目的:调查海淀区新型冠状病毒（以下简称"新冠病毒"）核酸检测实验室污染情况，并规范出现污染后的处置措施。方法:对海淀区34家新冠病毒核酸检测实验室内物表进行涂抹采样，运用real time RT-PCR方法进行新冠病毒核酸检测。结果:海淀区34家新冠病毒核酸检测实验室采集的510件样本中，有1件新冠病毒核酸检测结果为阳性，推测污染原因为八连管管盖崩开导致核酸扩增仪内部被阳性对照扩增后的基因片段污染。发现污染后对该实验室采取了检测结果追溯、清洁消毒、设备耗材更换、人员培训、消毒效果验证及盲样考核验收等措施，可以有效去除实验室内核酸污染。结论:海淀区新冠病毒核酸检测实验室生物安全风险总体可控，通过人员培训、制度撰写、消毒清洁效果验证等措施可以提高检测机构处置实验室污染的能力。建议所有实验室加强生物安全管理，并定期开展实验室污染监测。

端粒是真核生物线性染色体末端的帽状保护性结构，由双链DNA区和富含G碱基的3′突出端(单链DNA区)及端粒结合蛋白共同构成，是维持基因组稳定性的重要结构。端粒结合蛋白的核心成分，被称为shelterin复合体，可帮助端粒成帽，同时将端粒DNA隐藏于蛋白复合体间，免受DNA修复系统的识别，从而在形成端粒结构、保护染色体末端、维持基因组稳定等方面发挥重要作用。shelterin复合体组分的异常会导致端粒功能障碍及染色体末端融合或缺失，严重威胁基因组的稳定性，进而促进肿瘤的发生发展。作为基因组不稳定性的重要体现形式，双微体(double minute chromosomes，DMs)的形成与端粒的结构功能异常也存在相关性。本文总结了肿瘤细胞中shelterin复合体异常与基因组不稳定性的关联，试图阐明端粒蛋白参与的肿瘤恶性进展机制，为临床上改善恶性肿瘤预后提供新的靶点和思路。

山桐子(ldesiapolycarpa)是我国特有且极具开发潜力的油料树种,果实含油率高且油品好.在苗期通过分子生物学手段对山桐子进行性别鉴定,可有效降低种苗培养成本.在前期组装的染色体级别高质量山桐子基因组基础上,进一步对山桐子雌雄群体进行全基因组重测序,根据雌雄株系的特异性片段,确定山桐子属于ZW/ZZ性别决定类型;并根据3.365x107个SNPs,结合性别表型进行全基因组关联分析,找到控制性别的19号染色体,并将性别决定区段定位到35 Mb附近;针对显著性位点,开发了性别共显性CAPS分子标记.该方法可在幼苗期快速、高效鉴定山桐子的性别,极大地降低了山桐子育苗环节的生产成本,也可在山桐子种质鉴定及分子标记辅助育种等方面为产业提供技术支撑.

该研究目的在于利用网络药理学方法探究黄芪-莪术药对治疗胃癌的作用机制,并通过胃癌细胞SGC7901 体外模型对黄芪-莪术的药效和关键靶点进行实验验证.首先,采用CCK-8法证明黄芪-莪术对胃癌细胞SGC7901 增殖的直接影响.然后,使用网络药理学的方法探究黄芪-莪术药对治疗胃癌的关键活性成分、关键靶点和关键信号通路.结果显示,黄芪-莪术药对包含 18 个潜在活性成分,例如槲皮素、山柰酚和姜黄素等.基因本体论功能富集及京都基因和基因组百科全书通路富集分析提示,黄芪-莪术药对治疗胃癌的主要靶点涉及蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的调节、MAPK活性的激活、半胱氨酸型内肽酶活性和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的负调节等.HIF-1信号通路、ABC转运蛋白、细胞色素P450 对异生素的代谢、p53 信号通路和细胞凋亡等信号通路是黄芪-莪术作用于胃癌的关键通路.随后,在体外实验中证明,黄芪-莪术药对能够显著下调多药耐药基因(ABCB1)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、低氧诱导因子-1(HIF1A)、B-细胞淋巴瘤因子2(BCL2)、乳腺癌易感基因 1(BRCA1)、DNA聚合酶θ(POLH)、核苷酸还原酶M1(RRM1)、切除修复交叉互补基因 1(ERCC1)的表达,并上调肿瘤蛋白p53(TP53)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(CAPS3)表达.最后,利用癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库中的胃癌患者基因表达和临床信息数据,应用多变量COX回归模型证明了黄芪-莪术作用的关键靶点与胃癌患者不良预后的相关性,并通过LASSO算法进行特征选择.结果显示,EGFR、HIF1A、TP53、POLH、RRM1 和ERCC1 与胃癌患者的生存期密切相关.黄芪-莪术对上述多个靶点及通路的作用,通过影响胃癌细胞的DNA修复、生存和凋亡等相关基因的表达,从而在胃癌辅助治疗中发挥重要的作用.

冷炎素相关周期热综合征(CAPS)也称为冷炎素病,包括3种疾病:家族性寒冷性自身炎症综合征(FCAS)、Muckle-Wells综合征(MWS)、新生儿多系统炎性疾病或慢性婴儿神经皮肤关节综合征(NOMID/CINCA).为常染色体显性遗传病,基因位于染色体1q44的NLRP3,也称为CIAS1,编码细胞内NOD样受体(NLRs)家族成员之一的NALP3,即cryopyrin.其临床特征是反复发作的多系统炎症,主要表现为发热、关节痛及荨麻疹,可累及皮肤、肌肉、骨骼、关节、眼、耳以及中枢神经系统,3种亚型的病情从轻到重分别为FCAS、MWS和NOMID/CINCA;白细胞介素(IL)-1抑制剂可有效地控制病情进展,应尽早应用.

目的:研究载脂蛋白E基因(apolipoprotein E gene,APOE)多态性与面肌痉挛发病率是否存在关联.方法:收集重庆医科大学附属第一医院94例面肌痉挛患者(面肌组)和73例正常人(对照组)的临床资料,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,CAPs)检测所有人员的APOE基因型,分别计算出面肌组和对照组3种APOE等位基因,即APOEs2、APOEε3和APOEε4的分布情况,进行统计学分析其分布是否存在差异.结果:面肌组APOEε4等位基因频率为15.43％,明显高于对照组的6.85％;同时,面肌组的APOEε4等位基因携带者所占比例为29.79％,也明显高于对照组的13.70％,2组之间差异具有统计学意义(P--0.014).结论:APOE基因多态性可能与面肌痉挛的发病率有关,其中APOEε4等位基因携带者可能更容易罹患面肌痉挛.

特种稻是一类具有特殊遗传性状和用途的水稻品种,目前已成为杂交水稻育种的一个重要方向,选择和利用不同来源特种稻种质资源并对其特殊性状基因型进行鉴定和遗传特性分析,对进一步促进特种稻的遗传改良及新品种的选育具有重要意义.本研究利用特异性分子标记InDel-E2、FMbadh2-E7、CAPSRa和CAPS-Ra以及自主开发设计的特异性功能标记FMbadh2-E2、FMbadh2-E7A、FMbadh2-E7B、Ra-CAPS1和Ra-CAPS2并结合基因克隆和测序技术对来自不同地区的32份优质香型水稻亲本材料的香味基因和8份黑米水稻品种的黑色种皮基因进行了基因型鉴定和分析.研究发现,在32份香型水稻材料中,有28份香味性状来源于水稻第8号染色体上编码甜菜碱脱氢酶基因Badh2的功能缺失突变,且为常见的badh2-E7等位突变类型,其在Badh2基因第7外显子处发生8 bp缺失和3个单核苷酸(SNPs)位点多态性突变;2份(板仓香糯和八桂香)表现为香味基因杂合型(Badh2/badh2);2份(溪香和莉香占)在Badh2基因第2和第7外显子处均未发生碱基缺失突变,且具有完整的Badh2基因位点编码序列,其香味性状可能不受Badh2等位基因控制.另外,研究发现,8份黑米水稻品种的黑色种皮均由位于水稻第4号染色体上的Ra/P1b基因控制,其在第7外显子处均表现为2bp(GT)的缺失突变.同时本研究通过构建多个杂交F2群体对Badh2和Ra基因进行了遗传特性分析,发现其香味和黑色种皮性状分别受1对细胞核隐性和1对细胞核显性主效基因控制.本研究通过对不同来源优质香型水稻亲本材料的香味基因和黑米水稻品种的黑色种皮基因进行鉴定、特异性功能分子标记的开发以及遗传特性分析,为进一步通过分子标记辅助选择育种技术,选育优质、高产且具有香味的杂交水稻新品种及黑米品种提供了重要的理论基础,可明显提高特种稻的选育效率,同时对进一步发现和挖掘新的香味控制基因及黑色种皮基因的研究具有重要意义.

目的 基于网络药理学和分子对接探讨参附注射治疗休克的分子机制.方法 采用网络药理学研究方法,应用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)检索参附注射液的有效成分,通过UniProt数据库进行标化.通过基因数据库(GeneCards)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、治疗靶点数据库(TTD)综合筛选休克的靶点,采用Cytoscape 3.7.1软件对二者交集的靶点构建蛋白质相互作用网络,并进行可视化处理,筛选关键基因.使用DAVID工具对检索到的基因进行基因本体(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,探讨潜在靶标可能具有的生物学功能及通路.通过AutoDock软件进行分子对接,寻找有效成分作用位点.结果 从参附注射液中筛选出9个化合物,涉及治疗休克的30个靶点,主要通过肿瘤相关信号通路、乙型肝炎病毒信号通路、甲型流感病毒信号通路,作用于磷酸肌醇3-激酶CG(PIK3CG)、核转录因子κB1A(NF-κB1A)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)等靶点,发挥抗炎、抗休克等作用.分子对接结果表明:水黄皮次素、德尔妥因与PIKCG、NF-κB1A、CAPS3结合力均较强.结论 参附注射液可从多成分、多靶点、多信号通路抑制炎症反应,发挥抗休克作用.

目的 基于网络药理学方法,运用在线数据库研究大黄素治疗类风湿关节炎的作用机制,并在成纤维样滑膜细胞细胞系中进行验证.方法 通过Targetnet、SwissTargetPrediction、Genecards、DisGeNET和OMIM数据库,分别获得大黄素作用靶点及类风湿关节炎相关基因,并构建靶点蛋白质相互作用网络(PPI),对交集基因进行Gene Ontology与KEGG通路富集分析.运用AutoDock4.2.6软件模拟分子对接.将大黄素与经TNF-α诱导的MH7A细胞共同培养,培养分组情况:空白对照组、模型组(TNF-α组,10 ng/mL)、药物干预组(TNF-α10 ng/mL+Emodin20、40、60、80、100μmol/L).采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞周期实验探究大黄素对MH7A细胞增殖的抑制作用.通过Western blot观察其NF-κB通路蛋白表达情况,通过Rt-PCR实验分析CAPS3、PTGS2(COX2)、MAPK14基因的表达.结果 获得大黄素和类风湿关节炎交集基因32个,其中心节点为CAPS3、ESR1、MAPK14等,主要涉及NF-κB信号通路等.分子对接提示大黄素与核心靶点能较好的结合.实验结果显示,大黄素能明显抑制MH7A细胞过度增殖(P<0.05).Western blot结果显示,TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.01),而予以大黄素80μmol/L干预后IκBα、p-NF-κB表达水平均有所降低(P<0.01).Rt-PCR结果显示,TNF-a组COX2、P38MAPK(MAPK14)核心基因的表达量明显上调,而大黄素(80μmol/L)处理后各组COX2、P38MAPK14的mRNA表达下降mRNA的表达下降(P<0.01),凋亡相关基因CASP3上调.结论 大黄素通过调控细胞增殖凋亡,调节NF-κB等信号通路等发挥治疗类风湿关节炎作用.

目的:通过生物信息学分析探讨子宫内膜异位症(EMs)恶变为卵巢透明细胞癌(OCCC)的致病机制.方法:通过GEO数据库微阵列表达谱数据集GSE57545,分别将卵巢型EMs(OVE)、EMs相关OCCC与正常女性个体的免疫基因进行差异分析,并对差异表达基因进行GO富集和KEGG信号通路分析、构建差异表达基因的PPI网络并筛选Hub基因.结果:OVE与对照组间共筛选出 43个差异表达基因,OCCC与对照组间共筛选出 96 个差异表达基因.相对于正常女性而言,KEGG信号通路富集显示:癌症通路是OVE与OCCC共有的信号通路.GO富集分析结果示:免疫系统过程、免疫反应、调节免疫系统进程等是OVE与OCCC共有的生物学过程;囊泡、质膜部分、细胞表面是OVE与OCCC的差异表达基因富集的共有细胞组分.CAPS3是OVE与OCCC的交集Hub基因.结论:免疫系统在EMs恶变的过程中起重要作用;CAPS3可能是EMs恶变为OCCC的关键靶点之一.