人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染是常见的生殖系统病毒感染，持续性HPV感染可以导致宫颈癌、外阴癌、肛门癌、阴茎癌及生殖器疣等疾病。目前已上市的预防性HPV疫苗包括葛兰素史克(GlaxoSmithKline)公司的2价疫苗、默沙东(Merck & Co., Inc)公司的4价和9价疫苗万泰沧海生物技术有限公司的2价疫苗，由不同类型的HPV衣壳蛋白L1组装而成，诱发机体产生特异性抗体及活化T细胞，从而减少HPV的感染率。近年来，HPV疫苗的安全性与有效性得到了广泛的关注，尤其是在发展中国家。本综述对HPV疫苗在免疫原性、安全性、有效性，以及疫苗免疫接种概念和策略方面的最新进展进行了总结。本文可以为中国HPV疫苗的推广接种提供参考依据。

目的:明确对不同类型人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白(HPV L1)具有交叉反应性的HPV L1 C-末端保守序列抗体是否具有降解HPV6感染能力的作用.方法:收集尖锐湿疣标本,从收集的标本中找出HPV6型感染病例,并提取病毒.将多肽抗血清按不同比例稀释,与得到的病毒共同培养并中和,接触单层培养的人永生化角质形成细胞,PCR检验经HPV6病毒接触后人永生化角质形成细胞中HPV6 DNA含量,ELISA检验此细胞中HPV6 L1蛋白存在与否.结果:经不同稀释浓度抗血清中和的HPV6病毒感染的人永生化角质形成细胞,其DNA提取物的PCR产物经电泳,在凝胶280 bp处,HPV6特异性区间呈现不同强度的阳性条带,阳性条带的强度随抗血清浓度的升高逐渐降低.ELISA对经抗血清中和病毒接触的人永生化角质形成细胞提取蛋白进行测试,HPV L1蛋白表达量显示出与上述PCR检测结果同样的梯度变化趋势,变化差异具有统计学意义.结论:初步证明,HPV6 L1保守序列多肽抗血清可部分降解该病毒的感染,该抗血清具有针对更多型HPV进行中和研究的价值.

目的 探讨HPV-L1壳蛋白、Ki67联合检测在预测宫颈上皮内瘤变(CIN)进展中的价值.方法 选取2014年7月-2016年7月在重庆市第五人民医院病理科检测出的高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性、细胞学诊断为不能明确意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)和低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者共134例,其宫颈细胞学标本及相应的组织学标本进行HPV-L1壳蛋白联合Ki67的免疫细胞及组织化学检测,并对检测结果进行分析,以宫颈活检的组织学诊断为确诊标准.结果 77例ASCUS患者中组织活检结果≥CINⅡ的23例(29.87％),57例LSIL患者中组织活检结果≥CINⅡ的21例(36.84％).ASCUS及LSIL患者中HPV-L1阳性率为32.47％(25/77)、26.32％(15/57),Ki67阳性率为68.83％(53/77)、66.67％(38/57).HPV-L1壳蛋白、Ki67联合检测在HR-HPV阳性的ASCUS及LSIL中预测高级别病变的特异度、阳性预测值均显著高于2项免疫标记物单独检测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HPV-L1壳蛋白和Ki67的联合检测是预测CIN进展的有效、可靠方法.

病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)作为一种形态结构与真病毒高度相似的空心颗粒,具有真病毒类似特性,在机体内能刺激免疫系统产生高滴度的中和抗体,又因为其缺乏核酸无法复制,近年来一直被作为理想的候选疫苗蛋白.目前上市的三种人类乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)疫苗都是属于基因工程VLP疫苗.对于HPV VLP组装的研究能够更好的为疫苗研发方面提供更多的优化手段.该文旨在总结这十几年人乳头瘤病毒VLP组装的研究进展,为HPV以及其它病毒的基因工程疫苗研发提供更多有价值的信息,为人类健康作出贡献.

人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与宫颈癌的发生有着密切关系,HPV L1壳蛋白是宫颈病变发展进程和预后判断的重要生物学标志[1].宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial lesion,CIL)是宫颈癌的癌前病变,早期发现CIL并及时阻断其发展对宫颈癌的防治具有重要意义.我们对HPV感染后CIL组织中HPV L1壳蛋白、Ki-67和S-100蛋白阳性Langerhans细胞进行检测,分析其表达情况及相关性.

目的 构建人乳头瘤病毒58型L1/E7“假病毒”疫苗,并研究其免疫学特性.方法 采用sf9昆虫-杆状病毒表达系统表达HPV58 L1蛋白,体外解离重组病毒颗粒,向已经解离的衣壳中加入mE7-pcDNA3.1+质粒,CaCl2室温透析促使病毒样颗粒(VLP)重新聚合,用“假病毒”颗粒滴鼻免疫小鼠,检测小鼠血清IgG,IgA中和抗体以及脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.结果 SDS-PAGE,Western blot和红细胞凝集实验证实sf9昆虫-杆状病毒表达系统有效表达有功能活性的HPV58 L1蛋白,HPV58 L1蛋白能够有效的折叠、解聚以及再折叠为VLP.小鼠免疫保护实验发现,用包含有mE7-pcDNA3.1+质粒的HPV58 L1“假病毒”免疫小鼠,抗HPV58L1特异性IgG,IgA明显升高(P＜0.001),“假病毒”免疫组产生的IFN-γ明显高于VLP免疫组(P＜o.001);“假病毒”免疫过的小鼠脾淋巴细胞可以特异性杀伤Tc-1细胞,引起CTL反应.结论 成功制备了人乳头瘤病毒58型L1/E7“假病毒”疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生.

目的 在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异.方法 将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体pPink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株pPink strain 1.重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性.经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况.通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列.结果 两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确.两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而MI6呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力.Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、△424S、D441 A、K452Q).结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得.提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造.

宫颈癌 (Cervical cancer, CC) 是妇科最常见的恶性肿瘤之一, 而高危型人乳头瘤病毒 (Human papillomavirus, HPV) 的持续感染是诱导宫颈癌发生的重要危险因素.目前全球抗HPV药物极为匮乏, 寻找新的高效、低毒、价廉的广谱抗病毒药物对HPV感染的防治至关重要.本文研究发现, 咖啡酸 (Caffeic acid, CA) 能有效抑制三株不同亚型的HPV感染 (HPV-6、HPV-16及HPV-18), 其半数抑制浓度在12.116.5μg/mL之间.Time-of-addition结果证实, 咖啡酸对病毒进入靶细胞的早期阶段具有一定抑制作用.Temperature shift实验发现, 咖啡酸能一定程度抑制HPV病毒颗粒黏附于靶细胞表面.表面等离子共振分析表明, 咖啡酸与HPV-16型病毒的主要衣壳蛋白L1具有极强的结合力.综上, 咖啡酸具有较高的抗HPV活性, 其作用机制可能是与病毒衣壳蛋白L1结合, 从而阻止病毒黏附并进入靶细胞.咖啡酸具有安全、价廉、易得等优势, 有望被开发成新型的抗HPV病毒感染的抑制剂, 因其尚能同时抵抗多种性传播性病毒的感染, 对HPV并发的多种性传播性疾病具有较好的预防作用, 应用前景广泛.

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加.HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别.本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16～37多肽(与HPV52L2aa.16～～37序列相同)插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A(Alum-MPL)免疫小鼠.活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度最高(滴度,76 800),与HPV16L1VLP对照组的相当(P＞0.05);重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103(分别为4 050和1 725);另外,还可中等滴度中和HPV45(550),HPV18(506),HPV33 (500),HPV39 (463),HPV68(431),HPV6(300),HPV57(150),HPV11 (125)及较低滴度的中和HPV2/HPV27(40),HPV35 (38),HPV5(25),HPV31 (13),但对HPV59没有中和活性.因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景.

世界范围内,宫颈癌是妇女第二位高发肿瘤.高危型人乳头瘤病毒(human papilloma-virus,HPV)持续感染是引发宫颈癌的主要原因,在所有高危型HPV中,HPV16流行最广泛.HPV主要衣壳蛋白(major capsid protein,L1)可以自组装成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),其形态及抗原性与天然病毒类似,可以刺激机体产生高效价保护性中和抗体.中和表位是HPV VLPs疫苗的结构基础,疫苗的效力主要取决于中和表位的完整性.目前基于中和单抗的HPV16表位研究取得了极大进展.随着免疫压力的增加,HPV16的型内变异株越来越多.1204条HPV16 L1氨基酸序列构建的进化树可以分为4个进化分支.同时,将其与114K参考序列相比,共挑选出8个"高频突变位点",6个"特有突变位点"和20个"表位相关位点".HPV诱导的中和抗体绝大多数都是型特异性的,但同一型别内的HPV所诱导的中和抗体对型别内的所有L1变异株是否都能保护尚无定论.剖析HPV16型的抗原表位及型内变异情况对设计高效价、高覆盖率的预防性疫苗至关重要.