目的 探讨大鼠视盘筛板部位原代星形胶质细胞体外分离纯化培养方法.方法 在解剖显微镜下分离成年大鼠视盘及其后一小段视神经,切块后放入含DMEM/F-12培养瓶中进行原代培养.经2.5g·L-1胰蛋白酶消化、星形胶质细胞选择性培养基纯化,传代2次后,用胶质细胞标志性抗体胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)和波形蛋白(Vimentin)进行免疫荧光化学染色;证实为星形胶质细胞后,用表皮生长因子刺激星形胶质细胞24h,观察其形态变化并用Westem blot法检测培养细胞GAFP、NCAM和Vimentin蛋白的表达情况.结果 组织块贴壁后10 d左右,细胞开始爬出,且形态各异.经星形胶质细胞选择性培养基纯化后,细胞形态多呈星形或不规则形,胞质丰富;免疫荧光化学染色显示GFAP、NCAM、Vimentin蛋白染色阳性,阳性细胞率达90％以上;表皮生长因子刺激后,细胞增生,形状发生改变,且与空白对照组相比,刺激后GAFP、Vimentin和NCAM蛋白表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 本方法可在体外培养并获得纯度较高的大鼠视盘筛板部位的原代星形胶质细胞.

目的 分析孕中期行唐氏综合征的血清学的产前筛查和无创的产前基因筛查的结果,为临床上孕中期的临床的唐氏筛查的检验提供相关参考.方法 以2016年9月至2018年9月于我院行产前检查的8635例的15-20w的孕妇作为研究对象,并进行MSAFP、Free-β-HCG、uE3、Inhibin-A的血清学检测,结合孕妇的年龄等各因素计算21-三体综合征、18-三体综合征、开放性神经管缺陷的风险系数,并对高风险的孕妇进行外周血的无创基因诊断检测和超声检查.整合相关检查和结局资料行统计分析.结果 8635例孕妇中,有低风险孕妇8122例,高风险孕妇52 3例,阳性检出率为6.06％(523/8635).其中唐氏综合征阳性有353例,阳性率为4.09％ (353/8635);18-三体综合征阳性有33例,阳性率为0.38％ (33/8635),NTDs阳性有137例,阳性率为1.59％ (137/8635).≥35岁的孕妇的阳性检出率高于＜35岁的孕妇(P＜0.05).对筛查高风险而未接受产前诊断的287例孕妇进行随访,成功随访到196例孕妇,随访率为68.3％ (196/287),发现不良的妊娠的结局有11例,其中唐氏综合征有2例.随访低风险的孕妇发现唐氏综合征有3例,漏筛率为3/8122.Logistic回归分析结果提示年龄、lgh-CG-MoM是唐氏综合征的重要的危险因素,而1gAFP-MoM、LgμE3-MoM是唐氏综合征的保护因素(P均＜0.05).结论 孕中期使用血清学产前筛查及无创产前基因筛查、超声检查对唐氏综合征的诊断效果较为明显,可有效降低唐氏综合征患儿的出生率.

目的 探讨人参皂苷Rg1(GsRg1)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用,并探讨其作用机制.方法 缺血再灌注损伤Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、依达拉奉组(3.2 mg/kg)、GsRg1低(10mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组6组.给药后1d、7d和14 d采用改良m-NSS法进行神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用原位TUNEL方法检测脑组织神经细胞凋亡;采用免疫组化法检测NF-κB、GAFP蛋白水平;采用RT-PCR法、Western Blot法分别检测FZD1、PIWIL1、FOXM1 mRNA和蛋白表达水平.结果 与模型对照组比较,GsRg1低剂量组大鼠神经缺损评分明显降低(P＜0.05),GsRg1中、高剂量组大鼠神经缺损评分明显降低(P＜0.01);GsRg1低、中、高剂量组神经凋亡细胞明显减少(P＜0.01),脑梗死体积显著缩小(P＜0.01),大鼠脑组织NF-κB、GAFP表达显著降低(P＜0.01),FZD1、FOXM1 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P＜0.01),PIWIL1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),且呈现一定的剂量依赖性.结论 GsRg1能够显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,其可能是通过调控FZD1、PIWIL1、FOXM1相关基因及蛋白的表达实现的.

目的 观察电针的超前镇痛效应及对脊髓背角神经元及星形胶质细胞活化的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为正常组、模型组、预电针组、后电针组,每组20只.模型组、预电针组、后电针组采用4％甲醛右侧足底注射方法构建急性炎性疼痛模型,正常组右侧足底注射等量生理盐水,电针取同侧足三里、阳陵泉穴.预电针组先进行电针刺激30 min后再造模,造模后继续捆绑30 min;后电针组前30 min仅捆绑不进行电针刺激,造模后立即行电针刺激30 min;正常组和模型组先捆绑30 min后造模,再捆绑30 min.观察各组大鼠行为学变化(缩足次数和舔足时间),采用免疫荧光染色及Western blot法观察各组大鼠脊髓背角神经元、星形胶质细胞活化情况及c-fos和GAFP表达情况,ELISA法检测各组大鼠脊髓中干扰素-γ(IFN-γ)、P物质含量.结果 与正常组相比,模型组大鼠缩足次数明显增加(P<0.05),舔足时间明显延长(P<0.05);与模型组相比,预电针组、后电针组大鼠缩足次数均明显减少(P均<0.05),舔足时间均明显缩短(P均<0.05),且预电针组效果优于后电针组(P均<0.05).与正常组相比,模型组大鼠脊髓背角神经元、星形胶质细胞的活化明显增强,脊髓中c-fos和GAFP的表达水平、IFN-γ及P物质含量均明显增高(P均<0.05);与模型组相比,预电针组、后电针组大鼠脊髓背角神经元、星形胶质细胞的活化明显减弱,脊髓中c-fos和GAFP的表达水平、IFN-γ及P物质含量均明显降低(P均<0.05),且预电针组改善情况明显优于后电针组(P均<0.05).结论 电针预刺激可通过抑制脊髓背角神经元、星形胶质细胞的活化,减弱神经炎症以及疼痛放大,从而发挥超前镇痛效应.

认知缺陷是抑郁症的核心症状之一,已成为抑郁症治疗面临的的一大挑战.花榈木为我国南方广泛分布的一种绿色乔木,具有抗抑郁作用.然而,花榈木对认知损害的作用尚未见报道.本研究旨在探讨花榈木提取物对慢性应激引起的认知障碍的影响,通过建立小鼠慢性不可预测轻度应激(CUMS)模型,评价花榈木改善认知功能的作用.认知行为采用新物识别和Morris水迷宫测试,免疫组织化学分析海马组织中GFAP和Aβ蛋白的水平,Western Blotting分析海马组织NLRP3、TNF-α和IL-1β蛋白表达.结果显示,花榈木提取物能明显增加小鼠的物体识别辨别指数,明显减少定位航行小鼠平台潜伏期,增加平台穿越次数.花榈木提取物能显著提高海马组织中5-HT、DA、NE的水平;同时提高应激小鼠海马CA1区GFAP水平,降低Aβ沉积,减少海马区NLRP3、TNF-α和IL-1[β的表达.以上数据表明,花榈木提取物能明显改善CUMS小鼠学习记忆障碍,其作用机制与上调GAFP、减少Aβ沉积、缓解炎性有关.

认知缺陷是抑郁症的核心症状之一,已成为抑郁症治疗面临的的一大挑战.花榈木为我国南方广泛分布的一种绿色乔木,具有抗抑郁作用.然而,花榈木对认知损害的作用尚未见报道.本研究旨在探讨花榈木提取物对慢性应激引起的认知障碍的影响,通过建立小鼠慢性不可预测轻度应激(CUMS)模型,评价花榈木改善认知功能的作用.认知行为采用新物识别和Moms水迷宫测试,免疫组织化学分析海马组织中GFAP和Aβ蛋白的水平,Western Blotting分析海马组织NLRP3、TNF-α和IL-1β蛋白表达.结果显示,花榈木提取物能明显增加小鼠的物体识别辨别指数,明显减少定位航行小鼠平台潜伏期,增加平台穿越次数.花榈木提取物能显著提高海马组织中5-HT、DA、NE的水平;同时提高应激小鼠海马CA1区GFAP水平,降低Aβ沉积,减少海马区NLRP3、TNF-α和IL-1β的表达.以上数据表明,花榈木提取物能明显改善CUMS小鼠学习记忆障碍,其作用机制与上调GAFP、减少Aβ沉积、缓解炎性有关.

目的 探讨通脉活血汤通过影响大鼠低氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路对局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)的保护作用.方法 将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组〔HIF-1α抑制剂YC-1,2.5 mg/(kg·d)〕和通脉活血汤低、中、高剂量组〔20、40、80 mg/(kg·d)〕.线栓法构建大鼠脑中动脉阻塞(MACO)模型,模拟局灶性脑缺血再灌注.建模后假手术组和模型组腹膜注射2.5 ml/d 5％葡萄糖注射液,抑制剂组和通脉活血汤组分别注射对应剂量YC-1和通脉活血汤.对大鼠神经功能进行评分、检测大鼠脑脊液中VEGF水平、检测冰冻切片中胚胎干细胞关键蛋白(Sox2)和胶质酸性蛋白(GAFP)细胞数、RT-PCR检测HIF-1、VEGF、Notch1 mRNA水平、Western印迹检测HIF-1α、Notch1蛋白水平.结果 与假手术组相比,模型组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著降低(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA水平、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著升高(P<0.05).与模型组相比,抑制剂组和通脉活血汤低、中、高剂量组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著升高(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组升高水平呈剂量依赖性(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著降低(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组降低水平呈剂量依赖性(P<0.05).与抑制剂组相比,通脉活血汤高剂量组神经功能评分、Sox2、GFAP染色细胞数、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 在局灶性脑缺血模型大鼠的治疗过程中,通脉活血汤可能通过影响HIF-VEGF-Notch通路来促进神经干细胞增殖分化,从而起到神经保护的作用.

Phytophthora pathogens are a persistent threat to the world's commercially important agricultural crops,including potato and soybean.Current strategies aim at reducing crop losses rely mostly on disease-resis-tance breeding and chemical pesticides,which can be frequently overcome by the rapid adaptive evolution of pathogens.Transgenic crops with intrinsic disease resistance offer a promising alternative and continue to be developed.Here,we explored Phytophthora-derived PI3P(phosphatidylinositol 3-phosphate)as a novel control target,using proteins that bind this lipid to direct secreted anti-microbial peptides and pro-teins(AMPs)to the surface of Phytophthora pathogens.In transgenic Nicotiana benthamiana,soybean,and potato plants,significantly enhanced resistance to different pathogen isolates was achieved by expression of two AMPs(GAFP1 or GAFP3 from the Chinese medicinal herb Gastrodia elata)fused with a PI3P-specific binding domain(FYVE).Using the soybean pathogen P.sojae as an example,we demon-strated that the FYVE domain could boost the activities of GAFPs in multiple independent assays,including those performed in vitro,in vivo,and in planta.Mutational analysis of P.sojae PI3K1 and PI3K2 genes of this pathogen confirmed that the enhanced activities of the targeted GAFPs were correlated with PI3P levels in the pathogen.Collectively,our study provides a new strategy that could be used to confer resistance not only to Phytophthora pathogens in many plants but also potentially to many other kinds of plant pathogens with unique targets.