目的:探讨卵巢癌细胞分泌的外泌体对卵巢间质正常成纤维细胞(NFs)分化和迁移能力的影响。方法:NFs来自2019年5—12月于青岛大学附属医院行子宫肌瘤切除的患者。使用超高速离心方法从卵巢癌SKOV3细胞培养上清中提取外泌体，将条件培养基(CM)、SKOV3-exo、磷酸盐缓冲液分别与NFs细胞共培养，分别记为CM组、SKOV3-exo组和空白组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测NFs中成纤维细胞活化蛋白(FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平，采用Transwell实验检测NFs细胞的迁移能力。结果:透射电镜下可观察到SKOV3的培养上清液中所提取到的细胞外囊泡为长径为30~100 nm，呈杯托样双层膜结构。外泌体中TSG101和HSP27蛋白表达水平分别为1.00±0.05和1.12±0.13，均高于卵巢癌SKOV3细胞(分别为0.22±0.21和0.36±0.14，均 P<0.05)。PKH67荧光标记的外泌体可被NFs摄取。CM组细胞中α-SMA、FAP mRNA表达水平分别为2.91±0.15和3.21±0.33，SKOV3-exo组分别为3.50±0.21和4.63±0.24，均高于空白组(分别为1.00±0.06和1.00±0.13，均 P<0.05)。CM组和SKOV3-exo组细胞中α-SMA(分别为0.89±0.11和1.25±0.09)、FAP蛋白表达水平(分别为0.81±0.09和1.20±0.12)均高于空白组(分别为0.12±0.31和0.11±0.19，均 P<0.05)。CM组和SKOV3-exo组细胞迁移数分别为(215.01±14.80)个和(389.72±19.43)个，均高于空白组[(113.73±4.70)个，均 P<0.05]。 结论:SKOV3分泌的外泌体可被NFs摄取，使其激活分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)并提高其迁移能力，说明卵巢癌细胞可能通外泌体的途径促进卵巢间质NFs向CAFs的转化，进而促进卵巢癌的发展。

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法:利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中 HSF1基因，构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1 －/－)，分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株，应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量，应用流式细胞分析方法测定细胞周期；采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值；采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率；采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率；采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平；采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量，比较各细胞株不同浓度H 2O 2处理后相对存活率，比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。 结果:基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因，Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白，HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比，H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较，差异无统计学意义( F＝0.29， P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与野生型细胞株相比，H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与野生型细胞株相比，H8和H9细胞株培养24、48、72和96 h的细胞活力均显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与野生型细胞株比较，H8和H9细胞株G1期细胞百分比显著升高，细胞周期抑制因子p53、p21的mRNA和蛋白相对表达水平显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，SA-β-gal染色阳性细胞比率显著增加，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；衰老相关炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、MCP1 mRNA相对表达量显著下降，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。H8和H9细胞株ROS含量明显高于野生型细胞株，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；H8和H9细胞株经NAC处理后p21蛋白相对表达量较未经NAC处理明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。H8和H9细胞株200、400、600、800 μmol/L H 2O 2处理条件下细胞相对存活率明显低于野生型细胞，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:敲除HSF1可下调HSP的表达，激活ROS/P53/P21通路，诱导RPE细胞衰老，并增加RPE对氧化应激刺激的敏感性。HSF1在RPE细胞中可能具有抗衰老和抗氧化调控作用。

目的:探讨Hermansky-Pudlak综合征5型(HPS-5)患者的临床和遗传学特征。方法:选取2019年10月3日于山东大学附属儿童医院就诊的1例HPS-5患儿为研究对象。收集患儿相关临床资料，应用高通量测序技术对该患儿进行基因变异分析，并进行文献复习。结果:患儿为1岁5个月女孩，临床表现为自幼眼球震颤，眼底检查发现视网膜大部分色素脱失，易瘀伤。高通量测序结果提示患儿携带 HPS5基因复合杂合变异：c.1562_1563delAA(p.F521Sfs*27)和c.1404C>A(p.C468X)，分别遗传自其父亲与母亲。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南，该两个变异均判定为致病性变异(PVS+PM2_Supporting+PM3+PP4)。已报道的18例HPS-5患者均有眼部问题，大多数有出血倾向；8例携带 HPS5基因复合杂合变异，8例携带纯合变异，2例携带双纯合变异，大多数变异为无效变异。 结论:本研究患儿为 HPS5基因变异所致HPS-5患者，高通量测序分析为疾病的诊断提供了重要工具。HSP-5患者通常具有典型眼白化病或眼皮肤白化病及出血倾向的临床表现，严重并发症较少，以 HPS5基因复合杂合变异和纯合变异为主。

目的:回顾性分析南京医科大学附属儿童医院过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura，HSP)患儿的过敏原检测情况，为临床诊治提供参考。方法:采用德国MEDIWISS过敏原体外检测系统，检测本院最近四年内接诊的1026例HSP患儿的血清过敏原特异性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E，sIgE)的含量。结果:432例HSP患儿血清sIgE检出为阳性，阳性率为42.11%(432/1026)，该432例HSP患儿血清过敏原sIgE分布以1～2级为主，学龄组患儿血清过敏原sIgE阳性率占总人数的65.74%(284/432)，远高于婴幼儿组(27例)和学龄前组(121例)( F值分别为7.71和4.05， P值均<0.05)。 结论:患儿体内sIgE水平不同程度的增高对HSP的诊治具有一定意义。控制患儿与过敏原接触是防治HSP的关键。

目的:评价解毒化斑汤结合孟鲁司特钠咀嚼片治疗儿童过敏性紫癜(henoch-sch enlein purpura, HSP)血热妄行证的疗效。方法:将符合入选标准的2017年1月-2019年12月本院HSP血热妄行证患儿80例，按随机数字表法分为2组，每组40例。对照组睡前顿服孟鲁司特钠咀嚼片，研究组在对照组基础上加服解毒化斑汤。2组均连续治疗2周。观察患儿消化道病变、皮肤紫癜、肾脏病变、关节肿痛消失时间；分别于治疗前后进行皮肤紫癜改善评分；采用ELISA法检测血清IL-6、IL-4、干扰素-γ (Interferon-γ, IFN-γ)、TNF-α水平，采用散射比浊法测定IgG、IgA、IgM水平及T淋巴细胞亚群(CD4 +、CD8 +）水平，计算CD4 +/CD8 +比值，评价临床疗效。 结果:研究组总有效率为87.5%(35/40)、对照组为67.5%(27/40)，2组比较差异有统计学意义( χ2＝4.588， P＝0.032)。研究组治疗后消化道病变、皮肤紫癜、肾脏病变、关节肿痛消失时间均早于对照组( t值分别为7.802、12.167、7.309、9.365， P值均<0.001) ；研究组治疗后血清IL-6、IL-4、IFN-γ、TNF-α水平均低于对照组( t值分别为9.319、6.738、8.221、6.553， P值均<0.001)；研究组治疗后1周[(2.75±0.69）分比（3.92±0.83）分， t＝6.856]、治疗后2周[(0.41±0.15)分比(1.55±0.37)分， t＝18.095 ]皮肤紫癜改善评分均低于对照组( P<0.01)；研究组治疗后IgG、CD4 +水平及CD4 +/CD8 +比值均高于对照组( t值分别为5.160、4.558、3.442， P值均<0.01)，IgA、IgM、CD8 +水平均低于对照组( t值分别为2.614、6.712、5.468， P值均<0.05)。治疗期间，对照组不良反应发生率为17.5% (7/40)、研究组为15.0%(6/40)，2组比较差异无统计学意义( χ2＝0.092， P＝0.762)。 结论:解毒化斑汤结合孟鲁司特钠咀嚼片可有效改善HSP血热妄行证患儿的临床症状，减轻炎症反应，提高机体免疫力，且安全性较好。

目的:探究热休克蛋白27对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)住院患者预后的预测作用。方法:以2014年6月至2016年11月在聊城市第二人民医院接受治疗的AECOPD患者246例为研究对象进行回顾性分析。根据入院时热休克蛋白27(HSP27)浓度分为2组，其中HSP27≥3 098 ng/L组68例，HSP27<3 098 ng/L组178例。采用酶联免疫吸附法检测血浆心肌肌钙蛋白T(高敏)(cTnT)和N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)及HSP27浓度。所有患者出院后随访3年，观察的终点是全因死亡率。生存分析采用Kaplan-Meier曲线法和Cox回归模型。结果:HSP27≥3 098 ng/L AECOPD患者CPR、cTnT、NT-proBNP水平显著升高( P<0.05)。与HSP27<3 098 ng/L AECOPD患者比较，HSP27≥3 098 ng/L AECOPD患者入院时和出院时HSP27水平显著升高( P<0.05)。与入院时比较，HSP27≥3 098 ng/L AECOPD患者出院时和出院后180 d HSP27水平显著降低( P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果示，HSP27≥3 098 ng/L AECOPD患者死亡风险显著升高( P<0.05)，中位生存时间为836 d。多变量Cox比例风险分析示，HSP27与AECOPD患者90 d、180 d、1年全因死亡率风险增加显著相关( P<0.05)，与AECOPD患者3年全因死亡率风险增加无显著相关性( P>0.05)。 结论:血清HSP27浓度可能预测COPD急性加重后短期生存率，但不能作为3年长期全因死亡率的独立预测因子。

目的:研究抗纤维化四肽N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）对矽肺大鼠纤维化肺组织中磷酸化热休克蛋白27（P-HSP27）及锌指家族核转录因子1（SNAI1）表达的调控，以探讨Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用。方法:于2014年12月，采用一次性支气管灌注二氧化硅（SiO 2）粉尘的方法制备大鼠矽肺动物模型，选取80只SPF级健康成年Wistar大鼠，根据随机数字表法将大鼠分为8组，每组10只。模型对照4周组（饲养4周）、模型对照8周组（饲养8周）：支气管灌注生理盐水1.0 ml/只；矽肺模型4周组（饲养4周）、矽肺模型8周组（饲养8周）：支气管灌注50 mg/ml的SiO 2混悬液1.0 ml/只；单独Ac-SDKP给药4周组（饲养4周）、单独Ac-SDKP给药8周组（饲养8周）：Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1腹腔泵给药；Ac-SDKP预防治疗组：Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1给药48 h后，支气管灌注SiO 2混悬液1.0 ml/只，饲养8周；Ac-SDKP抗纤维化治疗组：支气管灌注SiO 2混悬液1.0 ml/只4周后，给予Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1治疗4周。蛋白免疫印迹（Western blotting）检测各组P-HSP27、SNAI1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达，免疫组织化学技术检测P-HSP27和SNAI1的表达，激光共聚焦显微镜检测P-HSP27和α-SMA共定位表达。 结果:与模型对照组比较，矽肺模型组大鼠矽肺纤维化区域P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达增强，差异均有统计学意义（ P<0.05）。给予Ac-SDKP干预后，与矽肺模型8周组比较，Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组大鼠P-HSP27、SNAI1、α-SMAⅠ型和Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。而单独Ac-SDKP给药组与模型对照组P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达无明显变化，差异均无统计学意义（ P>0.05）。激光共聚焦结果显示，矽肺模型组大鼠肺组织表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞多于模型对照组；与矽肺模型组比较，Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞减少；与模型对照8周组比较，矽肺模型8周组结节中有部分P-HSP27和α-SMA表达的双阳性细胞。 结论:Ac-SDKP可能通过调节P-HSP27/SNAI1通路发挥抗矽肺纤维化的作用。

目的:探讨肾损伤标志性蛋白在烧伤延迟复苏患者急性肾损伤(AKI)早期诊断中的价值。方法:采用回顾性病例对照研究方法。2018年5月—2020年5月，郑州市第一人民医院收治43例符合入选标准的烧伤延迟复苏患者，其中男27例、女16例，年龄18～75(35±3)岁，按伤后7 d内是否发生AKI分为AKI组23例及非AKI组20例。比较2组患者性别、年龄、深Ⅱ度烧伤面积、Ⅲ度烧伤面积、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ，统计伤后12、24、48 h补液量和血清肌酐及伤后12、24、48、72、120、168 h血清白蛋白/纤维蛋白原比值(AFR)，尿热休克蛋白70(HSP70)、金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)×胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)。对数据行Mann-Whitney U检验、重复测量方差分析、独立样本 t检验、 χ2检验及Bonferroni校正，行多因素logistic回归分析筛选预测AKI发生的自变量，绘制预测烧伤延迟复苏患者AKI发生的受试者操作特征曲线，计算诊断AKI的曲线下面积(AUC)、最佳阈值及最佳阈值下的敏感度、特异度。 结果:2组患者性别、年龄、深Ⅱ度烧伤面积、Ⅲ度烧伤面积、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ相近( χ2＝1.98， t＝1.98、1.99、1.99、1.99， P>0.05)。AKI组患者伤后24、48 h补液量明显少于非AKI组( t＝15.37、6.51， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48 h血清肌酐明显高于非AKI组( Z＝2.16、5.62、6.72， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h血清AFR明显低于非AKI组( t＝16.14、35.35、19.60、20.47、30.20、20.17， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h尿HSP70为(6.89±0.87)、(6.42±0.73)、(5.81±0.72)、(5.17±0.56)、(4.63±0.51)、(3.89±0.51)μg/L，明显高于非AKI组的(3.89±0.75)、(3.57±0.63)、(2.66±0.41)、(1.83±0.35)、(1.48±0.19)、(1.28±0.19)μg/L， t＝12.00、13.61、17.39、22.98、26.34、21.59， P<0.01。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h尿TIMP-2×IGFBP-7、NGAL明显高于非AKI组( t＝26.94、101.11、35.50、66.89、17.34、14.30，14.00、13.78、12.32、14.80、21.36、22.62， P<0.01)。将伤后12 h尿HSP70和血清AFR，伤后24 h尿TIMP-2×IGFBP-7、NGAL纳入多因素logistic回归分析(比值比＝2.42、3.47、7.52、5.61，95%置信区间＝1.99～2.95、1.86～3.92、2.87～9.68、2.14～14.69， P<0.01)。对43例烧伤延迟复苏患者，伤后12 h血清AFR预测AKI发生的受试者操作特征曲线AUC为0.739(95%置信区间＝0.576～0.903)，最佳阈值为9.90，敏感度为82%，特异度为90%；伤后12 h尿HSP70 AUC为0.990(95%置信区间＝0.920～1.000)，最佳阈值为1.40 μg/L，敏感度为98%，特异度为96%；伤后24 h尿TIMP-2×IGFBP-7 AUC为0.715(95%置信区间＝0.512～0.890)，最佳阈值为114.20 μg 2/L 2，敏感度为91%，特异度为95%；伤后24 h尿NGAL AUC为0.972(95%置信区间＝0.860～1.000)，最佳阈值为78 μg/L，敏感度为95%，特异度为96%。 结论:尿HSP70、NGAL对烧伤延迟复苏导致的AKI具有较高诊断价值。

目的:研究三氧化二钐（Sm 2O 3）微粒对大鼠肺组织的影响，并与相同剂量的二氧化硅（SiO 2）微粒比较，以期寻找尘肺病的早期筛检参考指标。 方法:于2018年10月，将72只SPF级健康雄性大鼠以完全随机分组法分为对照组、SiO 2组、Sm 2O 3组，采用一次性非暴露式气管灌注法分别向各组大鼠肺部灌注2.0 ml/kg生理盐水和280 mg/kg的SiO 2、Sm 2O 3微粒悬浮液。用苏木精-伊红（HE）染色法染色大鼠肺脏，观察大鼠肺组织病理改变。采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中SNAIL同源物1（SNAI1）、SNAIL同源物2（SNAI2）、热休克蛋白-27（HSP-27）浓度。取染尘56 d Sm 2O 3组、对照组大鼠肺组织0.5 g进行长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA（circRNA）筛检。 结果:染尘7 d时，SiO 2组和Sm 2O 3组大鼠肺泡排列紊乱，围绕支气管壁可见淋巴组织聚集增生；14 d时SiO 2组有大量淋巴细胞浸润，Sm 2O 3组分散存在少量含Sm 2O 3的巨噬细胞及纤维化结节；28 d时SiO 2组出现少量淋巴细胞浸润，Sm 2O 3组部分区域可见纤维化结节；56 d时SiO 2组有少量纤维母细胞增生，Sm 2O 3组可见大量含灰黑色物质的纤维化结节。不同染尘时间各组大鼠肺脏系数差异均无统计学意义（ P>0.05）。染尘14 d时SiO 2组大鼠血清中SNAI1、SNAI2含量低于对照组，Sm 2O 3组血清中SNAI2含量低于对照组，但SNAI1、SNAI2含量高于SiO 2组（ P<0.05）；染尘28 d时SiO 2组HSP-27含量低于对照组（ P<0.05）。染尘56 d后，Sm 2O 3组HSP-27含量低于对照组（ P<0.05）。染尘56 d后，Sm 2O 3组lncRNA上调148个、下调725个，circRNA上调16个、下调153个。 结论:Sm 2O 3可致大鼠肺损伤，早期即可检测到SNAI2含量的改变，可以作为尘肺病的早期筛检参考指标。大鼠染尘56 d后lncRNA、circRNA表达有差异，可能与尘肺病的发病机制有关。

目的:探讨敲低乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)对食管鳞状细胞癌(以下简称食管鳞癌)KYSE－450细胞迁移的影响及分子机制。方法:慢病毒转染法建立对照组细胞系sh－NC和敲低ACC1的细胞系sh－ACC1，脂质体法转染人热休克蛋白27(HSP27) siRNA建立对照及敲低HSP27的细胞系si－NC和si－HSP27，选择性乙酰基转移酶p300/CBP抑制剂C646抑制组蛋白乙酰化并设置对照组DMSO。Transwell法检测细胞迁移能力，实时荧光定量聚合酶链反应检测HSP27 mRNA的表达，Western blot检测ACC1、H3K9ac、HSP27和上皮－间充质转化相关蛋白E－cadherin和Vimentin的表达。结果:sh－NC组细胞中ACC1的表达水平高于sh－ACC1组( P<0.01)。sh－NC组细胞迁移数[(159.00±24.38)个]低于sh－ACC1组[(361.80±26.81)个， P<0.01]，sh－NC组细胞中E－cadherin蛋白表达水平高于sh－ACC1组，Vimentin蛋白表达水平低于sh－ACC1组(均 P<0.05)。sh－NC+si－NC组细胞迁移数[(189.20±16.02)个]低于sh－ACC1+si－NC组[(371.60±38.40)个， P<0.01]，sh－NC+si－NC组细胞迁移数高于sh－NC+si－HSP27组[(83.80±24.38)个， P<0.01]，sh－ACC1+si－NC组迁移细胞数高于sh－ACC1+si－HSP27组[(152.40±24.30)个， P<0.01]。sh－NC+si－NC组细胞中E－cadherin蛋白表达水平低于sh－NC+si－HSP27组，高于sh－ACC1+si－NC组，Vimentin蛋白表达水平高于sh－NC+si－HSP27组，低于sh－ACC1+si－NC组(均 P<0.05)；sh－ACC1+si－NC组细胞中E－cadherin、Vimentin蛋白表达水平与sh－ACC1+si－HSP27组比较，差异有统计学意义均(均 P<0.01)。C646 20 μmmo/L处理细胞24 h后，sh－NC+DMSO组细胞迁移数[(190.80±11.95)个]低于sh－ACC1+DMSO组[(395.00±17.10)个， P<0.01]，sh－NC+DMSO组细胞迁移数低于sh－NC+C646组[(256.20±23.32)个， P<0.01]，sh－ACC1+DMSO组细胞迁移数高于sh－ACC1+C646组[(87.80±11.23)个， P<0.01]。sh－NC+DMSO组细胞中H3K9ac、HSP27、E－cadherin、Vimentin蛋白表达水平与sh－ACC1+DMSO组和sh－NC+C646组比较，差异均有统计学意义(均 P<0.01)，sh－ACC1+DMSO组细胞中H3K9ac、HSP27、E－cadherin、Vimentin蛋白表达水平与sh－ACC1+C646组比较，差异有统计学意义均(均 P<0.01)。 结论:敲低ACC1通过增加组蛋白乙酰化上调HSP27促进食管鳞癌KYSE－450细胞迁移。