出现7种皮肤镜模式,分别为点蚀征61例(47.66％)、油滴征41例(32.03％)、裂片形出血41例(32.03％)、甲床毛细血管扩张23例(17.97％)、甲板增厚20例(15.63％)、甲剥离20例(15.63％)和甲变色13例(10.16％),其中油滴征在寻常性和关节病性银屑病中出现的频率明显高于其他两种亚型(P=0.019),甲床毛细血管扩张在脓疱性银屑病中出现的频率明 显高于其他3种亚型(P=0.047),点蚀征、裂片形出血、甲板增厚、甲剥离和甲变色在4种银屑病临床亚型中的分布差异无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 甲真菌病皮肤镜下特征包括锯齿状边缘、纵行条纹、锥形甲角化和甲黑点,银屑病甲皮肤镜下特征包括点蚀征、油滴征、裂片形出血和甲床毛细血管扩张,二者同时出现的镜下表现包括甲板增厚、甲剥离和甲变色.