目的 研究Circular RNAs(circRNAs)ZNF609在肺癌组织中的表达水平及其与肺癌患者临床病例特征、预后的关系,并探讨circZNF609在肺癌细胞中发挥的生物学功能.方法 qRT-PCR检测circ-ZNF609在50例肺癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其在肺癌中的表达与肺癌患者临床病例特征、预后的关系;qRT-PCR检测circZNF609在肺癌细胞系中的表达;PC-9细胞经脂质体转染分为对照组(si-NC)和circZNF609 siRNA(si-circZNF609)组,MTS检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期阻滞情况,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Boyden实验检测各组细胞侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示circ-ZNF609在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织,circZNF609的高表达与肺癌肿瘤分化及淋巴结转移显著相关,且circZNF609高表达的肺癌患者生存期较短(P值均<0.05).circZNF609在肺癌细胞A549、PC-9、H226中的表达均显著高于人正常肺上皮细胞16HBE(P<0.05);转染circZNF609 siRNA后,PC-9细胞增殖、转移及侵袭能力均下降,G2期细胞增多(P值均<0.05).结论 circZNF609在肺癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与肿瘤分化、淋巴结转移及预后不良相关,干扰circZNF609的表达显著抑制PC-9细胞的恶性生物学行为,circZNF609可能为肺癌的潜在治疗靶标.

环状RNA ( circRNA )由前体RNA通过首尾反向剪切形成,具有高度保守性、稳定性和时空特异性等特点,根据来源可分为外显子 circRNA、内含子circRNA和外显子-内含子circRNA[1-2].与mRNA相比,circRNA缺少5'帽子和3'末端多聚核苷酸尾,这种结构使circRNA十分稳定[3].circRNA参与机体多种病理生理调控过程,且在诸多恶性肿瘤中异常表达并调控肿瘤恶性生物学行为,成为近年研究热点.circRNA锌指蛋白609 ( circ-ZNF609 )是已知能够调控诸多肿瘤发生和发展的circRNA,本文就circ-ZNF609在肿瘤中的表达及作用机制综述如下.

目的 探讨秦皮甲素对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法 不同浓度的秦皮甲素处理人鼻咽癌细胞系HNE-3;并将si-NC、si-circ-ZNF609转染至HNE-3细胞,pcDNA、pcDNA-circ-ZNF609分别转染至HNE-3细胞后用秦皮甲素处理细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖;采用试剂盒检测细胞内葡萄糖摄取水平与乳酸水平;采用酶活性试剂盒检测丙酮酸激酶和己糖激酶的活性;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭;RT-qPCR检测circ-ZNF609的表达量;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量.结果 秦皮甲素以浓度依赖性的方式降低细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.001),降低葡萄糖摄取水平和乳酸水平(P<0.001),降低丙酮酸激酶和己糖激酶的活性(P<0.001),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.001);秦皮甲素可降低circ-ZNF609的表达量(P<0.001),且呈剂量依赖性;转染si-circ-ZNF609后细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.001),葡萄糖摄取水平和乳酸水平降低(P<0.001),丙酮酸激酶和己糖激酶的活性降低(P<0.001),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.001);转染pcDNA-circ-ZNF609能够回复秦皮甲素对HNE-3细胞增殖、糖酵解、迁移及侵袭的抑制作用.结论 秦皮甲素可通过调控circ-ZNF609表达而抑制HNE-3细胞增殖、糖酵解、迁移及侵袭.

目的 探讨circ_ZNF609对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和氧化应激的影响及可能机制.方法 体外培养肾小管上皮细胞HK2,用含25 mmol/L葡萄糖的培养液培养24 h后,RT-qPCR法检测细胞中circ_ZNF609和miR-423-5p表达.分别转染circ_ZNF609小干扰RNA、miR-423-5p模拟物或共转染circ_ZNF609小干扰RNA和miR-423-5p抑制剂至HK2细胞,然后用含25 mmol/L葡萄糖的培养液培养24 h,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达,试剂盒检测细胞中SOD活性及MDA含量.双荧光素酶报告基因实验验证circ_ZNF609和miR-423-5p调控关系.结果 HK2细胞经高糖处理后,细胞中circ_ZNF609表达量增加(P＜0.05),miR-423-5p表达量减少(P＜0.05).与高糖处理的HK2细胞比较,高糖处理的下调circ_ZNF609或上调miR-423-5p的HK2细胞增殖活性和细胞中SOD活性升高(P＜0.05),细胞凋亡率、细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达和MDA含量降低(P＜0.05).circ_ZNF609靶向结合miR-423-5p,且下调circ_ZNF609的HK2细胞中miR-423-5p的表达量增加.下调miR-423-5p逆转下调circ_ZNF609对高糖诱导的HK2细胞凋亡和氧化应激的影响.结论 下调circ_ZNF609可能通过靶向上调miR-423-5p抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞HK2凋亡和氧化应激.

目的 探讨Circ-ZNF609对食管癌细胞生物学特性影响及作用机制.方法 体外培养正常食管内皮细胞NEC与食管癌细胞系Eca-109、KYSE30、KYSE-450,实验分组:NC(空白)组、si-NC(转染si-NC)组、si-Circ-ZNF609(转染si-Circ-ZNF609)组、miR-NC(转染miR-NC)组、miR-224-5p(转染miR-224-5p)组、si-Circ-ZNF609+anti-miR-NC(同时转染si-CircZNF609和anti-miR-NC)组、si-Circ-ZNF609+anti-miR-224-5p(同时转染si-CircZNF609和anti-miR-224-5p)组;采用实时荧光(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测Circ-ZNF609、miR-224-5p表达量;采用Western印迹检测细胞周期素蛋白(Cyclin)D1、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、β-catenin蛋白表达;采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测细胞活力、细胞周期和凋亡率;双荧光素酶报告基因实验鉴定靶向关系.结果 与正常食管内皮细胞NEC比较,食管癌细胞Eca-109、KYSE30、KYSE-450中Circ-ZNF609表达水平明显升高,miR-224-5p表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-Circ-ZNF609组细胞活力与S期细胞比例明显降低(P<0.05),G2/M期细胞明显比例升高(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平明显降低,凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(均P<0.05);与miR-NC组比较,miR-224-5p组细胞活力与S期细胞比例明显降低,G2/M期细胞比例明显升高,CyclinD1、β-catenin蛋白水平明显降低,凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白产生明显增加(P<0.05);Circ-ZNF609可靶向调控miR-224-5p;抑制miR-224-5p表达可逆转Circ-ZNF609沉默对食管癌细胞生物学行为的作用.结论 干扰Circ-ZNF609能够通过促进miR-224-5p表达而调控食管癌细胞生物学特性,此影响可能涉及Wnt/β-catenin信号通路的失活.