目的:探索骨形态发生拮抗蛋白1(Gremlin-1)在脂毒性介导的胰岛β细胞功能障碍中的作用和机制。方法:利用棕榈酸(palmitic acid, PA)处理小鼠胰岛β细胞(MIN6)作为脂毒性介导胰岛β细胞功能障碍模型，首先考察PA引起的脂质沉积及胰岛素分泌水平改变，明确脂毒性对胰岛β细胞的影响，进一步利用qPCR、Western blot等方法考察PA对Gremlin-1表达及其下游信号通路BMP4/Smads的影响。随后利用重组小鼠Gremlin-1和BMP信号通路抑制剂LDN193189干预细胞，并与对照组进行比较。结果:PA刺激能够降低胰岛β细胞活力及胰岛素分泌能力( P<0.05)。同时，PA能够抑制细胞Gremlin-1的表达和分泌，增加BMP-4及其下游Smad-1、Smad-5的表达( P<0.05)。利用重组小鼠Gremlin-1蛋白干预细胞可使细胞的胰岛素分泌显著升高，同时BMP4/Smads信号通路中的关键分子表达降低( P<0.05)。而抑制BMP4/Smads信号通路可改善PA导致的胰岛β细胞功能障碍。 结论:Gremlin-1参与调控脂毒性介导的胰岛β细胞功能障碍，该作用可能与BMP4/Smads信号通路激活有关。

目的:单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34 +细胞的类型与功能。 方法:该研究为实验研究。构建CD34 +细胞谱系追踪小鼠，实现CD34 +细胞在荧光条件下可视化。取6只7~8周龄雄性CD34 +细胞谱系追踪小鼠（设为糖尿病组），腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型，于小鼠13周龄时在其背部制备全层皮肤缺损创面；另取6只13周龄雄性CD34 +细胞谱系追踪小鼠（设为对照组），在其背部制备全层皮肤缺损创面。伤后4 d，分别收集对照组3只小鼠和糖尿病组2只小鼠创面组织，消化制备单细胞悬液，采用荧光活化细胞分选法筛选出CD34 +细胞后进行单细胞RNA测序，采用R语言的Seurat 4.0.2程序通过降维可视化和细胞聚类分析CD34 +细胞类型并筛选注释各CD34 +细胞亚群的标记基因，对2组小鼠创面组织间CD34 +成纤维细胞（Fb）、平滑肌细胞、角质形成细胞（KC）、类软骨细胞的差异表达基因（DEG）进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析，探索细胞功能。 结果:伤后4 d，2组小鼠创面组织中CD34 +细胞均包含7种细胞类型，具体为内皮细胞、Fb、KC、巨噬细胞、T细胞、平滑肌细胞和类软骨细胞，其中Fb细分为5个亚群。与对照组比较，糖尿病组小鼠创面组织中的CD34 +内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群4、KC、类软骨细胞占比升高，CD34 +Fb亚群2、Fb亚群3和平滑肌细胞占比下降。注释CD34 +类软骨细胞、内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群2、Fb亚群3、Fb亚群4、Fb亚群5、KC、巨噬细胞、平滑肌细胞、T细胞的标记基因分别为转移相关肺腺癌转录本1、脂肪酸结合蛋白4、Gremlin 1、补体成分4B、H19印记母源表达转录本、Dickkopf Wnt信号通路抑制剂2、纤维调节蛋白、角蛋白5、CD74分子、G蛋白信号调节蛋白5、可诱导T细胞共刺激分子。KEGG和GO富集分析显示，与对照组比较，糖尿病组小鼠伤后4 d创面组织中CD34 +Fb差异表达显著的DEG显著富集于炎症反应、细胞外基质（ECM）组装、细胞增殖调控、衰老相关条目（ P值均<0.05），CD34 +平滑肌细胞差异表达显著的DEG显著富集于细胞迁移、凋亡过程、转录的正调控、吞噬体等条目（ P值均<0.05），CD34 +KC差异表达显著的DEG显著富集于线粒体功能、转录、神经退行性疾病相关条目（ P值均<0.05），CD34 +类软骨细胞差异表达显著的DEG显著富集于节律调控、ECM、病毒感染等相关条目（ P值均<0.05）。 结论:CD34 +细胞在普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中均存在高异质性，2种小鼠创面间CD34 +细胞亚群差异表达显著的DEG显著富集的相关功能与创面愈合过程紧密相关。

目的 研究Gremlin-2基因rs4454537基因多态性及血清25-羟维生素D3[25(OH)D3]水平异常对绝经后妇女骨质疏松的影响.方法 选取邢台市人民医院2020年2月至2023年10月收治的绝经后骨质疏松患者160例为研究组,并选取同期健康体检的绝经女性160例为对照组,比较两组妇女骨密度及25(OH)D3水平,并分析两者相关性.采用TaqMan探针法检测患者血液中Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性,比较两组基因分布情况、不同基因型患者血清25(OH)D3水平以及骨密度差异,并分析绝经后妇女骨质疏松的影响因素.结果 研究组的25(OH)D3表达水平以及正位骨密度(BMD)、T值均低于对照组(P＜0.05).Pearson 法分析显示 25(OH)D3 表达水平与 BMD 呈正相关性(r=0.638,P＜0.05).Gremlin-2 基因 rs4454537位点存在3种基因型:TT、TC和CC,研究组的T等位基因、TT基因型频率低于对照组(x2=19.643,P＜0.001,x2=18.321,P＜0.001).不同基因型患者骨密度、25(OH)D3水平差异有统计学意义,其中TT型患者的骨密度、25(OH)D3水平明显高于TC、CC基因型患者(均P＜0.05).Logistic回归分析结果显示,Gremlin-2基因rs4454537位点基因型、25(OH)D3水平是绝经后骨质疏松的独立影响因素(P＜0.01).结论 Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性以及血清25(OH)D3水平与绝经后妇女骨质疏松密切相关,其中TT基因型患者血清25(OH)D3水平处于较高水平,可能降低骨质疏松发生风险.

目的:探讨Gremlin-1、血尿酸(SUA)及骨代谢指标表达水平与骨质疏松患者疾病严重程度的相关性及其联合诊断价值.方法:选取我院2019年1月到2020年12月收治的80例骨质疏松患者,对所有患者依照双X线吸收法诊断结果进行严重程度分组,将骨密度-2.5＜T＜-1患者分为骨量减少组(n=23),将骨密度T≤-2.5患者分为骨质疏松症组(n=37),将骨密度T≤-2.5,且发生过骨质疏松性骨折的患者分为严重骨质疏松症组(n=20).对比三组患者Gremlin-1、SUA表达水平与骨代谢指标表达水平,采用Spearman相关分析Gremlin-1、SUA及骨代谢指标表达水平与骨质疏松患者疾病严重程度的相关性.最后建立ROC曲线,Gremlin-1、SUA及骨代谢指标联合对骨质疏松症的诊断价值.结果:三组患者Gremlin-1、SUA水平对比差异显著,骨量减少组Gremlin-1高于骨质疏松症组和严重骨质疏松症组,SUA低于骨质疏松症组和严重骨质疏松症组(P＜0.05);三组患者维生素D3[25-(OD)-D3]、β-胶原特殊序列(β-CTX)、甲状旁腺激素(PTH)、Ⅰ型前胶原 N 端肽(N-terminal peptide of type Ⅰ procollagen,PINP)、骨钙素(OC)相关骨代谢指标水平对比差异显著,骨量减少组25-(OD)-D3、PINP、OC高于骨质疏松症组和严重骨质疏松症组,β-CTX、PTH低于骨质疏松症组和严重骨质疏松症组(P＜0.05);SUA(r=-0.636)、β-CTX(r=00.626)、PTH(r=0.625)的表达与骨质疏松患者疾病严重程度呈正相关,Gremlin-1(r=-0.452)、25-(OD)-D3(r=-0.462)、PINP(r=-0.622)、OC(r=-0.426)的表达与骨质疏松患者疾病严重程度呈负相关(P＜0.05);Gremlin-1、SUA及骨代谢指标联合对骨质疏松症诊断的曲线下面积为0.688,敏感度为92.53％、特异度为87.49％,显著高于单一指标诊断(P＜0.05).结论:Gremlin-1、SUA及骨代谢指标与骨质疏松病情严重程度具有密切关系,且联合诊断骨质疏松症敏感度及特异度较高.

目的 研究急性加重期特发性间质性肺炎(ⅡP)患者血清CD59、Gremlin-1水平及其与近期预后的相关性.方法 选取2020年3月—2022年2月湖南中医药大学第一附属医院呼吸内科诊治的急性加重期ⅡP患者90例为研究对象(急性加重期组),以同期诊治的稳定期ⅡP患者60例为稳定期组,以同期体检的健康者60例为健康对照组.根据急性加重期ⅡP患者随访3个月生存情况,分为生存亚组(n=59)和死亡亚组(n=31).酶联免疫吸附实验检测血清CD59、Gremlin-1水平.Pearson相关分析急性加重期ⅡP患者血清CD59、Gremlin-1与临床指标的相关性.多因素Logistic回归分析影响急性加重期ⅡP患者死亡预后的因素.受试者工作特征曲线分析血清CD59、Gremlin-1对急性加重期ⅡP患者死亡预后的预测价值.结果 急性加重期组血清CD59、Gremlin-1高于稳定期组和健康对照组(t=30.916、47.431,34.379、54.420,P 均＜0.001).死亡亚组患者 ESR、HRCT 评分,血清 CD59、Gremlin-1 明显高于生存亚组(t/P=2.580/0.012、4.546/＜0.001、26.388/＜0.001、20.842/＜0.001).急性加重期 ⅡP 患者血清 CD59、Gremlin-1 水平与 ESR、HRCT 评分呈正相关(r=0.621、0.736、0.705、0.689,P 均＜0.001).HRCT 评分、CD59、Grem-lin-1 是高影响急性加重期ⅡP患者死亡预后的危险因素[OR(95％CI)=1.589(1.258～2.006),1.593(1.252～2.028),1.733(1.249～2.404)].HRCT评分,血清CD59、Gremlin-1及联合检测评估急性加重期ⅡP患者预后的AUC分别为0.807、0.779、0.752、0.867,以联合检测的 AUC 最大(Z=5.183、4.349、5.127,P 均＜0.001).结论 急性加重期ⅡP患者血清CD59、Gremlin-1水平升高,是影响急性加重期ⅡP患者死亡预后的影响因素,HRCT评分、血清CD59、Gremlin-1联合检测对急性加重期ⅡP患者死亡预后具有较高的评估价值.

前列腺癌(prostaticcancer,PCa)是老年男性最常见的生殖系统恶性肿瘤之一.前列腺癌在2023年美国预计出现的癌症病人的罹患率中位列第一位,达到29％[1].PCa的死亡病例数在中国2020年男性癌症死亡病例中位列第七,达到5万人[2].在中国,PCa在整个社会的癌症负担中所占比例仍较低,但随着人口老龄化进展和早期诊疗技术发展,其所带来的社会医疗卫生负担将不容小觑.前列腺癌在中国有详细数据统计的28种癌症的DAILY发生率中的排名在逐年上升[3].

目的 研究四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋7(BMP-7)及Gremlin的表达,探讨其在肝纤维化发生机制中的作用.方法 雄性C57小鼠40只,分为实验组和对照组,每组20只.实验组给予腹腔注射40％ CCl4橄榄油溶液,10 ml/kg;对照组腹腔注射橄榄油溶液,10ml/kg,2次/周,持续8周.苏木精-伊红染色后观察肝纤维化程度,免疫组织化学法染色后分析TGF-β1、BMP-7及Gremlin在肝纤维中组织中的表达和分布,实时荧光定量聚合酶链反应和Westem blot检测TGF-β1、BMP-7及Gremlin在正常和纤维化肝组织中mRNA和蛋白的表达.结果 TGF-β1和Gremlin在肝纤维化组织中mRNA和蛋白表达增强(P＜0.05),而BMP-7在肝纤维化组织中表达降低(P＜0.05).结论 TGF-β1、Gremlin的表达与肝纤维化呈正相关,BMP-7与肝纤维呈负相关(P＜0.05).Gremlin可能通过下调BMP-7的表达,诱导肝纤维化的发生.

目的 探讨Gremlin对小鼠原代肝星状细胞增殖和凋亡及细胞外基质分泌的影响.方法 采用经典肝脏二步酶灌注法分离小鼠原代肝星状细胞并培养.随机将肝星状细胞分为对照组、DMSO组及Gremlin低、高剂量组.对照组与DMSO组分别加入DMEM完全培养基、含0.05％DMSO的DMEM培养基培养,Gremlin低、高剂量组分别加入含100、200μg/L Gremlin的DMEM培养基培养.培养24 h,采用CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖率、细胞凋亡率,采用RT-qPCR法、Western blotting法检测各组CollagenⅠ、CollagenⅢ、a-SMA mRNA和蛋白表达.结果 Gremlin低、高剂量组细胞增殖率均高于对照组和DMSO组,细胞凋亡率均低于对照组和DMSO组(P均<0.05);Gremlin低剂量组与Gremlin高剂量组、对照组与DMSO组细胞增殖率、细胞凋亡率比较P均>0.05.Gremlin低、高剂量组CollagenⅠ、CollagenⅢ、a-SMA mRNA相对表达量均高于对照组、DMSO组(P均<0.05),且Gremlin高剂量组高于Gremlin低剂量组(P均<0.05),而对照组与DMSO组比较P均>0.05.Gremlin高剂量组CollagenⅠ、CollagenⅢ、a-SMA蛋白相对表达量均高于Gremlin低剂量组、对照组、DMSO组(P均<0.05),Gremlin低剂量组、对照组、DMSO组组间两两比较P均>0.05.结论 Gremlin能诱导小鼠原代肝星状细胞活化,使其分泌细胞外基质增加,从而参与肝纤维化的发生、发展.

Gremlin基因属于转化生长因子β(TGF-β)超家族,其编码的蛋白质具有高度保守性,是骨形态形成蛋白(BMP)拮抗剂家族成员.Gremlin基因最早从蟾蜍中枢神经脊中克隆出来,其编码的蛋白有三种,分别命名为Gremlin-1、Gremlin-2和Gremlin-3.Gremlin基因在肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化、心纤维化、胰腺纤维化、晶状体及视网膜纤维化等疾病的发生、发展中均起重要作用,其机制多与BMP/Smads信号传导通路、TGF-β/Smads信号传导通路有关,主要通过影响Smads蛋白胞内信号通道影响纤维化的发生,与Gremlin-VEGFR2轴、NF-κB信号通路等关系密切.在促纤维化发生过程中,Gremlin可能依赖于应激活化蛋白激酶途径的激活,受miR-27b/30-UTR的正向调节、抗纤维化趋化因子10的负向调节、多糖硫酸乙酰肝素的适当调节;在眼视网膜病变的发生过程中,Gremlin可能受甲状旁腺激素相关蛋白水平的正向调节.

目的 探讨增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者玻璃体中gremlin的水平与PDR的关系.方法 收集26例PDR患者的玻璃体为试验组,同时收集20例特发性黄斑前膜患者的玻璃体为对照组,采用ELISA方法测定玻璃体中gremlin的水平.结果 试验组患者玻璃体中gremlin水平为[(67.786±33.963) ng/ml)],明显高于对照组[(42.265 ±7.626) ng/ml)],对比差异有统计学意义(P＜0.001).结论 Grem-lin在PDR患者玻璃体中的高表达可能对PDR的发生发展起着重要的作用.