目的:探讨阿司匹林（aspirin，ASP）对高脂血症诱导的足细胞内质网应激的影响及可能机制。方法:培养足细胞分为4组：对照组、ASP（100 μg/ml）组、ox-LDL（100 μg/ml）组和ASP+ox-LDL组，在6 h、12 h、24 h、48 h以实时定量PCR法检测蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-1ike endoplasmic reticulum kinase，PERK）、真核细胞起始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α，eIF2α）、活化转录因子4（activating transcription factor-4，ATF4)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CAAT/enhancer binding protein homologous protein，CHOP）的表达；在24 h时以Western印迹法检测磷酸化（p）-PERK、p-eIF2α的表达；在12 h时以Western印迹法检测ATF4的表达。结果:在足细胞培养24 h时，ox-LDL组和ASP+ox-LDL组PERK、eIF2α的表达水平达高峰，在12 h时，该两组ATF4、CHOP的表达水平达高峰。在足细胞培养6 h、12 h、24 h、48 h时，与对照组比较，ox-LDL组PERK、eIF2α、ATF4、CHOP的表达水平明显较高（均 P<0.05）；与ox-LDL组比较，ASP+ox-LDL组上述各指标表达明显较低（均 P<0.05）。在足细胞培养24 h时，与对照组比较，ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较高（均 P<0.05）；与ox-LDL组比较，ASP+ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较低（均 P<0.05）。在足细胞分组培养12 h时，各组ATF4蛋白水平的表达与mRNA表达相似。ASP组与对照组间上述各项指标表达差异无统计学意义。 结论:高脂血症可能通过诱导PERK和eIF2α的磷酸化、激活ATF4转录及诱导CHOP高表达，引起足细胞内质网应激，而阿司匹林可能部分阻断了PERK通路，进而可能对足细胞具有保护作用。

目的:探讨血小板源性生长因子受体α（platelet derived growth factor receptor alpha，PDGFRα）对小鼠锌指蛋白阳性间充质干细胞（glioma-associated oncogene homolog 1-positive mesenchymal stem cells，Gli1 +-MSC）双向分化的调控作用。 方法:繁育双报告转基因小鼠ROSA mT/mG/Gli1-Cre ERt2/PDGFRα fl（实验组）和ROSA mT/mG/Gli1-Cre ERt2（对照组），选取两组4周龄小鼠各20只，从小鼠主动脉外膜中分离间充质干细胞，使用他莫昔芬诱导，通过绿色荧光蛋白标记和流式细胞仪分选，筛选两组Gli1 +-MSC，实验组Gli1 +-MSC中条件性敲除PDGFRα，对照组Gli1 +-MSC正常表达PDGFRα。对两组Gli1 +-MSC分别进行成脂肪诱导和成纤维诱导，蛋白质印迹法检测两组PDGFRα、脂肪细胞标志物［脂滴包被蛋白和CCAAT/增强子结合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein alpha，C/EBPα）］和成纤维细胞标志物［α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin，α-SMA）、成纤维细胞特异蛋白1（fibroblast-specific protein 1，FSP-1）］的蛋白表达，并进行半定量分析。油红O染色观察两组Gli1 +-MSC双向诱导后的细胞脂肪分化程度，并进行半定量分析。 结果:他莫昔芬诱导后，可通过绿色荧光蛋白的表达标记准确地从流式细胞仪中分离出Gli1 +-MSC。成脂肪诱导后，实验组PDGFRα蛋白表达（0.017±0.002）显著小于对照组（0.184±0.012）（ t=25.48， P=0.002），脂滴包被蛋白（3.138±0.414）和C/EBPα（3.565±0.289）蛋白表达均显著大于对照组（分别为2.312±0.218、2.179±0.103）（ t=6.21， P=0.025； t=6.69， P=0.022），即PDGFRα的敲除增强了Gli1 +-MSC的成脂肪分化能力。成纤维诱导后，实验组PDGFRα、α-SMA和FSP-1的蛋白表达（分别为0.030±0.001、0.932±0.177和0.276±0.020）均显著小于对照组（分别为0.439±0.006、1.352±0.170和0.835±0.097）（ t=149.40， P<0.001； t=66.38， P<0.001； t=11.41， P=0.008），即PDGFRα的敲除显著抑制Gli1 +-MSC向纤维细胞分化。双向诱导后，对照组可见脂肪细胞形成明显减少，实验组脂肪细胞形成较多；定量分析显示，双向诱导后实验组油红O染色量（0.461±0.042）显著多于对照组（0.017±0.007）（ t=23.20， P<0.001）。 结论:PDGFRα在调控血管外膜Gli1 +-MSC的双向分化中发挥重要作用。

目的:评价瑞马唑仑预先给药对小鼠丘脑出血性脑损伤的影响。方法:清洁级健康成年CD1雄性小鼠60只，体重25~30 g，7~8周龄，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：假手术组(Sham组)、脑损伤组(BI组)和瑞马唑仑预先给药组(Rem组)。Rem组尾静脉注射瑞马唑仑25 mg/kg；Sham组和BI组尾静脉注射等容量生理盐水。10 min后向单侧腹后外侧核和腹后内侧核显微注射Ⅳ型胶原酶0.01 U/10 nl，制备小鼠丘脑出血性脑损伤模型。造模后6 h时处死大鼠，取脑组织，测定湿重/干重(W/D)比值；取海马组织，HE染色后计数海马齿状回区存活神经元，透射电镜下观察海马组织超微结构，TUNEL法进行海马CA1区凋亡神经元计数，采用RT-PCR法测定海马组织CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化的转录因4 (ATF4)和X-盒结合蛋白-1 (XBP1)的mRNA表达水平，采用Western blot法测定海马组织CHOP、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平。 结果:与Sham组比较，BI组和Rem组脑组织W/D比值和海马CA1区凋亡神经元计数升高，海马齿状回区存活神经元计数降低，海马组织CHOP、ATF4和XBP1的mRNA表达上调，CHOP、caspase-3和Bcl-2表达上调，Bax表达下调( P<0.05)；与BI组比较，Rem组脑组织W/D比值和海马CA1区凋亡神经元计数降低，海马齿状回区存活神经元计数升高，海马组织CHOP、ATF4和XBP1的mRNA表达下调，CHOP、caspase-3和Bcl-2表达下调，Bax表达上调( P<0.05)。 结论:瑞马唑仑预先给药可减轻小鼠丘脑出血性脑损伤，其机制可能与抑制海马内质网应激诱导的细胞凋亡有关。

目的:评价血红素氧合酶-1(HO-1)在LPS致大鼠肺泡巨噬细胞凋亡中的内源性保护作用及其与内质网应激的关系。方法:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383，采用随机数字表法分为4组( n＝32)：对照组(C组)、LPS组(L组)、Con siRNA组和HO-1 siRNA组。C组常规培养，余3组向培养基加入10 μg/ml LPS。Con siRNA组和HO-1 siRNA组于LPS加入前48 h时分别行Con siRNA和HO-1 siRNA转染。LPS处理24 h时采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡率，Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激酶受体样内质网激酶(p-PERK)、增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、磷酸化的Ⅰ型内质网跨膜蛋白激酶(p-IRE-1)、磷酸化的应激活化蛋白激酶(p-JNK)和半胱氨酸天冬氨酸-12(caspase-12)表达。 结果:与C组比较，余3组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1、GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调( P<0.05)；与L组比较，HO-1 siRNA组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1表达下调，GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调( P<0.05)，Con siRNA组各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与Con siRNA组比较，HO-1 siRNA组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1表达下调，GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调( P<0.05)。 结论:HO-1产生内源性保护作用的机制与抑制内质网应激，减轻LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡有关。

运动因子是指运动诱导骨骼肌和其它器官释放的生物活性分子,包括蛋白质或多肽类物质、RNAs(mRNA、非编码RNA和线粒体DNA等)和代谢产物.运动因子参与调控了组织/器官对运动的反应和适应,它是运动产生健康效益的重要介质之一.本文通过CNKI、万方、维普、PubMed、MEDLINE和EMBASE数据库检索运动因子相关文献,对既往发现的运动因子进行概述.运动因子可被直接分泌至循环或以细胞外囊泡(微囊泡和外泌体等)为载体出现在循环中,并将信息传递给受体组织/器官,从而介导组织/器官间交互作用(crosstalk).运动因子调节组织/器官的生理过程具有多效性、协同性、重叠性等多种生理特性,形成了十分复杂的调节网络.目前,鲜有文献报道运动因子间的调节网络.本文通过蛋白-蛋白相互作用和基因本体(gene ontology,GO)与京都基因组百科全书(kyotoencyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,对运动因子之间的相互作用网络进行探讨,发现了核心运动因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、瘦素(leptin,LEP)和脂联素(adiponectin,ADIPOQ)等和关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta,CEBPB)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG)和FOSB等.这些核心运动因子和关键转录因子可能在运动促进健康过程中发挥重要作用,是深入研究运动促进健康分子机制的重要参考.

细胞衰老是增殖细胞脱离细胞周期呈永久性生长停滞的状态,其显著特点之一是分泌大量生物活性物质,即细胞衰老相关分泌表型(SASP)因子.SASP因子的分泌大致可分为DNA损伤快速旁分泌期、SASP早期、SASP成熟期3个阶段.SASP因子的分子调控机制复杂,涉及DNA损伤反应、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核因子B(NF-B)及CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)激活、SASP基因表观遗传学改变、基因转录后调控和自噬等.SASP因子能改变细胞微环境导致的多种病理状态的发生,已成为调节衰老效应的药物靶标,为肿瘤和年龄相关性疾病提供了新的治疗方向.基于此,本文对SASP因子进行了分类,总结了其在生物过程中的作用,并深入探讨其调控机制.

目的 探讨载脂蛋白A5(ApoA5)对人脂肪间充质干细胞(AMSC)成脂分化的影响及其机制.方法 脂肪组织来源于2015年2至7月在中南大学湘雅二医院进行腹部外科手术治疗的40例患者,以手术方法获取患者皮下脂肪组织,经胶原酶消化法得到人AMSC后诱导分化为成熟脂肪细胞,分别以600、1200 ng/ml ApoA5蛋白干预细胞,即为ApoA5600 ng/ml组、ApoA51200 ng/ml组,并以不加ApoA5蛋白干预的细胞为对照组.于诱导分化后第7、14天收获细胞,进行以下检测:通过甘油三酯(TG)检测试剂盒检测ApoA5对TG含量的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ApoA5对脂肪酸结合蛋白(aP2)、脂肪酸合酶(FAS)等成脂分化标志物mRNA表达的影响;通过RT-qPCR和Western blot法检测ApoA5对诱导细胞死亡的DFF45样效应因子C(CIDEC)mRNA和蛋白表达的影响;通过RT-qPCR和Western blot法检测ApoA5对CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)mRNA和蛋白表达的影响.利用慢病毒转染技术,在AMSC中过表达CIDEC,分为慢病毒阴性对照组、慢病毒过表达CIDEC组及慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组(ApoA5干预浓度为1200 ng/ml),检测在CIDEC过表达的情况下ApoA5对AMSC成脂分化过程中上述指标的影响.结果 (1)ApoA5对AMSC中TG含量的影响:干预后第7、14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中TG含量均低于对照组(P均<0.05).(2)ApoA5对AMSC中aP2和FAS mRNA表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(3)ApoA5对AMSC中CIDEC mRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600、1200 ng/ml组AMSC中CIDEC mRNA及蛋白表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中CIDEC mRNA及蛋白表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(4)ApoA5对AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600、1200 ng/ml组AMSC中C/EBPβmRNA及蛋白表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中C/EBPβmRNA及蛋白表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(5)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中TG含量的影响:干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中TG含量均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05),而慢病毒过表达CIDEC组AMSC中TG含量与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异则均无统计学意义(P均>0.05).(6)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中aP2和FAS mRNA表达水平的影响:干预后第7天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).干预后第14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均进一步高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).而干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).(7)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).干预后第14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平均进一步高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).而干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 ApoA5可抑制AMSC成脂分化,而这一作用可能是通过下调成脂分化关键因子CIDEC的表达实现的.

目的 探讨胃转流手术治疗肥胖合并2型糖尿病的机制及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 将小鼠胰岛素瘤细胞根据不同的处理方式分为4组:完全培养基组(对照组)、30 mmol/L糖培养基组(高糖组)、高糖+100 nmol/L胰高血糖素样肽-1受体类似物艾塞那肽组(艾塞那肽组)及高糖+100 nmol/L胰高血糖素样肽-1受体类似物艾塞那肽+JNK激动剂组(JNK激动剂组).各组细胞按培养条件培养至第7天时收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、caspase-3及P-SAPK/JNK蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,高糖组和JNK激动剂组的细胞活性明显下降(P＜0.05),细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),P-SAPK/JNK及caspase-3蛋白表达水平明显增高,但Bip和CHOP蛋白表达水平仅高糖组明显升高(P＜0.01);与高糖组比较,艾塞那肽组的细胞活性明显升高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.01),BiP、CHOP、P-SAPK/JNK及caspase-3蛋白表达水平也明显下降(P＜0.01),JNK激动剂组的BIP及CHOP蛋白表达水平也明显降低(P＜0.01);与艾塞那肽组比较,JNK激动剂组的细胞活性明显下降(P＜0.05),细胞凋亡率明显升高(P＜0.0l),P-SAPK/JNK及caspase-3蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).结论 胃转流手术可以通过调节胰高血糖素样肽-1分泌增加来抑制胰岛β细胞内质网应激,进而抑制JNK信号通路,保护胰岛β细胞,抑制细胞凋亡,从而达到治疗2型糖尿病的效果.

目的 探讨EIF2B3突变的少突胶质细胞是否存在对内质网应激(ERS)的不耐受,检测未折叠蛋白反应(UPR)通路的变化,为了解白质消融性白质脑病(VWM)的发病机制提供线索.方法 本研究利用转染EIF2B3野生型或突变型c.1037T＞C全长cDNA慢病毒载体的人类少突胶质细胞系,Thapsigargin对其进行ERS诱导后,通过细胞增殖-毒性检测试剂盒实验反映细胞增殖活力,检测凋亡相关分子Caspase-3剪切体的表达反映细胞凋亡水平,来验证野生与突变细胞对ERS的耐受性,并比较二者在基础状态及ERS诱导后不同时间点UPR激酶样内质网激酶(UPR-PERK)通路各分子指标的变化.结果 1.EIF2B3突变型少突胶质细胞对ERS不耐受,表现为ERS刺激后凋亡的增加和活力的显著下降.2.EIF2B3突变型少突胶质细胞存在UPR通路的过度激活.3.基础状态下UPR-PERK通路分子磷酸化α亚基的真核翻译起始因子2(P-eIF2α)、激活转录因子4、CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)和生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)的水平不同程度高于野生组.4.ERS刺激24h后,凋亡相关的UPR分子(CHOP和GADD34)和抑制蛋白翻译的P-eIF2α在野生型细胞中表达下降,而在突变细胞中持续高表达.结论 EIF2B3突变的人少突胶质细胞对ERS不耐受,这种不耐受与突变细胞存在UPR-PERK通路的过度持续激活,引起凋亡性的细胞死亡相关.减轻突变细胞的内质网负荷或稳定UPR的过度激活有望对疾病进展起到干预作用.

目的 探讨空气污染细颗粒物(PM 2.5)对过敏性哮喘小鼠气道炎症反应及内质网应激影响. 方法 采集北京市区PM2.5,制备PM2.5干粉;采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发小鼠建立急性期哮喘模型.6～8周龄雌性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为阴性对照组(PBS组)、哮喘模型组(OVA组)、PM2.5对照组(PM 2.5组)及哮喘小鼠吸入PM2.5处理组(OVA+PM2.5组).实验第0,7及14天致敏OVA组和OVA+ PM 2.5组,对照组用磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照;第15～21天激发,OVA+ PM 2.5组激发前予PM2.5混悬液滴鼻,PM 2.5组滴入等量PM2.5混悬液.末次激发24 h内各组小鼠雾化吸入浓度梯度乙酰甲胆碱(Mch)进行气道高反应(AHR)检测,24 h后收集支气管肺泡灌洗液(BAL)并行炎性细胞的分类计数,酶联免疫法(ELISA)分析上清液中炎症因子白介素(IL) 17的含量.留取肺组织行H-E染色和PAS染色,PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达量,Western-blot检测内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和磷酸化肌醇必需酶1(p-IRE1)的表达量. 结果 OVA组炎性细胞较PBS组增多(P＜0.05),以嗜酸性粒细胞为主;OVA+PM2.5组炎性细胞较OVA组增多,以中性粒细胞增高明显(P＜0.05).H-E染色镜下见OVA组炎性细胞中等量浸润;OVA+PM2.5组大量炎性细胞浸润,炎症评分较OVA组增高(P＜0.05).PAS染色显示OVA+PM2.5组气道杯状细胞较OVA组明显增加(P＜0.05).OVA+PM 2.5组AHR较OVA组明显,在吸入Mch=50 mg/mL时显著增高(P＜0.05).与OVA组比较,OVA+PM 2.5组IL-17的表达量显著增加;CHOP,GRP78和p-IRE1蛋白表达量显著增加(P＜0.05).PBS组的各检测指标与PM2.5组比较,差别无统计学意义(P＞0.05). 结论 吸入PM2.5加重OVA诱导的过敏性哮喘小鼠的炎症反应,促进炎症因子IL-17的分泌,激发内质网应激,促进气道杯状细胞增生,加重AHR的发生.