目的:探讨G蛋白偶联受体75(GPR75)受体介导20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养PC-3雄激素非依赖性前列腺癌细胞系，未经干预为对照组，细胞转染敲减GPR75受体为shGPR75组，20-HETE干预为20-HETE组，细胞转染敲减GPR75联合20-HETE干预为shGPR75+20-HETE组。采用Western blot检测各组GPR75表达情况，采用四唑盐比色法(MTT)观察PC-3细胞增殖情况，采用Transwell检测PC-3细胞侵袭能力，采用划痕实验检测PC-3细胞迁移能力。结果:对照组GPR75蛋白表达量为(1.04±0.13)，shGPR75组为(0.42±0.03)，20-HETE组为(1.27±1.20)，shGPR75+20-HETE组为(0.68±0.07)，四组GPR75蛋白表达水平整体比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组细胞存活率为(76.30±10.30)%，shGPR75组为(40.33±4.60)%，20-HETE组为(88.50±12.61)%，shGPR75+20-HETE组为(54.38±6.70)%，四组PC-3细胞存活率整体比较，差异具有统计学意义( F＝30.269， P<0.05)。Transwell法结果显示，对照组侵袭能力为(107.30±15.39)个，shGPR75组为(62.30±7.20)个，20-HETE组为(123.57±18.90)个，shGPR75+20-HETE组为(80.11±10.61)个，四组侵袭能力整体比较，差异有统计学意义( P<0.05)。划痕实验显示，对照组迁移能力为(142.50±20.33)个，shGPR75组为(86.24±10.60)个，20-HETE组为(170.93±24.78)个，shGPR75+20-HETE组为(113.65±16.01)个，四组差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:20-HETE可促进雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移，通过抑制GPR75受体可降低20-HETE的促癌作用。

目的:探讨超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱（ultra-high performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometer，UHPLC/Q-TOF-MS）技术在新生儿败血症早期诊断中的应用。方法:前瞻性选择2019年1月至2020年1月在湖南省人民医院新生儿科住院的新生儿败血症患儿为败血症组，选择同期门诊体检的健康新生儿为对照组，取患儿入院第1天/体检当天的静脉血标本，采用UHPLC/Q-TOF-MS技术进行代谢组学分析，探讨败血症患儿代谢产物特点。结果:共纳入败血症组20例，对照组10例。败血症组患儿血苯丙氨酸、法尼基焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、乳糖、4-羟基甲苯丁酰胺、伊洛前列素、顺式8，11，14，17-二十碳四烯酸、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、苯乙酰胺、血氧烷B2、二氯二甲基二乙胺共12种代谢产物高于对照组（ P<0.05），采用受试者工作特征曲线对这些代谢物进行可信度分析，得到7种可信度较高的代谢物，分别为4-羟基甲苯丁酰胺、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、法尼焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、苯乙酰胺、苯丙氨酸。 结论:新生儿败血症患儿代谢产物明显异常，4-羟基甲苯丁酰胺、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、法尼基焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、苯乙酰胺、苯丙氨酸7种代谢物水平明显升高。

目的:探讨过敏原皮下特异性免疫治疗（subcutaneous immunotherapy，SCIT）在治疗早期对患者免疫指标和代谢水平的影响，深入了解SCIT治疗在调节免疫反应和代谢水平方面的作用，为进一步发现潜在生物标志物提供参考数据。方法:采用纵向研究方法，纳入2017年11月至2022年2月期间于广州医科大学附属第一医院儿科接受尘螨过敏原SCIT的受试者40例，其中单螨制剂治疗（single mite subcutaneous immunotherapy，SM-SCIT）和双螨制剂（double mite subcutaneous immunotherapy，DM-SCIT）治疗受试者各20例。本研究检测了受试者治疗前和治疗12个月后的尘螨过敏原特异性抗体和多元不饱和脂肪酸代谢水平，同时进行了肺功能检查，并通过症状视觉模拟量表（visual analogue scale，VAS）、哮喘控制测试问卷（asthma control test，ACT）和用药总评分（total medication scores，TMS）对患者的疗效进行随访，采用 t检验、Mann-Whitney U检验等方法进行结果统计分析。 结果:经SCIT治疗12个月后，两组的VAS总分（SM-SCIT： Z=-2.298， P<0.05；DM-SCIT： Z=-3.411， P<0.001）显著下降；ACT总分（SM-SCIT： Z=-2.054， P<0.05；DM-SCIT： Z=-2.014， P<0.05）和总用药评分（SM-SCIT： Z=-3.799， P<0.000 1；DM-SCIT： Z=-3.474， P<0.001）显著升高，此外，双螨治疗组MMEF75/25值显著升高（ t=-2.253， P<0.05）。单螨治疗组的sIgE无明显变化（ P>0.05），Der p、Der f、p 1、p 2、f 2和p 21组分sIgG 4水平均显著升高（ Z分别为-2.651、-3.771、-2.949、-2.912、-2.725、-2.128、-3.285， P均<0.05）；双螨治疗组的 Der p 2、f 2、p 7和p 23 组分sIgE（ Z分别为-1.965、-2.028、-2.406、-2.134， P均<0.05）和Der p、Der f、p 1、p 2、f 1、f 2、p 10、p 21和p 23组分sIgG 4水平均显著升高（ Z分别为-3.808、-3.845、-3.061、-2.688、-2.464、-3.211、-2.371、-2.091、-2.427， P均<0.05）。代谢组学分析显示，在治疗初期，SM-SCIT治疗后花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、5，9，12-十八碳三烯酸、5（S）-羟化二十烷四烯酸、二高-γ-亚麻酸显著升高（ Z分别为-2.191、-2.497、-1.988、-2.090、-2.19、-2.803、-2.073， P均<0.05）；DM-SCIT组治疗后5（S）-羟化二十烷四烯酸显示升高，α-亚麻酸、二十碳二烯酸、二十碳一烯酸显著下降（ Z分别-1.988、-2.090、-2.497、-1.988， P均<0.05）。相关性分析表明，花生四烯酸与尘螨特异性IgG 4的变化呈显著负相关（ r=-0.499， P<0.05），α-亚麻酸、5，9，12-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸与尘螨der p 2的ΔsIgG 4（ r分别为0.451、0.420、0.474， P均<0.05）呈正相关。 结论:SCIT期间过敏原特异性抗体水平和多不饱和脂肪酸代谢水平发生显著变化，并且两者之间可能相互影响、相互作用。

目的 研究20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)对培养乳鼠心肌细胞凋亡的作用,并探究其中的机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,TUNEL法检测凋亡;Fluo-3/AM荧光探针检测心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).应用Western Blot检测RyR2、SERCA2a、CaMKII及其磷酸化蛋白表达.结果 20-HETE可明显降低心肌细胞活性、诱导细胞凋亡,而加入CaMKII抑制剂KN-93可阻断20-HETE的作用;20-HETE可显著增加心肌细胞内[Ca2+]i,上调RyR2蛋白表达,并下调SERCA2a蛋白表达,这些作用可被KN-93所阻断;20-HETE促进了心肌细胞CaMKII蛋白以及磷酸化CaMKII表达,具有激活CaMKII信号通路作用.结论 20-HETE通过激活CaMKII信号通路引起肌浆网Ca2+转运蛋白RyR2和SERCA2a功能改变,导致细胞钙超载,诱导心肌细胞凋亡.

目的:通过对不同年龄段体外受精(IVF)患者的卵泡液进行代谢组学研究,鉴定出代谢差异物,探究其与卵母细胞的关系,从卵泡液代谢组层面阐述年龄影响生殖功能的机制.方法:对191例IVF患者卵泡液进行代谢组学分析,21～27岁47例,28～34岁74例,35～41岁41例,42～48岁29例.采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术将卵泡液样品分别在正离子、负离子模式下进行采集,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到四组间差异性物质质荷比.根据得到的质量数、同位素丰度比得到与其相匹配的分子式,鉴定出差异物,把这些差异物通过KEGG聚类分析,指向差异通路,鉴定这些差异物质涉及的代谢通路和所指向的化合物.结果:随着年龄增加,卵母细胞质量及数量呈下降趋势,期间伴随卵泡液代谢物变化,差异物主要涉及氨基酸、脂质、激素、维生素等.下调物15种:6-氧代己酸酯,L-苯丙氨酸,脯氨酸,十六烷酸/棕榈酸,亚油酸,花生四烯酸,油酸,硫酸脱氢表雄酮,溶血性磷脂酰胆碱(16:1),溶血性磷脂酰胆碱(20:4),溶血性磷脂酰胆碱(20:3),25-二羟维生素D3,5-去氢表甾醇,27-羟基胆固醇,5-胆甾烷-3α,7α,12α,23,25-戊醇;上调物3种:溶血性磷脂酰胆碱(18:3),溶血性磷脂酰胆碱(18:1),13,14-二氢视黄醇.结论:女性生殖能力随着年龄增加而减退,期间伴随卵泡液代谢物变化,从卵泡液代谢组学层面揭示了年龄影响生殖功能的机制.

目的 20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)是由细胞色素P450(CYP)催化花生四烯酸(AA)生成的代谢产物,在心血管系统中发挥多种重要的生物学功能.在不同类型高血压动物模型中发现,催化AA生成20-HETE的CYP增多,而抑制20-HETE生成则可降低血压.目前认为,20-HETE参与高血压发生、发展的机制包括:增加细胞内Ca2+浓度,促进血管平滑肌收缩;降低血管内皮细胞中NO生物利用率、抑制内皮型一氧化氮合酶活性、促进活性氧簇生成,诱导血管内皮细胞功能紊乱;促进血管平滑肌细胞增殖与迁移,诱发血管重塑;促进血管紧张素转换酶、AngⅡ及血管紧张素1型受体等活性.20-HETE有可能成为防治高血压的药物作用靶点.

目的 探讨20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响.方法 体外培养人胎盘绒毛膜滋养细胞,分成正常对照组、药物介质组、20-HETE组、HET0016组,分别加入细胞培养基、二甲基亚砜、20-HETE及20-HETE抑制剂HET0016作用48h;采用ELISA法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)浓度,RT-PCR法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL mRNA表达.结果 与正常对照组比较,药物介质组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均P＞0.05),20-HETE组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显降低(均P＜O.05),HET0016组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显升高(均P＜0.05). 结论 20-HETE可抑制人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA表达,而其抑制剂HET0016起促进作用.

目的 探究20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的影响及机制.方法 结晶紫染色检测细胞表面积;qRT-PCR检测心钠肽(ANP)和脑钠肽(BNP)表达;DHE和MitoSOX法检测超氧化物(ROS)生成;细胞色素C还原法检测NADPH氧化酶活性;JC-1探针检测线粒体膜电位;Western blot和ELISA法检测CYP4A表达及20-HETE生成.结果 AngⅡ显著增加H9c2心肌细胞表面积,上调ANP和BNP的mRNA表达.AngⅡ诱导NADPH氧化酶活性增高及ROS生成,导致线粒体膜电位下降,HET0016可阻断AngⅡ如上作用.AngⅡ可促进CYP4A表达以及20-HETE生成.结论 20-HETE激活NADPH氧化酶引起ROS生成,诱导心肌线粒体功能紊乱,参与AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.

目的 通过卵泡液代谢组学探寻与卵巢低反应相关的生物标志物.方法 采用超高液相色谱-高分辨质谱联用仪对行体外受精-胚胎移植/单精子卵泡浆内显微注射-胚胎移植(IVF-ET/ICSI-ET)的卵巢低反应组30例,以及同时仅因男方因素行IVF-ET/ICSI-ET的对照组49例进行卵泡液代谢组学分析.对比两组的差异代谢物.结果 与卵巢低反应相关的潜在生物标志物有30种,其上调的代谢物有9种,包括L-苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、1-羟基-2-氧代丙基四氢蝶呤、水杨酸镁、尿苷二磷酸、LysoPC(18:1)、LysoPC(18:2)及LysoPC(18:3);下调的代谢物有21种,包括6-氧代己酸酯、亚油酸酯、油酸、十六烷、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、13,14-二氢视黄醇、石胆酸、7-脱氢甾醇、硬脂酰肉碱、25-羟基维生素D3、27-羟基胆固醇、3α,7α,12α-三羟基-5β-胆甾烷、13-羟基-α-生育酚、强啡肽A、LysoPC(16:1)、LysoPC(16:0)、LysoPC(18:0)、LysoPC(20:5)、LysoPC(20:4)、LysoPC(20:3).结论 卵巢低反应患者在卵巢储备、卵巢反应、卵子数目、质量方面比正常女性低;卵巢低反应患者卵泡液代谢物与正常女性比较,差异有统计学意义(P<0.05).这些差异代谢物可以作为卵巢低反应的生物标志物.

目的 探讨细胞色素P4504A (CYP4A)在非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的调节作用,并检测其在脂肪肝中的变化.方法 高脂乳剂灌胃C57BL/6小鼠方法建立NAFLD动物模型,分对照组和高脂乳剂灌胃组,高脂乳剂灌胃组又分别设4、6、8、10周组.肝组织切片进行HE染色.生化试剂盒检测小鼠血清TG、ALT、AST、MDA、SOD的含量变化;Western blot法检测肝组织CYP4A的变化;液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)检测花生四烯酸经CYP4A羟基化产物20-羟基二十烷四烯酸(20-HETE)的含量;冰冻切片免疫荧光法检测肝组织活性氧的荧光强度.结果 肝组织HE染色显示脂肪空泡于第10周出现.高脂乳剂灌胃C57BL/6小鼠后血清TG、ALT、AST和MDA的含量随高脂乳剂灌胃时间的延长而逐渐升高,而SOD水平显示下降的趋势.肝组织中CYP4A和20-HETE的表达量随着肝脏脂质堆积而增多.肝组织活性氧的荧光强度表现为第10周最强.结论 CYP4A参与NAFLD时的脂质代谢使花生四烯酸代谢产物20-HETE合成增多,同时诱导活性氧的产生导致氧化应激从而促进脂质过氧化.