目的:观察并分析家族性渗出性玻璃体视网膜病变（FEVR）不同临床表型的相关因素。方法:回顾性系列病例研究。2012年1月至2021年12月于北京大学人民医院眼科检查确诊的FEVR患者42例84只眼以及家系中一级亲属68名纳入研究。患者来自42个无血缘关系家庭。患者中，男性31例，女性11例；首诊年龄（16.6±33.7）个月。外院转诊21例，均为眼底筛查发现病变；首诊本院21例。早产儿、足月儿分别为4、38例。有FEVR阳性家族史2例。均为FEVR分期1~5期。年龄<5岁者，全身麻醉后广角数码儿童视网膜成像系统行荧光素眼底血管造影（FFA）检查；≥5岁者，行常规FFA检查。来自28个家系的一级亲属68名均行常规眼底检查及FFA检查。行基因检测26个家系，其中先证者26例，一级亲属57名。对已知参与FEVR的基因共受体低密度脂蛋白受体相关蛋白5（ LRP5）、Wnt受体卷曲蛋白4（ FZD4）、Norrie病（ NDP）、四旋蛋白12（ TSPAN12）、连环蛋白β1（ CTNNB1）基因进行高通量测序和分子遗传学分析。观察患者临床表现及FEVR的基因型与临床表型相关性。 结果:42例中，首诊症状为斜视及眼球震颤13例，中位年龄12个月；不追物或视力相关症状8例。84只眼中，FEVR分期1期或2期、3期或4期、5期分别为50（59.5%，50/84）、31（36.9%，31/84）、3（3.6%，3/84）只眼。首诊年龄>3个月的23例中，至少1只眼病变分期为3期以上16例（69.6%，16/23）。行眼底检查的68名一级亲属中，眼底FEVR样改变22名（32.4%，22/68）。行基因检测的26个家系中，检出FEVR相关基因的16种变异13个家系（50%，13/26），其中 LRP5基因突变10种，最常见。单基因突变10个家系，其中 LRP5、 FZD4、 CTNNB1基因分别为6、2、2个家系； LRP5基因复合杂合突变1个家系； LRP5基因和 NDP双基因突变1个家系； LRP5和 TSPAN12双基因突变1个家系。携带致病性FEVR基因13例先证者中，双眼病变程度一致者6例，不一致者7例，基因突变和临床表型之间未见明显相关性。 结论:FEVR临床表型和基因型具有高度异质性；除首诊年龄外，未发现明确影响FEVR临床表现的因素。

目的:分析伴有早发性高度近视(eoHM)的遗传性眼病基因型及其与表型的关系。方法:收集2019年1月至2020年6月于宁夏眼科医院就诊的伴有eoHM家系，详细询问并记录先证者及其家庭成员的病例资料，完善相关眼科检查。抽取患者及家属外周静脉血，提取全基因组DNA，应用目标序列捕获测序技术对先证者进行致病基因突变筛查，对检测到的可疑致病位点进行Sanger验证及家系共分离分析。根据ACMG指南对新发现基因变异进行致病性评估。检索既往已报道的伴有eoHM的遗传性眼病原始文献。分析突变基因及临床表型的关系。结果:共收集到伴有eoHM家系20个，其中8个家系检测到与遗传性眼病相关的致病性基因变异，8个先证者中诊断为家族性渗出性玻璃体视网膜病变2个，X-连锁隐性遗传视网膜色素变性、先天性静止性夜盲、Stickler综合征、全色盲、Leber先天性黑矇和回旋状脉络膜视网膜萎缩(GA)各1个。8个家系的先证者首诊年龄4~7岁，均诊断为高度近视，屈光度均≤－6.00 DS。基因检测8个家系的先证者分别携带 FZD4基因杂合性变异c.313A>G(p.Met105Val)、 TSPAN12基因变异c.14_15insAAGA (p.Asp5fs *)、 RPGR基因杂合性移码变异c.2234_2237del (p.Arg745fs *)、 GPR179基因复合杂合性变异c.481C>T (p.Gln161Ter *)和c.355>T (p.Arg119Cys *)、 COL2A1基因移码变异c.1659_1660insACGGTGACC CTGGCCGTCCTGG (p.Pro554fs *)、 PDE6B复合杂合性变异c.1811C>T(p.Thr604Ile *)和c.967G>A (p.Gly323Ser)、 GUCY2D基因复合杂合性变异c.604_619delTCCACGGCACTCAGGG (p.Ser202fs *)和c.995G>C (p.Arg332P)、 OAT基因纯合性变异c.772C>T (p.Pro241Leu)，其中7个为新发现的突变位点。与既往文献相比，本研究详细分析了8个家系的临床及基因表型，为伴有eoHM的遗传性眼病的诊断提供依据。 结论:eoHM与一些遗传性眼病密切相关，可能是儿童最早就诊的原因，也是临床医生发现潜在的遗传性眼部疾病的重要线索。建议对eoHM患儿进一步行眼科结构和功能的临床评估及遗传筛查。

目的:探讨miR-141在糖尿病肾病进展中的作用及其潜在机制。方法:通过脂质体转染法分别将 miR-141、miR-141 mimic、miR-141 sponge转入人肾小球系膜细胞中，高糖培养构建体外模拟糖尿病肾病模型。利用流式分析和ELISA法检测miR-141对细胞凋亡和炎症反应的影响。TargetScan数据库预测 miR-141的下游靶基因，通过双荧光素酶报告基因实验验证两者的结合作用。过表达靶基因FZD4，检测FZD4对miR-141在高糖培养的肾小球系膜细胞中发挥的具体作用。利用Western印迹法检测下游Wnt/β-catenin信号通路及下游靶基因的变化。结果:miR-141的上调促进了细胞凋亡以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达（ P<0.05）；miR-141的下调抑制了细胞凋亡以及TNF-α、IL-6的产生（ P<0.05）。miR-141负调控FZD4的表达，FZD4的过表达逆转了miR-141对高糖培养肾小球系膜细胞凋亡和炎症因子分泌的促进作用（ P<0.05）。敲低miR-141显著促进了Wnt/β-catenin的表达，抑制FZD4则减弱了Wnt/β-catenin的表达（ P<0.05）。siβ-catenin可以消除miR-141的干扰及对照高糖培养肾小球系膜细胞凋亡比例和炎症因子分泌的差异（ P<0.05）。 结论:miR-141通过靶向FZD4调控Wnt/β-catenin信号通路，促进糖尿病肾病的进展。

家族性渗出性玻璃体视网膜病变（FEVR）是一种严重的遗传性视网膜血管疾病。其临床表现多样，患者病情轻重不一，严重者可能双眼致盲。FEVR的致病基因也十分复杂，目前已发现的经典和候选致病基因有十余种，包括 NDP、 FZD4、 LRP5、 TSPAN12、 CTNNB1、 KIF11、 ZNF408、 RCBTB1、 LRP6、 CTNNA1、 CTNND1、 JAG1、 ILK、 ATOH7、 DLG1、 DOCK6、 ARHGP31和EVR3区域。这些致病基因涉及Wnt/β-连环蛋白路径、Norrin/β-连环蛋白路径、Notch通路等多个信号通路，通过调控和影响视网膜浅层、深层血管发育以及玻璃体血管退化、血管内皮细胞间连接和血视网膜屏障稳态等结构和生理病理过程来最终导致疾病发生发展。

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)1010001N08Rik和GATA6在高氧暴露小鼠肺癌细胞(Lewis lung carcinoma cell,LLC细胞)中表达量的变化与相关性,及其介导Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤的机制.方法:(1)将LLC细胞分为空气组、高氧暴露24 h组和高氧暴露48h组,应用RT-PCR和Western blot法分别检测lncRNA1010001N08Rik、GATA6、Wnt及β-catenin的mRNA及相关蛋白表达水平.(2)将LLC细胞分为无干扰空气组、无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组、siRNA 干扰高氧组.应用 RT-PCR 和 Western blot 法分别检测 lncRNA1010001N08Rik、GATA6、Wnt 及 β-catenin 的 mRNA及相关蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡.(3)利用GraphPadPrism 9.4.1进行数据可视化.(4)采用SPSS 26.0统计软件进行数据处理,两组间数据比较采用两独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.(5)将Wnt、Fzd2、GATA6等相关基因输入string11.0数据库构建PPI网络并导出PPI网络图.结果:(1)与空气组相比较,高氧暴露24h组和48h组GATA6的mRNA表达量下降,lncRNA1010001N08Rik、Wnt、β-catenin的mRNA表达量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).(2)与空气组相比,高氧暴露24h组和48h组GATA6蛋白表达量下降,Wnt、β-catenin蛋白表达量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).(3)与无干扰空气组相比,无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组的GATA6的mRNA表达量和蛋白表达量下降,1010001N08Rik的mRNA表达量、Wnt、β-catenin的mRNA表达量和蛋白表达量增加;无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组的比较差异无统计学意义;与干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组相比,siRNA干扰高氧组GATA6的mRNA表达量和蛋白表达量增加,1010001N08Rik的mRNA表达量、Wnt、β-catenin的mRNA表达量和蛋白表达量下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05).(4)与无干扰空气组相比,无干扰高氧组、NC-siRNA干扰高氧组细胞凋亡率增加;无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组的比较差异无统计学意义;与无干扰高氧组与NC-siRNA干扰高氧组相比,siRNA干扰高氧组的细胞凋亡率下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05).(5)根据string11.0数据库导出Wnt、Fzd2、GATA6等相关基因的PPI网络图显示,GATA6与Wnt有密切相关.结论:高氧暴露下,LCC细胞中lncRNA1010001N08Rik可能通过下调GATA6的表达激活Wnt/β-catenin信号通路的传导,从而促进高氧肺损伤的形成过程.

目的:探讨氧糖剥夺再灌注(OGD/Rep)后神经元细胞内Wnt5a/FZD2/Ca2+通路的变化.方法:采用OGD/Rep模型构建神经元细胞局部缺血/再灌注损伤,分正常组、再灌注(0、3、6、9、12、24 h)组.免疫荧光鉴定皮层神经元细胞,CCK-8法确定神经元细胞OGD时间,Western blotting检测非经典Wnt/Ca2+信号通路中Wnt5a、FZD2、IP3-R和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白的变化,免疫荧光和酶标仪检测细胞内Ca2+和活性氧(ROS)的含量.结果:MAP-2免疫荧光鉴定原代皮层神经元细胞纯度较高.与正常组比较,神经元细胞OGD 3 h后细胞存活率为55.46％;与正常组比较,OGD/Rep后非经典Wnt/Ca2+信号通路相关蛋白Wnt5a(3、6、9、12、24 h)、FZD2(3、6、9 h)、IP3-R(6、9、12、24 h)和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ(6 h)的相对表达量上调(P<0.05～P<0.01);与正常组比较,OGD/Rep后神经细胞内Ca2+和ROS的表达量均升高(P<0.01).结论:神经元细胞OGD/Rep能激活Wnt5a/FZD2/Ca2+信号通路.

目的 采用RNA测序技术对眼睑基底细胞癌差异基因进行筛选和分析.方法 选取2021年7月至11月因眼睑基底细胞癌就诊于河北省眼科医院并行扩大切除及一期眼睑重建的患者6例,分别取切除的部分癌组织及修复缺损时修剪的癌旁正常组织各一块进行研究.通过RNA测序技术进行建库测序.使用DESeq2软件设定P＜0.05及|log2(foldchange)|＞1为显著差异表达的阈值.鉴定出差异表达的基因.采用clusterPro-filer软件对差异基因集进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,进一步分析这些特异性基因的生物学意义.结果 使用DESeq2软件进行癌组织和癌旁组织之间的差异表达分析,共筛选出1 317个差异基因,其中在6例癌组织中表达上调的基因有906个,表达下调的基因有411个.GO富集分析结果中上调最显著的前30个差异基因主要富集于体液免疫反应、免疫球蛋白复合物、B细胞受体信号通路、细胞外基质、抗原结合、受体调节剂活性等方面.下调基因前10位在生物过程、细胞组成、分子功能层面主要与表皮发展相关.KEGG通路富集主要集中在黑色素生成通路及WNT信号通路、免疫相关信号通路等,相关基因通路有8个.根据基因上调的显著性由大到小,最终确定核心基因包括FZD2、PTCH1、WNT7B、TCF3、MMP-9、TEAD2.结论 基底细胞癌的发生与各种通路相互影响和共同作用密切相关,各种高表达基因中,FZD2、PTCH1、WNT7B、TCF3、MMP-9、TEAD2在眼睑基底细胞癌患者组织中表达升高最显著,与眼睑基底细胞癌的发生和发展有密切关系.

目的:探讨配体WNT3A通过稳定和激活FZD2(Frizzled2)增加成骨细胞骨形成的活性及其分子机制.方法:24 只雌性6～8 周龄C57BL/6J小鼠随机分为4 组,对照(Control)组,假手术(Sham)组,双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)诱导骨质疏松症(Osteoporosis,OP)小鼠模型组(OVX 组),OVX +雌二醇治疗组(OVX+E2 Treatment组),每组6 只小鼠.建立OVX小鼠模型.Western blot法测定小鼠后肢胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP 和 Runx2 以及磷酸化(p-)STAT3、STAT3、p-JAK2 和JAK2 的表达水平.CCK-8 测定小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1 的增殖能力.腺病毒-shRNA-FZD2 介导敲低MC3T3-E1 细胞中的FZD2.免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation,co-IP)法测定WNT3A处理MC3T3-E1 细胞前后FZD2 与泛素(ubiquitin,Ub)的直接结合情况.结果:与OVX组相比,OVX+E2 Treatment组小鼠胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP 和Runx2 的表达水平均被上调(P<0.05).与Control组相比,WNT3A Treatment组MC3T3-E1 细胞中 FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP 和Runx2 的表达水平均升高(P<0.05);细胞增殖能力增强(P<0.05).与WNT3A Treatment组相比,WNT3A Treatment+Adv-shRNA-FZD2 组FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP 和Runx2 的表达水平均降低(P<0.05);p-STAT3 和p-JAK2 的磷酸化水平均降低(P<0.05);增殖能力降低(P<0.05);而2 组细胞中STAT3 和JAK2 的表达水平无统计学差异(P>0.05).在 IP:Ub 组中,与WNT3A 处理(-)的细胞相比,WNT3A 处理(+)的细胞中 FZD2 的表达水平升高(P<0.05).结论:WNT3A的促骨合成代谢活性是通过结合并稳定FZD2 激活Wnt/β-Catenin信号通路实现的.

[目的]探讨DANCR在人胚胎干细胞(hESC)向内胚层(DE)分化中的作用.[方法]建立体外诱导hESC向DE分化的体系,检测DANCR的表达水平与DE分化的相关性;利用慢病毒体系敲低hESC的DANCR表达水平,将敲低DANCR的hESC进行DE分化;用qPCR和Western blot方法检测DE分子标志物SOX17和FOXA2,以及原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC的表达水平;用Dual luciferase reporter assay和qPCR证明在DE分化过程中DANCR与WNT通路的相互作用.[结果]体外诱导hESC向DE分化的体系能够有效模拟体内DE分化,DANCR的表达水平随DE分化进程逐渐下降.建立敲低DANCR的hESC细胞株,DANCR表达水平相比对照组显著降低(P＜0.001).干扰DANCR表达使分化早期的原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC,以及分化后期的DE分子标志物 SOX17和FOXA2 的mRNA表达水平相比对照组显著降低(全部P＜0.05).并且,在DE分化过程中,敲低DANCR组的WNT通路的转录活性相比对照组显著降低(P＜0.05),表现为WNT通路下游基因FZD5,FZD8,SFRP1,FRZB和ANKRD6 mRNA表达水平明显减少(P＜0.05).然而,敲低DANCR对TGFβ通路的SMAD2/3和p-SMAD2 蛋白表达水平没有显著影响(P＞0.05).人为激活细胞内β-CATENIN蛋白活性,能够有效回补由于敲低DANCR导致的DE分化缺陷.[结论]DANCR在DE分化过程中逐渐下调并促进DE分化发生,DAN-CR可能通过与WNT通路相互作用参与调控hESC向DE分化.

目的 构建 CTHRC1 基因在胃癌中的 ceRNA调控网络,并进行免疫相关性分析.方法 利用 TCGA 数据库,下载胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织全基因组测序信息和临床信息,通过 R软件分析 CTHRC1 基因的表达与患者预后的临床相关性,同时进行多数据库和 PCR实验进行相互验证.通过 starBase数据库寻找与 CTHRC1 基因结合的靶向 miRNA、lncRNA,从而筛选出对患者总体生存率有影响的关键 miRNA和 lncRNA,并构建 ceRNA调控网络.对 CTHRC1 基因的表达情况与免疫细胞的浸润量、肿瘤微环境、甲基化、肿瘤干细胞指数等多组学的相关性进行探讨.构建 CTHRC1 基因的 PPI网络,并进行基因通路富集分析.结果 胃癌患者肿瘤组织中 CTHRC1 基因表达量明显高于正常组织,高表达 CTHRC1 基因组患者总体生存时间明显短于低表达组.Cox回归分析发现 CTHRC1 基因表达量是影响胃癌患者总体生存时间的独立危险因素.共筛选到 3 个关键 miRNA(hsa-let-7g-5p、hsa-let-7f-5p、hsa-miR-30b-5p)和 3 个关键lncRNA(MIR99AHG、CARMN、PWAR5),构建了 3 条ceRNA网络图.CTHRC1 基因高低表达组的胃癌患者,免疫细胞浸润量明显不同,且 CTHRC1 基因表达与免疫检查点基因表达均呈正相关.PPI 网络发现 CTHRC1 基因与 DVL3、DVL1、DVL2、ROR2、WNT3A、FZD5、FZD6 基因表达明显具有相关性,相关系数＞0.9.多组学分析发现,CTHRC1 基因表达与肿瘤干细胞指数、肿瘤微环境、甲基化程度均具有统计学意义上的相关性.富集分析发现CTHRC1 基因在多条通路上高富集.结论 MIR99AHG/CARMN-hsa-let-7g-5p-CTHRC1 和 PWAR5-hsa-miR-30b-5p-CTHRC1 组成的 3 条 ceRNA网络中的基因,可能是影响胃癌患者预后的关键基因,且与免疫细胞具有明显的相关性.