目的:探讨靶向羧酸酯酶1f（Ces1f）基因敲减对脂多糖/D-半乳糖胺(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠枯否细胞（KC）极化活性的影响。方法:将携带靶向Ces1f干扰序列的小RNA（siRNA）与多肽转运载体（Endoporter）结合形成的复合物siRNA-EndoPorter包裹在β-1, 3-D葡聚糖壳中形成复合体颗粒(GeRPs)。将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组（LPS/D-GalN）、预处理组(GeRPs)、预处理模型组（GeRPs+LPS/D-GalN）、空载体组（EndoPorter）。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹（western blot）技术检测各组小鼠肝组织Ces1f mRNA及蛋白表达水平；采用实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠KC M1极化表型分化簇86（CD86）mRNA以及KC M2极化表型分化簇163（CD163）mRNA表达水平；采用免疫荧光双染技术检测KC中Ces1f蛋白以及M1/M2极化表型CD86/CD163蛋白表达情况；采用苏木精-伊红染色观察肝组织病理损伤情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，或方差不齐时采用独立样本非参数秩和检验。结果:正常对照组与模型组、预处理组和预处理模型组肝组织Ces1f mRNA/蛋白相对表达水平分别为：1.00±0.00、0.80±0.03/0.80±0.14、0.56±0.08/0.52±0.13、0.26±0.05/0.29±0.13，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为9.171/3.957、20.740/9.315、34.530/13.830， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理组和预处理模型组KC Ces1f阳性细胞百分比分别为91.42%±3.79%、73.85%±7.03%、48.70%±5.30%、25.68%±4.55%，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为6.333、15.400、23.700， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组CD86 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、2.01±0.04、4.17±0.14，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为33.800、106.500， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组CD163 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、0.85±0.01、0.65±0.01，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为23.360、55.350， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组（F4/80 +CD86 +）百分比和（F4/80 +CD163 +）百分比分别为10.67%±0.91%和12.60%±1.67%、20.02%±1.29%和8.04%±0.76%、43.67%±2.71%和5.43%±0.47%，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为11.130/8.379、39.250/13.190， P值均< 0.01）。正常对照组与模型组、预处理模型组肝损伤评分分别为0.22±0.08、1.32±0.36、2.17±0.26，各组间差异均有统计学意义（ F值分别为12.520、22.190， P值均< 0.01）。 结论:Ces1f可能是一个肝脏炎症抑制分子，其抑制效应的产生可能来自于该分子对KC极化表型稳态的维持。

目的:探讨生殖细胞特异基因-2(GSG2)基因在神经胶质瘤中的作用。方法:通过慢病毒敲除GSG2的U87细胞系构建裸鼠成瘤模型。随后进行瘤体体积、重量测量和动物活体成像分析，并应用蛋白芯片技术探讨下游分子机制。采用非配对 t检验或 χ2检验来计算两组之间的差异。 结果:GSG2敲低后1个月裸鼠瘤体明显减小[敲低(KD)组：(109.42±209.94) mm 3，对照(NC)组：(1 070.00±410.28) mm 3， P<0.05]，凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(FasL)、p27、p53、SMAC的表达水平显著上调( P<0.05)，SMAC蛋白激活最为明显。 结论:GSG2在体内促进神经胶质瘤细胞凋亡，并降低胶质瘤增殖。

目的:检测锌指蛋白22(ZNF22)基因在肝癌组织中的表达水平并观察ZNF22对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移能力的影响。方法:收集2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院行手术切除的32例肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁肝组织标本。分析ZNF22基因在32例肝癌标本以及癌症基因组图谱数据库371例肝癌样本中的表达水平。构建ZNF22基因敲减的SNU-449和JHH-7肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验、裸鼠皮下成瘤、尾静脉注射转移和小动物活体成像实验，观察ZNF22对肝癌细胞的影响。结果:ZNF22基因在肝癌组织中表达量高于癌旁组织，差异有统计学意义( P<0.001)。ZNF22敲减的SNU-449和JHH-7细胞的生长速度均低于相应的对照组细胞，差异有统计学意义(均 P<0.001)。相比阴性对照组，ZNF22敲减的SNU-449细胞形成的克隆数目减少(26±8比59±5)，细胞凋亡水平增加(6.60%±0.22%比2.38%±0.30%)，细胞的迁移率降低(14.47%±6.42%比68.84%±8.01%)，侵袭细胞数也降低(48.00±2.23比179.00±4.81)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。ZNF22敲减的JHH-7细胞注射于裸鼠皮下后未见明显肿瘤生长，全身荧光表达量低于阴性对照组，差异有统计学意义( P<0.05)，裸鼠解剖观察亦未见转移瘤。 结论:ZNF22在肝癌组织中的表达升高，ZNF22基因敲减抑制了肝癌细胞的生长、增殖、侵袭、转移和成瘤能力，并可诱导肝癌细胞的凋亡。

目的:检测甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在肝细胞癌中的表达，并观察Mus81对人肝癌细胞迁移、侵袭及转移能力的影响。方法:32例组织标本选自2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院进行手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织及相应癌旁组织。分析Mus81在32例肝癌标本、癌症基因组图谱数据库的374例肝癌样本、人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系JHH-7、Huh-7、Hep3B中的表达水平，构建Mus81敲减的JHH-7、Huh-7和过表达的Hep3B肝癌细胞系，通过划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验和裸鼠尾静脉注射转移实验观察Mus81对肝癌细胞的影响。结果:Mus81在肝癌组织或细胞系中的表达量高于癌旁组织或正常肝细胞系，差异有统计学意义(均 P<0.05)。Mus81敲减的Huh-7肝癌细胞的迁移率、转移及侵袭细胞数分别为22.24%±2.16%、49.04±5.62、3.81±1.08，阴性对照组分别为26.89%±1.15%、86.81±4.79、19.78±3.30，两组比较差异有统计学意义( t＝4.24、26.59、23.92，均 P<0.01)；Mus81过表达的Hep3B肝癌细胞迁移率、转移及侵袭细胞数分别为80.57%±5.12%、18.74±8.07、33.81±8.44，均高于空载体组的64.17%±7.20%、10.96±5.32、3.04±1.13，差异有统计学意义( t＝4.15、4.18、18.78，均 P<0.01)。裸鼠尾静脉转移实验显示，注射Mus81敲减组JHH-7细胞的裸鼠总荧光量、转移瘤重量均低于对照组，且肾、脊柱、颈部、腋下及皮下的转移率均低于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Mus81基因在肝癌中表达上调，且可促进肝癌细胞的迁移、侵袭、转移能力，提示Mus81可能是一个潜在的肝细胞癌治疗靶点。

目的 研究D-谷氨酸和D-丙氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌的安全性和免疫原性,探讨D-氨基酸营养缺陷株作为口服减毒活疫苗或载体的可行性.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增并测序进行基因型分析,同时利用生长曲线实验、扫描电镜和透射电镜观察菌株生长状态和形态,确认敲除相应基因后D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌表型稳定;药敏试验探讨外源补充D-氨基酸后,营养缺陷株对作用于细胞壁的青霉素和氨苄青霉素的敏感性;安全性评价有设置不同免疫剂量攻毒,脏器病理切片,小鼠活体成像,菌株计数和粪便16s rRNA全长测序,以检测D-氨基酸营养缺陷型菌株的定植和侵袭能力;免疫小鼠测抗体滴度检测疫苗引起的免疫应答,免疫后攻毒测定D-氨基酸营养缺陷株的保护效力.结果 D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌生长稳定,口服有效减毒,在小鼠体内停留时间缩短,激发的炎症反应较低.尤其是D-谷氨酸营养缺陷株,即使在外源补充D-谷氨酸的条件下耐药性也明显降低,既减少了对小鼠机体的损伤又能激发有效的保护性免疫应答.结论 D-谷氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌有希望作为减毒活疫苗或载体递送抗原,预防病原体感染.

目的 探讨转酮醇酶(TKT)在结直肠癌中的表达情况以及其对结直肠癌细胞增殖及迁移、侵袭能力的影响.方法 利用定量PCR技术和基于基因表达水平值的交互式分析平台分析TKT在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达情况.使用2种质粒(Ctrl质粒、TKT过表达质粒)分别转染2种结直肠癌细胞株SW480和HCT116,构建过表达TKT稳转细胞株(Ctrl组、TKT-Flag组);通过重组慢病毒技术使用2类RNA(TKT-CtrlRNA、TKT-shRNA)转染上述2种结直肠癌细胞株,构建敲减TKT稳转细胞株(NC组、shTKT组).然后使用蛋白印迹检测过表达TKT和敲减TKT的效果,通过CCK-8、实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)、细胞克隆形成实验分析TKT对结直肠癌细胞增殖的影响.将过表达TKT的HCT116稳转细胞株对裸鼠进行皮下注射,6周后处死小鼠,解剖后取皮下肿瘤组织,通过测量肿瘤体积及质量检测TKT对结直肠癌细胞成瘤能力的影响.通过Transwell实验、划痕实验分析过表达TKT和敲减TKT对上述2种结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响.向小鼠尾静脉注射过表达TKT和敲减TKT的HCT116稳转细胞,建立肺转移模型,8周后通过活体成像及H-E染色进一步检测TKT对结直肠癌细胞体内转移的影响.使用Western blot检测过表达TKT和敲减TKT对结直肠癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的影响.结果 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中TKT表达显著上调,并且在结直肠癌中TKT基因表达量也增高.与Ctrl组相比,TKT-Flag组的TKT蛋白表达上调,结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力提升,EMT相关蛋白Vimentin、N-cadherin和Snail表达水平升高,E-cadherin蛋白下降;与NC组相比,shTKT组的TKT蛋白表达下调,结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力明显下降,EMT相关蛋白Vimentin、N-cadherin和Snail表达水平下降,E-cadherin蛋白升高(P＜0.05).结论 TKT在结直肠癌中高表达,并且能够增强结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的能力.

目的:分析RhoC对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制.方法:利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平.按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组.RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动.最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证.结果:RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大.RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高(P<0.01);RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、MMP-2和MMP-9蛋白水平显著下降(P<0.05),FAK和MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05);细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01);实验组在动物活体荧光成像系统下发出的荧光强度显著低于对照组,且HE染色结果显示实验组裸鼠肺结节数量明显减少(P<0.05).结论:RhoC基因可影响OSCC细胞的迁移和侵袭能力,其潜在机制可能是通过活化FAK和MAPK信号分子参与OSCC细胞的迁移和侵袭过程.

目的 细胞周期因子MCM5在DNA复制起始中起着关键性作用,并参与基因转录调控,但其在胚胎发育中的作用鲜有报道.本文首先研究mcm5在斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式,然后对mcm5在斑马鱼体节发生中的作用进行研究.方法 通过原位杂交的方法分析mcm5在斑马鱼发育早期的表达谱,然后运用MO注射的方法敲降mcm5功能,并结合原位杂交的方法分析mcm5在体节发生中的作用.结果 整胚原位杂交实验显示,MCM5为母源性因子.在胚胎1细胞期到体节发生早期,mcm5呈广泛表达;从胚胎发育4体节开始,mcm5开始在尾牙、体节、头部区域呈现特异性表达,暗示其可能参与了体节发生的调控.在mcm5功能敲降时,活体胚胎除体轴变短、眼睛变小以外无明显畸形.但原位杂交实验显示体节发生相关标记性基因表达减弱,表明mcm5可能参与了体节发生的调控.结论 在斑马鱼早期发育中mcm5参与了体节发生的调控.

目的 探讨未成熟同源蛋白增强子(ERH)基因敲除对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过克隆有干扰ERH基因序列的慢病毒感染T24细胞,建立稳定的ERH基因抑制的T24细胞克隆,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测ERH mRNA的表达.通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法、克隆形成法和流式细胞术检测ERH基因敲除对细胞增殖和凋亡的影响.通过裸鼠皮下成瘤实验验证体内ERH基因敲除对T24细胞成瘤效果的影响.结果 转染慢病毒后,经qPCR检测,ERH基因敲除效果满意[敲除组ERH mRNA相对表达量为0.079±0.007,未经处理的T24细胞(ERH正常组)为1.006±0.126;t=12.72,P=0.0002].MTT实验结果提示,敲除ERH基因的T24细胞增殖能力减弱[ERH敲除组490 nm波长处吸光度(A490)值为0.13±0.00,ERH正常组为0.66±0.01;t=104.61,P<0.0001].克隆形成实验结果提示其克隆能力减弱[ERH敲除组克隆数为(10.5±1.2)个,ERH正常组为(196.4±4.0)个;t=73.63,P<0.0001].流式细胞术检测结果示细胞凋亡率增加[ERH敲除组凋亡率为(11.0±0.5)％,ERH正常组为(4.2±0.5)％;t=16.06,P<0.0001].裸鼠皮下成瘤实验活体成像结果显示,ERH敲除组肿瘤区域总荧光强度为(4.67±0.59)×1010μW/cm2,ERH正常组相应部位为(9.54±4.20)×1010μW/cm2,差异有统计学意义(t=3.64,P=0.0051);ERH敲除组肿瘤重量为(0.80±0.62)g,ERH正常组为(1.79±0.71)g,差异有统计学意义(t=3.33,P=0.0037).结论ERH基因敲除可以抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,促进其凋亡.

目的 研究动物活体肝枯否细胞靶向性基因敲减 β-1,3-D葡聚糖包裹Endoporter-siRNA颗粒(β-1,3-D-glucan-encapsulated Endoporter-siRNA particles,GeRPs)注射方法对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galacto-samine,D-GalN)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝组织内羧酸酯酶1f(carboxylesterase 1f,Ces1f)表达的影响.方法 采用β-1,3-D-葡聚糖包裹Endoporter-Ces1f-siRNA复合物的方法制备GeRPs.健康雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:A为正常对照组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(-)Endoporter(-)],B为模型组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(+)Endoporter(-)],C为预处理组[GeRPs(+)LPS/D-GalN(-)Endoporter(-)],D为预处理模型组[GeRPs(+)LPS/D-GalN(+)Endoporter(-)],E为空白组[GeRPs(-)LPS/D-GalN(-)Endoporter(+)].以上各组分别采用GeRPs或Endoporter或PBS预处理后,再以LPS/D-GalN腹腔内注射诱导ALF实验动物模型.采用原位胶原酶灌注和选择性贴壁等方法分离培养小鼠原代肝细胞,并以LPS刺激细胞.Ces1f基因表达采用real-time PCR方法和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法检测;肝脏组织病理形态学变化采用光学显微镜观察.结果 PCR与FISH结果显示,与A组比较,B组、C组和D组Ces1f基因的表达均显著下调(均为P<0.01);D组Ces1f mRNA的相对表达水平较B组下降(P<0.05).在原代肝细胞中,LPS刺激较非刺激细胞Ces1f的表达也明显下调(P<0.01);经LPS/D-GalN刺激后,小鼠肝脏组织病理损伤明显,通过GeRPs预处理可进一步加重LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭小鼠肝脏病理损伤效应.结论 GeRPs方法能够下调健康小鼠肝组织Ces1f基因表达,同时,GeRPs预处理能进一步下调ALF小鼠肝组织中Ces1f mRNA表达的受抑程度,并加重ALF小鼠肝脏病理损伤效应.