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HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖离体神经元的强化效应
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖(oxygen-glucose deprivation and restoration,OGD/R)离体神经元的强化效应.方法 新生24~48 h的SD大鼠12只,随机分为对照组、氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组、OGD/R-亚低温(OGD/R-mild hypothermia, OGD/R-HM)组、OGD/R-HM-HET0016(OGD/R-HM-HET)组各3只,均分离海马神经元细胞培养7d,制备海马神经元OGD/R模型.对照组应用3 mL含葡萄糖earle's平衡盐溶液正常条件下培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD组应用3 mL无葡萄糖平衡盐,37℃、体积分数1%氧气培养箱中培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD/R-HM组应用3 mL无葡萄糖培养液、体积分数1%氧气培养箱培养2h后更换正常培养液,37℃、体积分数5%CO2培养箱中复氧4h后亚低温处理24 h;OGD/R-HM-HET组于复氧前加入HET0016,调整终浓度1μmol/L,余处理同OGD/R-HM组.应用流式细胞仪检测4组细胞凋亡率.结果 流式细胞仪检测结果显示,神经元细胞凋亡率在OGD组[(29.59±0.60)%]、OGD/R-HM组[(19.89±0.39)%]、OGD/R-HM-HET组[(14.17±o.25)%]均高于对照组[(1.63±o.42)%](P<0.05),且OGD组高于OGD/R-HM组和OGD/R-HM-HET组(P<0.05),OGD/R-HM组高于OGD/R-HM-HET组(P<0.05).结论 HET0016对缺血缺氧4h后实施的亚低温保护离体OGD/R神经元具有一定的强化效应.
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编辑人员丨2023/8/6
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20-羟二十烷四烯酸对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响.方法 体外培养人胎盘绒毛膜滋养细胞,分成正常对照组、药物介质组、20-HETE组、HET0016组,分别加入细胞培养基、二甲基亚砜、20-HETE及20-HETE抑制剂HET0016作用48h;采用ELISA法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)浓度,RT-PCR法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL mRNA表达.结果 与正常对照组比较,药物介质组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),20-HETE组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显降低(均P<O.05),HET0016组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显升高(均P<0.05). 结论 20-HETE可抑制人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA表达,而其抑制剂HET0016起促进作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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20-羟二十烷四烯酸合成酶抑制剂HET0016与AngⅡ诱导心肌肥大的关系
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的影响及机制.方法 结晶紫染色检测细胞表面积;qRT-PCR检测心钠肽(ANP)和脑钠肽(BNP)表达;DHE和MitoSOX法检测超氧化物(ROS)生成;细胞色素C还原法检测NADPH氧化酶活性;JC-1探针检测线粒体膜电位;Western blot和ELISA法检测CYP4A表达及20-HETE生成.结果 AngⅡ显著增加H9c2心肌细胞表面积,上调ANP和BNP的mRNA表达.AngⅡ诱导NADPH氧化酶活性增高及ROS生成,导致线粒体膜电位下降,HET0016可阻断AngⅡ如上作用.AngⅡ可促进CYP4A表达以及20-HETE生成.结论 20-HETE激活NADPH氧化酶引起ROS生成,诱导心肌线粒体功能紊乱,参与AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.
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编辑人员丨2023/8/6
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20-HETE对小鼠葡萄糖刺激胰岛素分泌反应的影响
编辑人员丨2023/8/5
为了考察20-羟基二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acids,20-HETE)对葡萄糖刺激胰岛素分泌反应的影响,本研究选择CYP4F2转基因小鼠和小鼠胰岛素瘤INS-1E细胞作为研究材料,通过LC-MS/MS检测WT和TG小鼠的胰腺20-HETE水平.通过IPGTT测定小鼠葡萄糖耐量,通过ELISA测定小鼠血浆C肽水平来检测胰岛素分泌.通过Western blotting、 Real time PCR、免疫组化和免疫荧光来检测小鼠胰腺或INS-1E细胞中Glut2、GSK-3β (Ser9点)和AKT (Ser473点)的磷酸化水平.TG小鼠的20-HETE水平((7.26±2.03) ng/mg蛋白)显著高于WT小鼠((2.14±0.76) ng/mg蛋白).在用20-HETE合成的选择性抑制剂HET0016处理后,TG小鼠((0.33±0.07) ng/mg蛋白)和WT小鼠((0.27±0.06) ng/mg蛋白)胰腺组织中的20-HETE水平均急剧降低.给予葡萄糖处理30 min后,TG小鼠的血糖水平均显著高于WT小鼠,而血浆C肽水平显著低于WT小鼠(p<0.05).与WT小鼠相比,TG小鼠的胰腺组织中Glut2 mRNA和蛋白水平显著降低.与WT小鼠相比,CYP4F2转基因小鼠的GSK-3β和AKT磷酸化均显著降低.20-HETE处理可导致INS-1E细胞中AKT/GSK-3β磷酸化水平和Glut2表达水平显著降低(p<0.05).此外,用17 mmol/L葡萄糖处理INS-1E细胞1h,20-HETE处理组的胰岛素分泌显著降低.应用GSK-3β选择性抑制剂TWS119预处理INS-1E细胞3h后,TWS119(一种GSK-3β选择性抑制剂)预处理显著逆转了Glut2表达水平的降低以及胰岛素分泌的减少.20-HETE主要通过AKT/GSK-3β信号通路来下调Glut2的表达,进而减弱胰岛素分泌,导致胰岛素分泌功能障碍.
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编辑人员丨2023/8/5
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HET0016对LPS诱导大鼠小胶质细胞增殖和迁移的抑制作用研究
编辑人员丨2023/8/5
目的:研究HET0016对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞增殖和迁移的作用.方法:取出生24 h内SD大鼠,分离、纯化小胶质细胞,进行原代培养;CCK-8法检测HET0016对LPS刺激后小胶质细胞活力的影响;ELISA法检测小胶质细胞培养上清液中20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量;流式细胞术检测S期细胞比例;Transwell实验和划痕实验检测小胶质细胞的迁移能力;Western blot检测NF-κB p50和p65蛋白的表达水平.结果:LPS可以促进小胶质细胞增殖和迁移,同时刺激炎症因子释放(P<0.05).与LPS组相比,HET0016对LPS诱导的小胶质细胞增殖和迁移有显著抑制作用(P<0.05),同时使小胶质细胞TNF-α和IL-1β的释放显著降低(P<0.05),并下调NF-κB p50和p65蛋白的表达水平(P<0.05).结论:HET0016对LPS刺激的小胶质细胞增殖和迁移有抑制作用,并减少炎症因子的释放,其机制可能与NF-κB信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/5
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20-HETE对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨20-HETE对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,初步探讨其分子机制.方法 利用特异性20-HETE合成抑制剂HET0016处理A549细胞,CCK-8细胞增殖检测试剂盒和平板克隆实验分析20-HETE对A549细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测20-HETE对A549细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测20-HETE对A549细胞迁移能力的影响;Western blot和葡萄糖检测试剂盒分析20-HETE对A549细胞葡萄糖代谢的影响.结果 经HET0016处理后,A549细胞增殖、克隆形成和迁移能力显著下降,凋亡率明显上升,GLUT1蛋白表达下调,葡萄糖消耗下降.结论 20-HETE促进A549细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡,与调控A549细胞葡萄糖代谢相关.
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编辑人员丨2023/8/5
