目的:筛选骨肉瘤相关的微小RNA(miRNA，miR)，研究其对骨肉瘤细胞的影响及其机制。方法:生物信息学筛选GSE39058中骨肉瘤相关miRNA的表达差异，确定miR-329为研究目标。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析miR-329对骨肉瘤143B细胞增殖能力的影响，Transwel比较miR-329对骨肉瘤143B细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验观察miR-329对G3BP1的调控作用。蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-329转染前后G3BP1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:获得差异miRNA 90个，其中miR-329功能富集程度较高。聚合酶链反应(PCR)结果表明miR-329在各骨肉瘤细胞中的表达低于成骨细胞hFOB1.19( P<0.05)。CCK-8结果显示miR-329模拟物组143B细胞增殖率较对照组NC低(0.571±0.019比0.975±0.022， P<0.05)，差异有统计学意义。Transwell分析发现转染miR-329模拟物组侵袭细胞数明显少于对照组[(28.83±4.55)个比(58.17±6.25)个， t＝6.220， P<0.05]，差异有统计学意义。双荧光素酶报告基因分析结果显示共转染G3BP1 mRNA3’端非编码区(3’UTR) wt和miR-329质粒的细胞荧光素酶相对活性较对照组显著降低(0.45±0.06比1.01±0.09， t＝1.250， P<0.05)，差异有统计学意义。Western blot结果表明转染miR-329 mimic后E-cadherin表达水平高于对照组(0.51±0.11比0.31±0.12， t＝2.903， P<0.05)，而Vimentin、N-cadherin表达量低于对照组(0.13±0.03比0.25±0.06， t＝2.859， P<0.05；0.28±0.11比0.45±0.12， t＝2.574， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:miR-329通过靶向抑制G3BP1表达，抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化，从而抑制骨肉瘤143B细胞的体外增殖和侵袭。

[目的]探讨GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中的表达及其与放疗疗效的关系.[方法]检测133例NSCLC患者组织中G3BP1蛋白表达水平,并分析其与NSCLC临床病理参数及放疗疗效的关系.[结果]NSCLC患者组织中G3BP1蛋白水平在不同肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移患者中比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).有效组NSCLC组织中G3BP1蛋白水平低于无效组,差异有统计学意义(P＜0.05).G3BP1评价疗效的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、最佳截断值、敏感度和特异度分别为0.802、2.33、86.54％和61.73％.Logistic多因素回归分析结果显示:肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、急性放射性肺炎及G3BP1水平是影响NSCLC放疗疗效的独立危险因素(P＜0.05).[结论]G3BP1与NSCLC肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移有关,其水平可为评价患者的放疗疗效提供参考.

目的:构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)的真核表达载体pEGFP-C3-G3BP1,并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位.方法:采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 cDNA全长序列,用限制性内切酶HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体,转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,经双酶切及测序鉴定;将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达,荧光显微镜观察G3BP1的定位.结果:目的基因G3BP1的序列完全正确,并在EC109细胞中获得表达,荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质.结论:构建了pEGFP-C3-G3BP1真核表达载体,并在EC109细胞中过表达,G3BP1蛋白定位于细胞质,形成应激颗粒(stress granules,SGs).为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础.