目的:探讨靶向羧酸酯酶1f（Ces1f）基因敲减对脂多糖/D-半乳糖胺(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠枯否细胞（KC）极化活性的影响。方法:将携带靶向Ces1f干扰序列的小RNA（siRNA）与多肽转运载体（Endoporter）结合形成的复合物siRNA-EndoPorter包裹在β-1, 3-D葡聚糖壳中形成复合体颗粒(GeRPs)。将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组（LPS/D-GalN）、预处理组(GeRPs)、预处理模型组（GeRPs+LPS/D-GalN）、空载体组（EndoPorter）。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹（western blot）技术检测各组小鼠肝组织Ces1f mRNA及蛋白表达水平；采用实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠KC M1极化表型分化簇86（CD86）mRNA以及KC M2极化表型分化簇163（CD163）mRNA表达水平；采用免疫荧光双染技术检测KC中Ces1f蛋白以及M1/M2极化表型CD86/CD163蛋白表达情况；采用苏木精-伊红染色观察肝组织病理损伤情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，或方差不齐时采用独立样本非参数秩和检验。结果:正常对照组与模型组、预处理组和预处理模型组肝组织Ces1f mRNA/蛋白相对表达水平分别为：1.00±0.00、0.80±0.03/0.80±0.14、0.56±0.08/0.52±0.13、0.26±0.05/0.29±0.13，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为9.171/3.957、20.740/9.315、34.530/13.830， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理组和预处理模型组KC Ces1f阳性细胞百分比分别为91.42%±3.79%、73.85%±7.03%、48.70%±5.30%、25.68%±4.55%，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为6.333、15.400、23.700， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组CD86 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、2.01±0.04、4.17±0.14，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为33.800、106.500， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组CD163 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、0.85±0.01、0.65±0.01，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为23.360、55.350， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组（F4/80 +CD86 +）百分比和（F4/80 +CD163 +）百分比分别为10.67%±0.91%和12.60%±1.67%、20.02%±1.29%和8.04%±0.76%、43.67%±2.71%和5.43%±0.47%，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为11.130/8.379、39.250/13.190， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组肝损伤评分分别为0.22±0.08、1.32±0.36、2.17±0.26，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为12.520、22.190， P值均< 0.01）。 结论:Ces1f可能是一个肝脏炎症抑制分子，其抑制效应的产生可能来自于该分子对KC极化表型稳态的维持。

目的 研究动物活体肝枯否细胞靶向性基因敲减 β-1,3-D葡聚糖包裹Endoporter-siRNA颗粒(β-1,3-D-glucan-encapsulated Endoporter-siRNA particles,GeRPs)注射方法对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galacto-samine,D-GalN)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝组织内羧酸酯酶1f(carboxylesterase 1f,Ces1f)表达的影响.方法 采用β-1,3-D-葡聚糖包裹Endoporter-Ces1f-siRNA复合物的方法制备GeRPs.健康雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:A为正常对照组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(-)Endoporter(-)],B为模型组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(+)Endoporter(-)],C为预处理组[GeRPs(+)LPS/D-GalN(-)Endoporter(-)],D为预处理模型组[GeRPs(+)LPS/D-GalN(+)Endoporter(-)],E为空白组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(-)Endoporter(+)].以上各组分别采用GeRPs或Endoporter或PBS预处理后,再以LPS/D-GalN腹腔内注射诱导ALF实验动物模型.采用原位胶原酶灌注和选择性贴壁等方法分离培养小鼠原代肝细胞,并以LPS刺激细胞.Ces1f基因表达采用real-time PCR方法和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法检测;肝脏组织病理形态学变化采用光学显微镜观察.结果 PCR与FISH结果显示,与A组比较,B组、C组和D组Ces1f基因的表达均显著下调(均为P<0.01);D组Ces1f mRNA的相对表达水平较B组下降(P<0.05).在原代肝细胞中,LPS刺激较非刺激细胞Ces1f的表达也明显下调(P<0.01);经LPS/D-GalN刺激后,小鼠肝脏组织病理损伤明显,通过GeRPs预处理可进一步加重LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭小鼠肝脏病理损伤效应.结论 GeRPs方法能够下调健康小鼠肝组织Ces1f基因表达,同时,GeRPs预处理能进一步下调ALF小鼠肝组织中Ces1f mRNA表达的受抑程度,并加重ALF小鼠肝脏病理损伤效应.

目的 探讨urotensin Ⅱ(U)/UT(UⅡ receptor)系统对急性肝衰竭小鼠肝内Ces1f基因表达的影响.方法 24只健康雄性Balb/c小鼠随机分为4组(6只/组).A组:健康对照组;B组:预处理对照组;C组:急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型组;D组:预处理ALF模型组.ALF模型组和预处理ALF模型组以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)50 μg/kg 联合D-半乳糖胺(D-galactosamin,D-GalN)800 mg/kg腹腔注射诱导ALF,健康对照组注射等体积的0.9％氯化钠溶液;预处理ALF组在造模前30 min给予0.6 mg/kg Urantide尾静脉注射;预处理对照组同样预处理后腹腔注射相同体积的0.9％氯化钠溶液.造模6h后,收集小鼠血清和肝组织标本.肝损伤程度采用血清ALT、AST和肝组织HE染色分析;肝组织UⅡ和Ces1f表达采用实时荧光定量PCR(reatime-PCR)方法检测.结果 LPS/D-GalN攻击后,肝内UⅡ mRNA的表达在2h即显著升高,6h达峰值,随后逐渐下降,至12 h水平接近正常值.而肝Ces1fmR-NA的表达在2h和4h时与正常水平无明显统计学差异,在6h则显著下调,至10 h水平达最低值,12 h表达水平有所回升;LPS/D-GalN攻击6h后(即C组)血清ALT、AST显著升高、肝内见大片坏死性炎性损伤病变,D组ALT、AST水平较C组明显降低,且肝组织内损伤程度较C组有明显改善;A、B、C、D组肝组织UⅡ mRNA相对表达量分别为(1.00±0.00)、(1.08 ±0.33)、(9.62 ±2.31)、(5.61 ±1.3).其中,C、D组水平较A和B组高,而D组较C组低,均有显著性差异(P＜0.05);A、B、C、D组肝组织Ces1fmRNA 的相对表达量分别为(1.00 ±0.00)、(0.91 ±0.31)、(0.44 ±0.12)、(1.14 ±0.40).其中,C组水平较A、B、D组均低(P＜0.01),D组水平较C组高(P＜0.01),具有显著性差异.结论 ALF小鼠肝内Ceslf基因表达显著下调,且其下调可能与UⅡ基因表达信号系统激活调控有关.