目的:探讨circZNF609靶向miR-153调控弥漫大B细胞淋巴瘤增殖和凋亡的分子机制。方法:选取2018年7月至2019年12月于郑州大学第一附属医院诊治的弥漫大B细胞淋巴瘤患者的淋巴瘤组织50例，选取同期经病理诊断证实为反应性增生的正常淋巴结组织30例作为对照。实时荧光定量PCR法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤组织和对照组织中circZNF609的表达。弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY19细胞分为Control组(空白对照)、si-con组(转染siRNA control)、si-ZNF609组(转染circZNF609 siRNA)、si-ZNF609+Anti-NC组(共转染circZNF609 siRNA和inhibitor control)和si-ZNF609+Anti-miR-153组(共转染circZNF609 siRNA和miR-153 inhibitor)。细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞周期、凋亡情况，Western blot检测C-caspase-3、cyclin D1、p21蛋白的表达水平，荧光素酶报告系统鉴定circZNF609与miR-153的关系。结果:弥漫大B细胞淋巴瘤组织中circZNF609的表达水平(1.44±0.22)高于对照组(0.37±0.12， P<0.001)。si-ZNF609组细胞存活率[(51.74±6.39)%]低于Control组和si-con组[分别为(100.00±10.23)%和(99.64±11.67)%，均 P<0.001]，G 0/G 1期细胞比例[(63.25±4.11)%]高于Control组和si-con组[分别为(48.62±4.32)%和(47.12±3.20)%，均 P<0.001]，细胞凋亡率[(13.36±1.42)%]高于Control组和si-con组[分别为(3.65±0.47)%和(3.84±0.62)%，均 P<0.001]，C-caspase-3、p21蛋白表达水平(分别为0.85±0.09和0.90±0.08)高于Control组(分别为0.38±0.04和0.65±0.07)和si-con组(分别为0.39±0.05和0.66±0.05，均 P<0.001)，cyclin D1蛋白表达水平(0.40±0.03)低于Control组和si-con组(分别为0.52±0.06和0.53±0.04，均 P<0.001)。circZNF609和miR-153互为靶向关系。si-ZNF609+Anti-miR-153组细胞存活率[(169.92±13.25)%]高于si-ZNF609+Anti-NC组[(100.00±9.68)%， P<0.001]，细胞G 0/G 1期比例[(52.01±3.62)%]和凋亡率[(8.20±0.87)%]低于si-ZNF609+Anti-NC组[分别为(64.51±5.17)%和(14.03±1.17)%，均 P<0.001]，C-caspase-3、p21蛋白表达水平(分别为0.42±0.06和0.52±0.06)低于si-ZNF609+Anti-NC组(分别为0.80±0.07和0.92±0.10，均 P<0.001)，cyclin D1蛋白表达水平(0.68±0.07)高于si-ZNF609+Anti-NC组(0.39±0.04， P<0.05)。 结论:下调circZNF609的表达靶向miR-153抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY19细胞增殖并诱导细胞凋亡。

目的:探讨神经肽P物质(substance P，SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用，分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法:将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist，NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR，qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应，流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达，高通量测序技术分析circRNA表达谱，qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA，miRNA)，并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果:刺激12 h后，SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍，刺激24 h后，穿孔素mRNA表达继续升高，约为对照组3.65倍，差异均具有统计学意义( t值分别为4.00、4.72， P值均<0.05)；在12 h时，NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组，差异具有统计学意义( t＝2.39， P<0.05)，但在24 h时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比，K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%，(17.78±1.94)%，(10.19±2.04)%]， t值分别为6.27、12.19、7.83， P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs：circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测，circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关( r值分别为-0.57、-0.74， P值均<0.05)。 结论:SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞，下调circZNF609和circAMBRA1的表达，上调穿孔素mRNA的表达，促进NK92-MI细胞脱颗粒增强其杀伤功能。

目的 研究Circular RNAs(circRNAs)ZNF609在肺癌组织中的表达水平及其与肺癌患者临床病例特征、预后的关系,并探讨circZNF609在肺癌细胞中发挥的生物学功能.方法 qRT-PCR检测circ-ZNF609在50例肺癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其在肺癌中的表达与肺癌患者临床病例特征、预后的关系;qRT-PCR检测circZNF609在肺癌细胞系中的表达;PC-9细胞经脂质体转染分为对照组(si-NC)和circZNF609 siRNA(si-circZNF609)组,MTS检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期阻滞情况,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Boyden实验检测各组细胞侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示circ-ZNF609在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织,circZNF609的高表达与肺癌肿瘤分化及淋巴结转移显著相关,且circZNF609高表达的肺癌患者生存期较短(P值均<0.05).circZNF609在肺癌细胞A549、PC-9、H226中的表达均显著高于人正常肺上皮细胞16HBE(P<0.05);转染circZNF609 siRNA后,PC-9细胞增殖、转移及侵袭能力均下降,G2期细胞增多(P值均<0.05).结论 circZNF609在肺癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与肿瘤分化、淋巴结转移及预后不良相关,干扰circZNF609的表达显著抑制PC-9细胞的恶性生物学行为,circZNF609可能为肺癌的潜在治疗靶标.

目的 探讨Circ-ZNF609对食管癌细胞生物学特性影响及作用机制.方法 体外培养正常食管内皮细胞NEC与食管癌细胞系Eca-109、KYSE30、KYSE-450,实验分组:NC(空白)组、si-NC(转染si-NC)组、si-Circ-ZNF609(转染si-Circ-ZNF609)组、miR-NC(转染miR-NC)组、miR-224-5p(转染miR-224-5p)组、si-Circ-ZNF609+anti-miR-NC(同时转染si-CircZNF609和anti-miR-NC)组、si-Circ-ZNF609+anti-miR-224-5p(同时转染si-CircZNF609和anti-miR-224-5p)组;采用实时荧光(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测Circ-ZNF609、miR-224-5p表达量;采用Western印迹检测细胞周期素蛋白(Cyclin)D1、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、β-catenin蛋白表达;采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测细胞活力、细胞周期和凋亡率;双荧光素酶报告基因实验鉴定靶向关系.结果 与正常食管内皮细胞NEC比较,食管癌细胞Eca-109、KYSE30、KYSE-450中Circ-ZNF609表达水平明显升高,miR-224-5p表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-Circ-ZNF609组细胞活力与S期细胞比例明显降低(P<0.05),G2/M期细胞明显比例升高(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平明显降低,凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(均P<0.05);与miR-NC组比较,miR-224-5p组细胞活力与S期细胞比例明显降低,G2/M期细胞比例明显升高,CyclinD1、β-catenin蛋白水平明显降低,凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白产生明显增加(P<0.05);Circ-ZNF609可靶向调控miR-224-5p;抑制miR-224-5p表达可逆转Circ-ZNF609沉默对食管癌细胞生物学行为的作用.结论 干扰Circ-ZNF609能够通过促进miR-224-5p表达而调控食管癌细胞生物学特性,此影响可能涉及Wnt/β-catenin信号通路的失活.

目的 探讨CircZNF609调控miR-22-3p对幼龄癫痫大鼠脑组织神经细胞凋亡及炎症反应的影响.方法 取幼龄大鼠建立癫痫模型,随机分为模型组、CircZNF609敲低组、阴性对照组、CircZNF609敲低+miR-22-3p inhibitor组,每组12只,另取12只幼龄大鼠作为对照组,分组干预处理后,观察各组大鼠癫痫发作次数和平均发作时间;Morris水迷宫实验检测各组大鼠认知功能;尼氏染色观察各组大鼠海马神经元病理形态变化;TUNEL染色检测各组大鼠海马神经元凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清炎症因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-6、IL-17水平;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠脑组织CircZNF609和miR-22-3p表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠神经元严重损伤,癫痫发作次数与平均发作时间增多,逃避潜伏期延长,游泳时间百分比、海马神经元凋亡率、血清炎症因子PGE2、IL-6与IL-17水平、脑组织CircZNF609表达升高,脑组织miR-22-3p表达降低(均P＜0.05).与模型组相比,CircZNF609敲低组大鼠神经元损伤减轻,癫痫发作次数与平均发作时间减少,逃避潜伏期缩短,游泳时间百分比、海马神经元凋亡率、血清炎症因子PGE2、IL-6与IL-17水平、脑组织CircZNF609表达降低,脑组织miR-22-3p表达升高(均P＜0.05);阴性对照组大鼠各指标无明显变化(P＞0.05).下调miR-22-3p表达可明显减弱敲低CircZNF609对癫痫大鼠脑组织神经细胞凋亡及炎症反应的抑制作用.结论 敲低CircZNF609可抑制幼龄癫痫大鼠脑组织神经细胞凋亡及炎症反应,减轻癫痫发作症状,其作用机制可能与上调miR-22-3p表达有关.

目的 探索环状核糖核酸锌指蛋白609(circZNF609)是否通过靶向微小核糖核酸-1287-5p(miR-1287-5p)影响皮肤鳞状细胞癌(cSCC)A431细胞增殖和凋亡.方法 应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定circZNF609和miR-1287-5p在cSCC组织中的表达.在cSCC A431细胞中转染小分子干扰阴性对照(si-NC组)、si-circZNF609(si-circZNF609组)、miR阳性对照(miR-NC组)、miR-1287-5p模拟物(miR-1287-5p组)、si-circZNF609+anti-miR-NC(si-circZNF609+anti-miR-NC组)、si-circZNF609+miR-1287-5p抑制剂(si-circZNF609+anti-miR-1287-5p组).运用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验、流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blotting)测定细胞活力、克隆形成、凋亡和活化的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、cleaved caspase-9蛋白表达.双荧光素酶报告实验分析circZNF609和miR-1287-5p的靶向关系.结果 circZNF609在cSCC组织中的表达水平比癌旁组织增加约2.85倍,miR-1287-5p在cSCC组织中的表达水平是癌旁组织的34％(P＜0.05).干扰circZNF609表达或miR-1287-5p过表达可降低cSCC A431细胞活力、克隆形成数,提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达(P＜0.05).circZNF609靶向调控miR-1287-5p的表达.下调miR-1287-5p表达逆转了干扰circZNF609表达对cSCC A431细胞增殖和凋亡的作用.结论 干扰circZNF609表达通过靶向miR-1287-5p,抑制cSCC的细胞增殖,促进其凋亡.