目的:探讨外周血B淋巴细胞Cosmc、T-合酶及血清低半乳糖基化IgA1（Gd-IgA1）在过敏性紫癜（HSP）患者中的变化。方法:2014年1- 8月在河北医科大学第二医院皮肤性病科收集门诊或住院HSP患者56例，分为4组，即皮肤型组（22例）、关节型组（9例）、腹型组（12例）、肾型组（13例）。20例健康志愿者为健康对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者外周血B淋巴细胞Cosmc、T-合酶mRNA表达量，凝集素亲和ELISA法检测血清Gd-IgA1水平。多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验，两两多重比较采用LSD- t检验或Nemenyi检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验。 结果:皮肤型组发病时长为（6.27 ± 3.09）d，关节型组（5.56 ± 3.05）d，腹型组（6.75 ± 3.75）d，肾型组（26.23 ± 14.12）d，差异有统计学意义（ χ2= 26.19， P < 0.05）；肾型组发病时长明显长于其他3组病例组（均 P < 0.05）。皮肤型、关节型、腹型、肾型组和健康对照组Cosmc mRNA相对表达量分别为0.849 ± 0.239、0.767 ± 0.181、0.719 ± 0.183、0.459 ± 0.121、1.146 ± 0.232，各组间差异有统计学意义（ F= 23.37， P < 0.05），各病例组均低于健康对照组（ P < 0.01），且肾型组低于其他3组病例组（均 P < 0.01）。各病例组与健康对照组的外周血B淋巴细胞T-合酶mRNA表达水平差异无统计学意义（ F= 1.05， P > 0.05）。皮肤型、关节型、腹型、肾型紫癜组及健康对照组间血清Gd-IgA1水平差异有统计学意义（ F= 7.06， P < 0.05），各病例组Gd-IgA1水平均高于健康对照组（均 P < 0.05），肾型组高于其他3组病例组（均 P < 0.05）。HSP组患者血清Gd-IgA1水平与Cosmc mRNA相对表达量显著负相关， r s=-0.50， P < 0.01。 结论:HSP患者Cosmc mRNA表达水平下降，血清Gd-IgA1水平升高，二者呈负相关。

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对lncRNA TUG1介导miR-320-5p调控PTEN/Cosmc通路的影响.方法:采用"牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖"联用法构建IgAN大鼠模型,32只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸组[3.6 g/(kg·d)],每组8只,均连续给药6周.留取血液、肠黏膜及肾组织标本,分别应用ELISA法检测血清磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、核心1β1,3半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosme)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)水平;采用 Real-time PCR、Western blot 检测肠黏膜组织、肾脏组织 lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosme mRNA及蛋白表达.结果:①血清PTEN、Cosme、Gd-IgA1:与模型组比较,各给药组PTEN、Cosmc升高明显(均P＜0.01)、Gd-IgA1减少明显(P＜0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN、Cosmc升高及Gd-IgA1减少明显(均P＜0.01).②RT-PCR法检测肠黏膜组织、肾组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA表达:与模型组比较,氯沙坦钾片组肠黏膜组织及肾组织TUG1升高明显(均P＜0.01),miR-320减少明显(P＜0.01);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肠黏膜组织及肾组织TUG1、PTEN升高明显,肠黏膜组织Cosmc升高明显(均P＜0.01),肾组织miR-320减少明显(P＜0.01).③Western blot检测肠黏膜组织、肾组织PTEN、Cosmc蛋白表达:与模型组比较,各给药组肠黏膜组织PTEN蛋白表达升高(P＜0.05),肾炎止血丸组Cosmc表达升高明显(P＜0.05);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN升高有显著差异(P＜0.05),Cosmc表达升高无显著差异(P＞0.05).各给药组肾组织Cosmc表达升高有极显著差异(P＜0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肾组织PTEN升高有显著差异(P＜0.05),Cosmc表达升高有极显著性差异(P＜0.01).结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠肾损伤;其作用机制可能与参与lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路有关.

目的 探讨固本通络方对IgA肾病小鼠肠道细菌脂多糖(LPS)和糖基化缺陷IgA1(Gd-IgA1)的干预及肾保护作用.方法 将36只雄性小鼠分为正常对照组、模型组、固本通络方低剂量组、固本通络方中剂量组、固本通络方高剂量组、依立托仑组.实验采用ddY小鼠构建IgA肾病动物模型,将模型组和各药物组进行造模,中药干预各组分别予以固本通络方免煎颗粒低(13.2 g/kg)、中(26.4 g/kg)、高(52.8 g/kg)3种不同剂量药液灌胃给药,正常对照组和模型组小鼠给予0.9％氯化钠溶液灌胃(10 mL/kg),依立托仑组予以腹腔注射依立托仑药液,各药物组每天给予药物1次,连续8周.干预4周、8周后,测定各组24 h尿蛋白定量;8周测定血清及肠道黏膜LPS、IgA、Gd-IgA1水平,观察肾脏病理染色及右肾IgA沉积情况,实时荧光定量PCR检测Cosmc基因表达,Western blot法测定Cosmc蛋白表达及IgA肠道菌群特异性,流式细胞术检测肠道B淋巴细胞活化率及分泌IgA前体B淋巴细胞比率,对肠道黏膜组织LPS水平与B细胞活化率及IgA前体B细胞比率行相关性分析.结果 固本通络方可降低24 h尿蛋白定量水平及血清肌酐水平(P＜0.05).HE染色发现,与模型组相比,固本通络方用药组肾小球系膜细胞、内皮细胞及基质增生显著减少,肾小球系膜区IgA沉积显著改善;血清及肠道黏膜LPS水平检测发现,与模型组比较,各中药干预组均能降低小鼠血清和肠道黏膜组织LPS、Gd-IgA1和IgA水平(P＜0.05);降低B细胞活化率及IgA前体B细胞比率(P＜0.05),qRT-PCR和Western blot结果显示固本通络方能够显著降低小鼠粪便培养中菌落蛋白表达水平,上调Cosmc蛋白和Cosmc基因表达水平(P＜0.05).LPS水平与B细胞活化率及IgA前体B细胞比率均呈正相关(P＜0.05).结论 固本通络方能有效降低IgA肾病小鼠蛋白尿及血清肌酐水平,减轻肾脏病理损伤及肾小球系膜区IgA沉积,其作用可能和固本通络方降低IgA肾病小鼠血清及肠道LPS水平,降低B淋巴细胞活化率,Cosmc表达上调相关.

目的 探索肿瘤相关糖类抗原Tn在子宫内膜癌病人中的表达及其生物学意义.方法 首先采用免疫组化染色(IHC)技术检测人子宫内膜癌组织、子宫内膜非典型增生组织和正常子宫内膜组织的Tn抗原表达状况;然后采用CRISPR/Cas9技术特异性敲除人子宫内膜癌细胞(Ishikawa、HEC-1B)的Cosmc基因以诱导Tn抗原表达;应用流式细胞技术检测Tn抗原的表达,并采用Transwell实验检测Tn抗原异常表达对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响;最后采用western blot检测Tn抗原表达是否影响子宫内膜癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT).结果 免疫组化染色结果显示,正常子宫内膜组织中不表达Tn抗原,但子宫内膜非典型增生组织中可检测到低表达的Tn抗原,在子宫内膜癌组织中Tn抗原呈高表达,主要定位在细胞膜和胞浆;western blot结果显示敲除人子宫内膜癌细胞的Cosmc可诱导Tn抗原阳性表达;体外细胞实验显示Tn抗原明显促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力.此外,Tn抗原表达显著激活了 EMT信号通路,表现为上皮相关蛋白E-cadherin表达水平下调和间质相关蛋白N-cadherin和Vimentin表达水平上调.结论 肿瘤相关糖类抗原Tn在子宫内膜癌中异常高表达,与肿瘤侵袭转移有相关性;Tn抗原表达可促进子宫内膜癌细胞迁移和侵袭,其机制可能激活EMT信号通路有关.

目的 探讨补肾利咽方对IgA肾病模型大鼠的疗效及调节TLR4信号通路的作用机制.方法 SD大鼠随机分组后,复制IgA肾病大鼠模型.给药后观察各组大鼠尿RBC、UTP、血清SCr、BUN、肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清TLR4、NF-κB、IL-6含量.结果 ①与空白组比较,模型组大鼠尿RBC、UTP及肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清TLR4、NF-κB、IL-6含量均增高(P<0.05);②与模型组比较,补肾利咽方各组大鼠UTP、尿RBC、肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清中TLR4、NF-κB、IL-6含量均降低(P<0.05);肾功能未见明显变化.结论 ①补肾利咽方可有效减轻IgA肾病大鼠血尿、蛋白尿;②补肾利咽方通过改善黏膜感染诱发的TLR4信号转导系统介导的免疫反应,调整IgA1糖基化过程中的关键酶C1GalT1及分子伴侣Cosmc,减少异常糖基化的IgA1,减轻肾损伤.

目的:探究益气养阴活血方对 IgA 肾病小鼠外周血 B 淋巴细胞核心 1β1,3-半乳糖基转移酶(C1β-3GaLT11)及其伴侣蛋白(Cosmc)表达和肠道黏膜免疫反应的影响.方法:小鼠随机分为空白组、模型组、中药(益气养阴活血方)低、中、高剂量组,每组15 只.除空白组外,其余各组建立小鼠IgA肾病模型.检测血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平;检测血清Gd-IgA1 水平及肾小球系膜区Gd-IgA1 荧光强度;HE染色及PAS染色观察肾组织病理改变;HE染色观察结肠组织病理变化;qRT-PCR法检测外周血B淋巴细胞CosmcmRNA、C1β-3-GaLT11 mRNA表达;Western Blot法检测结肠组织中Cosmc、C1β-3-GaLT11、B细胞活化因子(Baff)、TGF-β表达及肾组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素17(IL-17)、TGF-β蛋白表达水平.结果:与空白组相比,模型组小鼠Gd-IgA1 沉积、蛋白尿和血尿症状增加,肾功能降低,肾小球系膜增生及肾小管炎症浸润明显,肠黏膜炎症浸润等病理损伤严重,肠道及外周血 B淋巴细胞表面的Cosmc及C1β-3-GaLT11 活性降低,Gd-IgA1 生成增多(P<0.05).益气养阴活血方可降低Gd-IgA1 沉积,改善IgA肾病小鼠蛋白尿和血尿症状,促进肾功能恢复,缓解肾小球系膜增生及肾小管炎症浸润,缓解肠黏膜炎症浸润,提高肠道及外周血B淋巴细胞表面的Cosmc、C1β-3-GaLT11 活性,抑制Gd-IgA1 生成(P<0.05).结论:益气养阴活血方可改善肠黏膜损伤、提高肠道及外周血B淋巴细胞表面的Cosmc、C1β-3-GaLT11 活性,使其催化IgA糖基化能力增强,减少Gd-IgA1 生成及沉积,缓解Gd-IgA1 诱发的IgA肾病肾损伤.

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对TLR4/BAFF/APRIL通路的影响.方法:采用"牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖"联用法构建IgAN大鼠模型,48 只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸高剂量组[3.6 g/(kg·d)]、中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、低剂量组[0.9 g/(kg·d)],每组8 只,均连续给药6 周.留取尿液、血液、肾组织标本,分别进行尿红细胞计数、尿白蛋白检测;ELISA法检测大鼠血清Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、B细胞活化因子(BAFF)、增殖诱导配体(APRIL)、核心 1β1,3 半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosmc)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)、白介素 6(IL-6)水平;光镜观察各组大鼠肾组织病理变化.结果:①尿红细胞、尿蛋白变化:与模型组比较,各给药组减少明显(均P＜0.01);与阳性组组比较,肾炎止血丸中剂量组、高剂量组减少明显(均P＜0.01);与低剂量组比较,肾炎止血丸中剂量组、高剂量组减少明显(均P＜0.01).②TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Cosmc、Gd-IgA1、IL-6:与模型组比较,各给药组TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6 减少明显(均P＜0.01),Cosmc升高明显(P＜0.01);与阳性组比较,肾炎止血丸低剂量组NF-κB、BAFF减少明显(均P＜0.01),中剂量组TLR4、Gd-IgA1 减少(均P＜0.05)及IL-6 减少明显(P＜0.01),高剂量组TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6 减少明显(均P＜0.01),Cosmc升高明显(P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量及高剂组TLR4、NF-κB、Gd-IgA1、IL-6 减少明显(均P＜0.01),中剂量组BAFF减少明显(P＜0.01),高剂量组BAFF减少(P＜0.05),高剂量组APRIL减少明显(P＜0.01)及Cosmc升高明显(P＜0.01);与中剂量组比较,高剂量组治疗后NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6 减少明显(均P＜0.01),Cosmc升高明显(P＜0.01).③病理学变化:与模型组比较,各给药组 IgA、C3 的免疫荧光累积光密度值(IOD)减少明显(均 P＜0.01);与阳性组比较,高剂量组C3 IOD减少明显(P＜0.01);与低剂量组比较,高剂量组C3 IOD减少明显(P＜0.01);与中剂量组比较,高剂量组 IgA IOD减少(P＜0.05),高剂量组 C3 IOD减少明显(P＜0.01).结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠蛋白尿,减轻血尿及肾组织病理损伤;其作用机制可能与调控TLR4/BAFF/APRIL通路有关.

原发性IgA肾病(IgAN)是全球最常见的原发性肾小球疾病之一,也是终末期肾病(ESRD)重要病因之一.IgAN是以IgA或IgA为主的免疫球蛋白沉积在肾小球系膜区及毛细血管袢并引起一系列临床病理改变为特征的原发性肾小球疾病,目前将其视为一组具有相同免疫病理特征的临床疾病[1,2].近年的研究发现IgAN患者血清中IgA1的铰链区存在糖基化缺陷,糖基化位点减少,不易被肝脏清除,导致其与肾小球系膜细胞上IgA1 Fc受体结合力增强,从而诱导系膜细胞分泌炎症因子、活化补体,导致IgAN的病理改变和临床症状[3,4].研究表明在IgA1分子铰链区形成O-聚糖位点过程中需要β1,3半乳糖转移酶(C1GalT1)及其分子伴侣Cosmc协助,在Cosmc的帮助下该酶催化IgA1分子铰链区O-聚糖的延长,研究表明在IgAN患者B细胞中Cosmc表达下降,从而影响C1 GalT1活性,造成铰链区0-聚糖的半乳糖糖基化缺陷[5,6].microRNA又称miRNA,是一类长约22个核苷酸的非编码小RNA分子,可以和靶基因mRNA3’端非翻译区互补结合,在翻译后水平调节基因表达.多种证据表明miRNAs可参与基因的转录后调控,并且在包括肾脏疾病在内的多种疾病的发生发展中起到重要作用[7,8].本文主要对与低糖基化IgA1相关的micro-RNA在IgAN中研究进展进行综述,从而为IgAN的预防和治疗提供理论依据.

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)联合固本通络方对IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)小鼠的治疗效果及其分子机制.方法 建立α1K1-CD89 Tg转基因IgAN小鼠模型,按照数字表法随机分为空白对照组、模型组、骨化三醇组、中药组和中药+HBO组,观察各组小鼠外周血IgA1、异常糖基化IgA1、白介素-6(interleukin 6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α的表达水平;检测肠黏膜C1GalT1、伴侣蛋白Cosmc的表达及肾脏损伤情况[尿蛋白、血肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)].结果 与空白对照组治疗前比较,模型组、骨化三醇组、中药组和中药+HBO组小鼠外周血IgA、异常糖基化IgA1、IL-6及TNF-α水平均明显上升(P<0.05),Scr和BUN水平则无明显差异(P>0.05);治疗后,与模型组比较,骨化三醇组、中药组、中药+HBO组小鼠尿蛋白、IgA1、异常糖基化IgA1、IL-6及TNF-α水平均明显降低(P<0.05),且中药组降低程度大于骨化三醇组,但低于中药+HBO组;治疗后各组取小鼠肠黏膜组织,与空白对照组比较,模型组小鼠肠黏膜组织中C1GalT1和Cosmc表达明显降低;与同模型组比较,骨化三醇组、中药组、中药+HBO组C1GalT1和Cosmc表达明显升高(P<0.05),其中以中药+HBO组效果最明显.结论 HBO治疗可增强固本通络方剂对IgAN小鼠的治疗效果,主要通过降低IL-6及TNF-α的表达、抑制B细胞的异常激活、并促进CIGALT1和Cosmc的表达实现.

目的 探讨细胞因子对IgA肾病(IgAN)患者IgA1 O-糖基化的影响,分析相关影响机制.方法 选取2017年4-10月于新疆军区总医院肾内科就诊的IgAN患者35例作为IgAN组,招募同期于医院就诊的健康志愿者15例作为对照组.对2组人群的IgA1分泌细胞与细胞因子共培养,观察细胞因子对IgA1 O-糖基化的影响及对C1GalT1和ST6GalNAc-Ⅱ酶活性和表达基因的影响;采用siRNA敲低技术,干扰IgA1分泌细胞中C1GALT1和(或)ST6GALNAC2的表达,验证细胞因子与之相关性;开发基于假设的体外测定,进一步诠释细胞因子对IgAN患者IgA1 O-糖基化的影响机制.结果 IL-6可显著促进IgA1的产生(P<0.05),显著增加IgA1半乳糖缺乏(P<0.05),对IgAN患者作用更明显(P<0.05).IL-6显著增加ST6GalNAc-II活性(P<0.05),显著降低C1GalT1活性(P<0.01);IL-6显著上调ST6GALNAC2基因表达,同时显著降低C1GALT1和COSMC基因表达(P<0.01),与测定酶活性变化一致.siRNA干扰技术使每个基因mRNA水平降低了65％～75％.C1GALT1敲除显著促进IgAN细胞和对照组的IgA1半乳糖缺乏(P<0.05);ST6GALNAC2敲减仅明显降低IgAN细胞分泌的IgA1半乳糖缺乏(P<0.05),敲低后分泌的IgA1半乳糖含量与对照组相当.IgA1 O-聚糖的有效半乳糖基化可以通过过早的唾液酸化实质性降低.结论 细胞因子IL-6通过对IgAN患者ST6GALNAC2和C1GALT1酶的活性及其基因表达调节,上调IgAN患者IgA1的半乳糖缺乏,进而增加免疫复合物形成和导致疾病恶化.